SREBP-1c基因过表达细胞模型的构建及对HepG2细胞脂滴含量的影响

目的：构建SREBP-1c过表达HepG2细胞模型并观察其对脂滴含量的影响,为进一步深入研究肝癌脂滴代谢异常机制提供细胞模型。方法：采用DNA重组技术,将SREBP-1c基因克隆至慢病毒表达载体pLenti 6.3/V5中,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带目的基因的质粒pLenti6.3-SREBP-1c共转染293T细胞,收集上清,感染HepG2细胞。通过Real-time PCR和Western blot对细胞株进行鉴定。采用免疫荧光检测HepG2细胞中脂滴的数量、大小及细胞内甘油三酯的含量。结果：成功构建了过表达SREBP-1c基因的慢病毒载体pLenti6.3-SREBP-1c,转染后HepG2细胞中可见明显的SREBP-1c蛋白表达。Real-time PCR检测结果显示转染SREBP-1c基因的HepG2细胞中SREBP-1c mRNA水平较对照组升高了约11.4倍。Western blot结果显示SREBP-1c蛋白水平较对照组提高3.2倍。免疫荧光显示过表达SREBP-1c能够明显增加HepG2细胞内脂滴的数量和大小。细胞内甘油三酯定量结果显示甘油三酯含量较对照组明显升高（P < 0.01）。结论：成功构建了SREBP-1c基因过表达的重组慢病毒载体及其稳定转染细胞株。高表达SREBP-1c的HepG2细胞增加了细胞中脂滴的数量、大小和甘油三酯的含量,可用于从脂滴代谢方面对肝癌发病分子机制的研究。     

甲醛对HepG2细胞脂肪代谢的影响

目的： 探讨甲醛对HepG2细胞甘油三酯 (triglyceride,TG)含量的影响及其可能机制。方法：以0.02、0.1、0.5、2.5、12.5 mmol/L的甲醛 (formaldehyde,FA)分别处理人肝癌HepG2细胞24和48 h,采用CCK-8法检测细胞活性,GPO-POD 酶法测定细胞内TG含量。另分别以0.004、0.02、0.1 mmol/L的甲醛处理人肝癌HepG2细胞24和48 h,采用Western blot法检测肉碱棕榈酰转移酶1 (carnitine palmitoyl transferase 1,CPT1)、固醇调节元件结合蛋白-1c (sterol regulatory element-binding protern-1c,SREBP-1c)、腺苷酸核糖基化因子1 (ADP-ribosylation factor 1,Arf1)和包被蛋白Ⅰ (coat protein comlex Ⅰ,COPⅠ)的蛋白表达水平。结果：与对照组比较,0.5～12.5 mmol/L FA染毒24 h或0.1～12.5 mmol/L染毒48 h 时可显著降低HepG2细胞活性 (P均<0.05);0.1 mmol/L FA染毒24 h,或者0.1 和0.02 mmol/L FA染毒48 h,均可致HepG2细胞内TG含量显著升高 (P均<0.05);FA染毒48 h引起肝细胞内CPT1表达水平明显降低 (P均<0.05),SREBP-1c和COPⅠ表达水平在染毒24和48 h后均增高 (P均<0.05),FA染毒24 h后 Arf1表达水平明显增加 (P<0.05)。结论：FA接触可引起HepG2细胞内TG含量增加,其机制可能与脂肪酸β氧化受到抑制和脂肪合成增加有关。     

