对严重急性呼吸综合征检测实验室及其结果解释的建议

20 0 3年 5月 1日 ,世界卫生组织 (WHO)提出了对严重急性呼吸综合征 (SARS)检测实验室及其检测结果解释的几点建议。1.SARS实验室诊断标准 :(1)确认实验为SARS病毒聚合酶链反应 (PCR)结果阳性 :同一患者至少 2份不同来源的临床标本 (如上呼吸道标本和排泄物标本 )检测结果阳性 ;或在病程间隔 2d或 2d以上采集的相同来源临床标本 (如 2个或多个上呼吸道标本 )检测结果阳性 ;或对同一来源临床标本同时采用 2种不同检测方法或重复PCR检测结果阳性。(2 )酶联免疫吸附试验 (ELISA)或免疫荧光试验 (IFA)方法血清学检测结果发生转化 :…     

呼吸系统感染性疾病快速诊断技术的应用

目的为临床提供快速准确的呼吸道常见感染性疾病病因诊断依据，以便尽快诊断、正确治疗、预防传播，协助临床排除SARS(严重急性呼吸综合征)及禽流感诊断。方法用酶免疫方法对呼吸道感染病人鼻咽喉分泌物、血清及尿液标本进行检测，得到A群链球菌抗原、流感病毒A型和B型抗原、呼吸道合胞病毒抗原、肺炎支原体抗体IgM、嗜肺军团菌I型抗原的定性结果。每项试验操作简单并可在30min内完成。结果一年半时间共检测来自879位病人的1152份标本，阳性结果共124个，总感染率为14．1％。A群链球菌抗原检测标本446份，阳性率为11．9％；流感病毒A型和B型抗原266份，阳性率为11．7％；呼吸道合胞病毒抗原116份，阳性率为21．6%；