铁超载对非酒精性脂肪肝病HepG2细胞模型中Hepcidin和 Fpn-1的影响

目的：探讨铁超载对非酒精性脂肪肝病（NAFLD）HepG2细胞模型中铁代谢指标Hepcidin和Fpn-1的影响。方法：采用四甲基噻唑蓝（MTT）法分别检测浓度均为0.062 5、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mmol/L的油酸（OA）和硫酸亚铁铵[Fe（NH₄）₂·（SO₄）₂·6H₂O,下称Fe]对HepG2细胞活力的影响,确定OA和Fe联合给药浓度。采用0.5 mmol/L OA联合不同浓度（0、0.125、0.25、0.5 mmol/L）的Fe诱导HepG2细胞建立NAFLD 细胞模型,并设阴性对照组（未经药物处理的细胞）和0.5 mmol/L Fe单独处理组为对照,测定细胞内甘油三酯（TG）和铁蛋白（Fn）含量。采用实时荧光定量PCR（qPCR）法和Western blot法测定细胞中铁调素（Hepcidin）、膜铁转运蛋白（Fpn-1） mRNA和蛋白的表达。结果：与阴性对照组相比,0.5 mmol/L的OA,0.125、0.25、0.5 mmol/L的Fe对细胞存活率无明显影响（P > 0.05）。与对照组和0.5 mmol/L OA组相比,0.5 mmol/L OA与各浓度Fe联合作用时,随着铁浓度增大,细胞内的TG和铁蛋白（Fn）含量逐渐增加,差异具有统计学意义（P < 0.05）。与对照组和0.5 mmol/L OA组相比,0.5 mmol/L OA联合不同浓度Fe处理后Hepcidin的mRNA和蛋白表达均明显下降（P < 0.05）;0.5 mmol/L OA联合不同浓度Fe处理后Fpn-1 mRNA的表达均明显上调（P < 0.05）;与对照组相比,0.5 mmol/L Fe组、0.5 mmol/L OA联合0.25、0.5 mmol/L Fe组Fpn-1蛋白水平明显降低（P < 0.05）。结论：0.5 mmol/L OA联合不同浓度Fe处理时可引起细胞发生脂质沉积,使体内正常铁代谢发生紊乱,Hepcidin的mRNA和蛋白表达均明显下降,Fpn-1 mRNA表达上调而蛋白表达下降,进一步加重NAFLD的进展。     

siRNA干扰NF-кB家族成员表达抑制人肝癌HepG2细胞表达NKG2DLs

目的：探讨舒尼替尼诱导人肝癌HepG2细胞表达的自然杀伤细胞2族成员D配体（natural killer group 2 member D ligands,NKG2DLs）与核因子kappa B（nuclear factor B kappa, NF-κB）信号通路之间的相互作用。方法：常规体外培养HepG2细胞,利用实时荧光定量PCR检测1 μmol/L舒尼替尼处理HepG2细胞24 h前后NF-κB基因家族成员 mRNA的表达情况,利用计算机辅助设计并合成NF-κB1、NF-κB2和RelB siRNA引物,通过脂质体法将目的基因siRNA转染于HepG2细胞,荧光显微镜观察转染情况,实时荧光定量PCR检测干扰效率,Western blotting检测siRNA转染前后HeG2细胞内NF-κB1、NF-κB2和RelB蛋白表达,流式细胞术检测siRNA前后HepG2细胞NKG2DLs表达率。结果： 实时荧光定量PCR结果显示,舒尼替尼处理HepG2细胞后,NF-κB1、NF-κB2和RelB mRNA表达水平升高,主要以NF-κB2 mRNA和RelB mRNA升高为主。荧光显微镜观测siRNA转染后HepG2细胞红色荧光表达率约为60%,干扰效率达95%以上。siRNA转染后HepG2细胞内NF-κB1、NF-κB2和RelB蛋白表达水平明显下降,siRNA转染+药物组NKG2DLs表达率明显低于药物处理组（P<0.05）。结论： 首次揭示了舒尼替尼通过NF-κB旁路途径诱导肿瘤细胞表达NKG2DLs。     

SREBP-1 及其抑制剂调节肿瘤代谢的研究进展

脂类作为三大营养物质之一,参与能量的供应和储存、细胞的构建和作为活性分子参与细胞生命活动。脂类代 谢异常是肿瘤细胞的重要特征之一,主要表现为脂肪酸从头合成及氧化代谢活跃,这些改变与肿瘤信号通路增强,相关代 谢酶改变等密切相关。目前,脂代谢通路中相关酶及转录因子成为肿瘤治疗的潜在药物靶点。SREBP-1 是细胞内调控脂类 代谢的关键转录因子,主要调控胆固醇和脂肪酸合成中关键酶基因的表达,调节脂质新生。SREBP-1 及其调控的脂肪酸合 成途径通常在正常组织和细胞中的表达和活性较低,在肿瘤细胞中,SREBP-1 被激活,其下游基因的表达也升高,在加快 胞内脂肪酸和胆固醇合成的同时,还通过细胞内各信号通路影响肿瘤细胞脂代谢、糖代谢以及氨基酸代谢,为维持肿瘤细 胞的增殖和转移提供额外的能源和物质。运用遗传和药理手段抑制肿瘤细胞中SREBP-1 的表达和活化,可显著抑制体内 和体外多种肿瘤细胞的增殖和迁移。因此,SREBP-1 将是一个有潜力的针对肿瘤细胞脂代谢的肿瘤治疗靶标。本文综述了 SREBP-1 在肿瘤中的异常表达对肿瘤信号通路和物质代谢的影响以及 SREBP-1 抑制剂在肿瘤中的研究进展。     

水飞蓟素对缺氧人肝癌HepG⁃2细胞HIF⁃1α及MDR1 表达的影响

目的 探讨水飞蓟素(SM)对缺氧条件下人肝癌HepG‐2细胞中缺氧诱导因子‐1α (HIF‐1α)和多耐药基因1(MDR1)表达 的影响。 法 不同浓度的SM（0、10、20、40 mg/L）与浓度梯度的化疗药物(多柔比星、索拉菲尼、顺铂)处理HepG‐2细胞后应用四 甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度SM对HepG‐2细胞化疗药物敏感性的影响；在缺氧条件下，分别用0、10、20、40 mg/L 的 SM处理HepG‐2细胞8 h后，应用RT-PCR检测不同浓度SM对HepG‐2细胞的HIF‐1α及MDR1 mRNA表达水平的影响，利用蛋白 质印迹法检测不同浓度SM对HepG‐2细胞的HIF‐1α及P‐糖蛋白（P‐Gp)蛋白表达水平的影响。结果 随着SM浓度的增加，HepG‐2 细胞对化疗药物多柔比星、索拉菲尼和顺铂的敏感性逐渐增强；与对照组相比，10、20、40 mg/L SM处理的HIF‐1α mRNA表达量 差异无统计学意义（P>0.05)，而MDR1 mRNA表达量呈浓度依赖性降低（P<0.05)，10、20、40 mg/L SM处理的HIF‐1α与P‐Gp蛋白 表达水平呈浓度依赖性降低（P<0.05)。结论 SM可能通过在转录后水平抑制HepG‐2细胞HIF‐1α的蛋白表达而降低MDR1的mRNA 与蛋白表达，从而降低肝癌细胞的耐药性。     

竹节香附素A对HepG2细胞缺氧诱导因子-1α基因和蛋白表达的影响

目的:探讨竹节香附素A对缺氧条件下人肝癌细胞株(HepG2)细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)基因和蛋白表达的影响.方法:取体外低氧环境下HepG2细胞进行不同干预:特定浓度(10 μg/ml)竹节香附素A不同作用时间(0 h、6 h、12 h、24 h);不同浓度(0、5、10、20 μg/ml)竹节香附素A特定作用时间(24 h)处理,通过半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测HepG2细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达变化情况.结果:体外低氧环境下HepG2细胞可见HIF-1α mRNA和蛋白强表达,特定浓度(10 μg/ml)竹节香附素A可显著抑制HIF-1α mRNA和蛋白的表达水平,药物作用0 h、6 h、12 h、24 h时HIF-1α mRNA 条带灰度值(A/A0)分别为0.73±0.08、0.44±0.12、0.24±0.09、0.07±0.03,差异具有统计学意义(P<0.01);HIF-1α蛋白A/A0比值分别为2.31±0.33、1.70±0.17、1.30±0.96、0.09±0.13,差异具有统计学意义(P<0.01).不同浓度竹节香附素A特定作用时间(24 h)处理可显著抑制HIF-1α mRNA和蛋白的表达水平,药物浓度0、5、10、20 μg/ml处理,HIF-1α mRNA A/A0比值分别为0.65±0.07、0.43±0.08、0.19±0.03、0.08±0.02,差异具有统计学意义(P<0.01);HIF-1α蛋白A/A0比值分别为0.84±0.08、0.39±0.06、0.28±0.04、0.08±0.03,差异具有统计学意义(P<0.01).结论:竹节香附素A对缺氧条件下肝癌HepG2细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达具有抑制作用,并存在时间-剂量依赖性效应.     

NCX1在肝癌中的表达、调控Ca2+浓度及其对肝癌细胞增殖和迁移的影响

背景与目的：钠钙交换体亚型1(Na+-Ca2+ exchanger isoform 1,NCX1)可通过对细胞Ca2+平衡的调节参与癌症的发生,但是否参与肝癌的发生、发展及其作用机制的研究鲜见报道。该研究旨在探讨NCX1在肝癌中的表达变化,对人肝癌细胞HepG2增殖、迁移能力的影响及其可能的机制。方法：运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测NCX1 mRNA及蛋白在人正常肝细胞株LO2、肝癌细胞株HepG2、人正常肝组织和原发性肝细胞癌患者癌组织中的表达。采用共聚焦显微镜技术观察NCX1在细胞外无钠溶液刺激活化后,对正常肝细胞LO2及肝癌细胞HepG2中钙离子浓度的调控。采用MTT法、细胞划痕实验检测NCXl特异性的阻断剂KB-R7943对人肝癌细胞HepG2增殖、迁移的影响。结果：在肝癌细胞株HepG2和肝细胞癌组织中,NCX1 mRNA和蛋白质的表达均高于正常肝细胞株LO2和正常肝组织(P<0.05)。共聚焦显微镜实验发现,细胞外无钠溶液可以激活细胞内钙升高,正常肝细胞LO2及肝癌细胞HepG2细胞内钙离子浓度均增高,但肝癌细胞HepG2细胞内钙离子增高的幅值明显高于LO2细胞(P<0.05),NCXl特异性阻断剂KB-R7943可以显著阻断胞外无钠诱导的细胞内钙离子升高(P<0.05)。KB-R7943可以显著抑制肝癌细胞HepG2的增殖及迁移(P<0.05)。结论：原发性肝癌中NCX1的表达量上调,NCX1的活化可以调节细胞内钙变化,抑制NCX1的活性可以进一步抑制肝癌细胞的增殖和迁移。这提示NCX1可能在原发性肝癌的发生、发展中起了重要的作用。     

Thy-1 通过调控Notch1 通路促进肝癌细胞EMT进程

目的: 探索细胞表面抗原Thy-1 通过调控Notch1 通路促进肝癌HepG2 和MHCC-97 细胞上皮间质转化（EMT）。方法：选用具有高转移特性的MHCC-97 细胞和低转移特性的HepG2 细胞作为研究对象,WB检测细胞内Thy-1、Notch1 蛋白表达水平。用重组慢病毒转染MHCC-97 和HepG2 细胞,构建高表达与低表达Thy-1 蛋白的细胞,再分别用Notch1 激动剂rhNF-κB（1gsu/ml）和Notch1 抑制剂MW167（100 μmol/L）处理细胞24 h。Transwell 实验检测Thy-1 表达变化、rhNF-κB和MW167 处理对细胞侵袭能力的影响,qPCR检测对Notch1 mRNA表达的影响,WB实验检测细胞内EMT相关蛋白表达的影响。结果：MHCC-97细胞中Thy-1、Notch1 蛋白表达量均高于HepG2 细胞（P<0.05）。成功构建Thy-1 过表达的HepG2 细胞和Thy-1 低表达的MHCC-97 细胞。与亲本HepG2 细胞相比,Thy-1 过表达HepG2 细胞侵袭能力显著增强[ （475.78±80.37）vs（183.23±55.34）个,P<0.05）]、波形蛋白表达显著升高（P<0.05）、上皮钙黏素蛋白表达显著降低（P<0.05）、Notch1 mRNA表达水平显著升高（P<0.05）;与亲本MHCC-97 细胞相比,Thy-1 沉默的MHCC-97 细胞侵袭能力显著降低[ （237.44±62.18）vs（543.56±77.94）个,P<0.05）]、波形蛋白表达显著降低（P<0.05）、上皮钙黏素蛋白表达显著升高（P<0.05）、Notch1 mRNA表达水平显著降低（P<0.05）。而Notch1 激活剂或抑制剂处理上述肝癌细胞可逆转由于Thy-1 沉默或过表达所造成的改变。结论：Thy-1 可通过调控Notch1 表达影响肝癌HepG2和MHCC-97 细胞的EMT。     

HIF-1α和HIF-2α在肝癌细胞中的时相差异表达

背景与目的:缺氧诱导因子2α(hypoxia inducible factor-2 alpha, HIF-2α)与缺氧诱导因子1α结构功能相似却不可相互替代;两者在缺氧过程中的表达不一致.本研究旨在检测缺氧状态下肝癌细胞中HIF-2α和HIF-1α的时相表达差异并探讨其可能的调节机制和意义.方法:以1%低氧培养箱模拟细胞低氧环境,检测人肝癌SMMC- 7721细胞中HIF-1α和HIF-2α mRNA量和蛋白量,以及反义HIF-1α(natural antisense hypoxia inducible factor-1α,aHIF)的mRNA量.同时应用氯化钴(CoCl2)和转录抑制剂5,6-二氯苯并咪唑1-beta-D-呋喃核糖苷(5,6-dichlorobenzimida- zole-1-beta-d- ribo furanoside,DRB)检测HIF-1α和HIF-2α mRNA的半衰期,评价HIF-1α和HIF-2α mRNA的稳定性.结果:急性缺氧迅速诱导HIF-1α和HIF-2α蛋白在细胞内堆积.随着缺氧时间延长HIF-1α mRNA的稳定性下降,其蛋白表达降低,而HIF-2α和aHIF蛋白表达持续增高.结论:HIF-2α可能在肿瘤的放疗和化疗抗性以及与肿瘤侵袭和转移方面起着重要作用.aHIF参与了HIF-1α mRNA的调节.     

体内诱导艾氏腹水瘤细胞的耐药性研究

肿瘤细胞耐药性的存在是临床化疗失败的主要原因之一。本实验在小鼠体内用阿霉素（ADR）诱导艾氏腹水瘤细胞（EHR）的耐药性，探讨细胞产生耐药性的机理。HPLC法测定细胞内药物浓度．结果表明耐药细胞─—EHR/ADR细胞内ADR积聚低于EHR细胞，而对ADR外排快于EHR细胞；异博定（VER）增加EHR／ADR细胞对ADR的摄取并阻滞其外排．而对EHR影响不大，揭示EHR／ADR细胞具有MDR特性。     

洛铂联合多西他赛行肿瘤细胞减灭术加腹腔热灌注化疗治疗腹膜癌的临床观察

目的 分析洛铂联合多西他赛行肿瘤细胞减灭术（cytoreductive surgery, CRS）加腹腔热灌注化疗（hyperthermic intraperitoneal chemotherapy, HIPEC）治疗腹膜癌（peritoneal carcinoma, PC）的围手术期安全性及疗效。 方法 PC患者行CRS+HIPEC治疗,药物为洛铂50 mg/m2、多西他赛60 mg/m²,加入12 000 ml 0.9%氯化钠溶液加热至（43±0.5）℃持续灌注60 min。记录术后6天体温和心率变化、围手术期不良事件、血常规及血生化指标、术后患者恢复情况及生存结果。结果 90例PC患者行95次CRS+HIPEC,手术时间180~450 min (中位数485 min）;术后6天最高体温、心率分别为36.4℃~38.6℃（中位数37.5℃）、76~124 bpm（中位数100 bpm）,严重不良事件16例,包括围手术期死亡2例。中位生存期20.8月（95%CI: 13.1~25.8月）,1、3、5年生存率分别为75.6%、45.6%、43.3%。 结论 洛铂联合多西他赛进行CRS+HIPEC治疗PC安全性可接受,有助于延长患者生存期。     

两种不同方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效比较(英文)

Objective: The aim of this study was to analyze and compare the recent efficacy and toxicity of a three-drug platinum-based regimen (A regimen): [cisplatin (DDP) + gemcitabine (GEM) + vinorelbine (NVB)] and a two-drug combination without a platinum drug (B regimen): GEM + NVB, which were used to treat 55 advanced non-small cell lung cancer (NSCLC) patients, in a bid to provide a guidance for clinical treatment. Methods: Twenty-four cases of advanced NSCLC (stage III-IV) patients were treated with A regimen ...     

参麦注射液对阿霉素所致大鼠心肌损伤保护作用的实验研究

目的　观察参麦注射液 (SMI)对阿霉素 (ADM )诱导大鼠心肌损伤的保护作用和抗氧化作用。方法　选用ADM诱导大鼠心肌损伤模型。SD大鼠 60只 ,随机分为 3个组 ,每组 2 0只 ,分别为正常组、治疗组、对照组。正常组 :实验第 1～ 9天注射生理盐水 ,每天 3ml/kg ,1次 /天。治疗组 :实验第 1～ 9天注射参麦注射液 ,每天 3ml/kg ,1次 /天 ,第 4天注射阿霉素 ,隔天 1次 ,连用 3次 ,用生理盐水配置成 1mg/ml,每次 3mg/kg。对照组实验 1～ 9天注射生理盐水 ,每天 3ml/kg ,1次 /天。第 4天注射阿霉素 ,以后隔天 1次 ,连用 3次 ,用生理盐水配置成 1mg/ml,每次 3mg/kg。到期测定血丙二醛 (MDA )含量和超氧化物歧化酶(SOD )活性 ,并进行心肌病理检查。结果　对照组MDA水平明显高于治疗组 ,对照组SOD水平则显著低于治疗组 ,即加用SMI可提高SOD活性 ,降低MDA含量。SMI能明显减轻大鼠心肌损伤 ,对照组与治疗组比较 ,治疗组心肌损伤明显减轻 ,治疗组与正常组比较无显著性差异。参麦注射液有抗氧化作用 ,与对照组比较 ,血SOD水平升高 ,MDA水平降低 ,心肌病理计分下降。结论参麦注射液有抗氧化作用和对阿霉素所引起的心脏毒性具有保护作用 ,为临床寻找有效的阿霉素所致心肌损伤保护药物提供良好的客观依据 ,值得临床推广应用     

鼻咽癌患者放射性骨坏死引起的正电子显像假阳性结果1例及文献复习

目的:探讨鼻咽癌(NPC)患者放射性骨坏死(osteoradionecrosis,ORN)引起正电子假阳性结果的原因及避免因此引发诊断错误的方法。方法:回顾性分析1例放疗后的鼻咽癌患者,行鼻咽部MRI及正电子显像后,再行组织病理学检查,对三种结果进行分析、比较。结果:MRI及正电子显像均诊断患者颅底区域肿瘤复发,组织病理学结果则显示鼻咽部病灶为放射性骨坏死。因此正电子扫描结果为假阳性结果。结论:鼻咽癌患者放疗后所致的放射性骨坏死容易引起正电子显像假阳性结果并可能引发不必要的治疗,因此NPC患者的正电子图像,对于可能的局限性肿瘤复发诊断,应该非常慎重。     

Suppression of NAD(P)H-quinone oxidoreductase 1 enhanced the susceptibility of cholangiocarcinoma cells to chemotherapeutic agents

Background

Cholangiocarcinoma (CCA) is highly resistant to most of the known chemotherapeutic treatments. NAD(P)H-quinone oxidoreductase 1 (NQO1) is an antioxidant/detoxifying enzyme recently recognized as an important contributor to chemoresistance in some human cancers. However, the contribution of NQO1 to chemotherapy resistance in CCA is unknown.

Methods

Two CCA cell lines, KKU-100 and KKU-M214, with high and low NQO1 expression levels, respectively, were used to evaluate the sensitivity to chemotherapeutic agents; 5-fluorouracil (5-FU), doxorubicin (Doxo), and gemcitabine (Gem). NQO1 and/or p53 expression in KKU-100 cells were knocked down by siRNA. NQO1 was over-expressed in KKU-M214 cells by transfection with pCMV6-XL5-NQO1 expression vector. CCA cells with modulated NQO1 and/or p53 expression were treated with chemotherapeutic agents, and the cytotoxicity was assessed by SRB assay. The mechanism of enhanced chemosensitivity was evaluated by Western blot analysis.

Results

When NQO1 was knocked down, KKU-100 cells became more susceptible to all chemotherapeutic agents. Conversely, with over-expression of NQO1 made KKU-M214 cells more resistant to chemotherapeutic agents. Western blot analysis suggested that enhanced chemosensitivity was probably due to the activation of p53-mediated cell death. Enhanced susceptibility to chemotherapeutic agents by NQO1 silencing was abolished by knockdown of p53.

Conclusions

These results suggest that inhibition of NQO1 could enhance the susceptibility of CCA to an array of chemotherapeutic agents.     

Proficiency of DNA repair genes and microsatellite instability in operated colorectal cancer patients with clinical suspicion of lynch syndrome

Background

Lynch syndrome (LS) diagnosis is underestimated, and most of the patients remain undetected after colorectal resections. The study aims to assess the frequency of LS in patients undergoing surgical treatment for colorectal cancer (CRC).

Methods

A total of 458 CRC patients were operated from January 2005 to December 2008. Positive CRC family history (FH) was present in 118 (25.8%) patients. Histologic sections were reviewed for microsatellite instability (MSI) criteria (Bethesda guidelines), immunohistochemical (IHC) analysis for MLH1, MSH2, MSH6, PMS2 proteins, through the avidin-biotin-peroxidase complex, MSI (BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24 and MONO-27) and BRAF somatic mutation.

Results

Of the 118 patients with FH, 61 (51.69%) met at least one of the revised Bethesda criteria. IHC was abnormal in 8 (13.1%) and MSI in 12 patients (20%). BRAF was negative in all cases. MSI histopathological included: intratumoral lymphocytes (47.5%), expansive tumors (29.5%) mucinous component (27.8%) and Crohn’s like reaction in (14.7%). There was an association between the revised Bethesda criteria with: sex, mucinous histology and Crohn’s like reaction; MSI and IHC with PMS2 and MLH1. Revised Bethesda criteria 4 had 10.6 increased chances to display positive MSI. We have proposed a score to contribute as a practical tool in the diagnosis of LS.

Conclusions

The frequence of LS in resected CRC patients was 2.6%. The criterion 4 Revised Bethesda was associated more strongly with the presence of MSI.     

Marked radiosensitization of cells in culture to X ray by 5-chlorodeoxycytidine coadministered with tetrahydrouridine, and inhibitors of pyrimidine biosynthesis

Our approach to overcome the problem of rapid catabolism and general toxicity encountered with 5-halogenated analogues of deoxyuridine (5-bromo, chloro or iododeoxyuridine), which has limited their use as tumor radiosensitizers, is to utilize 5-chlorodeoxycytidine (CldC) with tetrahydrouridine (H4U). We propose that CldC, coadministered with H4U, is metabolized in the following manner: CldC----CldCMP----CldUMP---- ----CldUTP----DNA. All the enzymes of this pathway are elevated in many human malignant tumors and in HEp-2 cells. In X irradiation studies with HEp-2 cells, limited to 1 or 2 radiation doses, we have obtained 3.0 to 3.8 apparent dose enhancement ratios (these represent upper limits) when cells are preincubated with inhibitors of pyrimidine biosynthesis: N-(Phosphonacetyl)-L-aspartate (PALA) and 5-fluorodeoxyuridine (FdU) or 5-fluorodeoxycytidine (FdC) + H4U. Optimum conditions for radiosensitization are: PALA (0.1 mg/ml) 18-20 hr prior to FdU (0.1 microM) or FdC (0.02 microM) + H4U (0.1 mM) followed 6 hr later by CldC (0.1-0.2 mM) + H4U (0.1 mM) for 56-68 hr. Viabilities of 10 +/- 4% to 15 +/- 1% (+/- S.E.) were obtained for drug-treated unirradiated cells. Enzymatic studies indicate that this toxicity may be tumor selective. CldC + H4U alone (at these concentrations) results in 20% substitution of CldU for thymidine in DNA (determined by HPLC analysis). Preliminary toxicity studies indicate that mice will tolerate treatment protocols involving a single dose of PALA (200 mg/kg) followed by a dose of FdU (50 mg/kg) and 3 cycles of CldC (500 mg/kg) + H4U (100 mg/kg) at 10 hour intervals, with marginal weight loss (4%). In this approach we seek to obtain preferential conversion of CldC to CldUTP at the tumor site by taking advantage of quantitative differences in enzyme levels between tumors and normal tissues.     

蛋白激酶C的下调与KBV200细胞多药耐药性的关系

目的　探讨蛋白激酶C (PKC)在肿瘤多药耐药 (MDR)中的作用。方法　3 2 P掺入法测定PKC的活性 ;Westernblot法检测KBV2 0 0细胞株PKC亚型的表达和亚细胞分布 ;实验组用十字孢碱 (SP)预孵育KBV2 0 0细胞 ;MTT法检测耐药株KBV2 0 0细胞的耐药性。结果　SP可下调膜组分和浆组分的PKC活性及总活性 ;使PKCα膜组分和浆组分的表达均降低 ,PKCβ的膜组分消失 ,浆组分PKCβ的表达稍增强 ,PKCε的膜组分和浆组分表达无变化 ;SP可降低VCR、ADR对KBV2 0 0细胞的IC50 值 (P <0 0 1)。结论　SP使KBV2 0 0细胞耐药性降低 ,可能与下调PKC有关。     

Influence of the mucosal epithelium microenvironment on Langerhans cells: Implications for the development of squamous intraepithelial lesions of the cervix

We have addressed the notion that the initiation and progression of human papillomavirus associated cancer of the uterine cervix are associated with alterations of Langerhans cells (LC) within the mucosal squamous epithelium. Since the transformation zone (TZ) of the cervix is the site where the majority of squamous intraepithelial lesions (SIL) are initiated, in contrast to the exocervix, we decided to investigate the influence of the local microenvironment within the TZ on the function and density of LC. We show that the TZ is associated with a significant reduction in the density of immature LC (CD1a/LAG) compared to the exocervix. In contrast, the development of SILs is attributed with a relative increased density of immature LC, compared to the TZ. Furthermore, we show that this variability in LC density is correlated with a differential expression of TNFα and MIP3α within the micro‐environment of the TZ and SILs. Both TZ and SIL epithelium‐derived LC, in the presence of allogeneic PBMC, induced lower levels of proliferation and IL2 production and higher levels of the immunosuppressive cytokine IL10 in comparison to the exocervix. Nevertheless, the epithelium‐derived LC in SILs exhibits a reduction in their functional activity, relative to the TZ. Together our studies suggest that the immunosurveillance within the epithelium of the TZ may be intrinsically perturbed due to the altered expression of chemokines/cytokines and the concomitant diminished density of LC. Furthermore, following HPV infection and the development of SILs, the function of LC may be further incapacitated by viral associated mechanisms. © 2001 Wiley‐Liss, Inc.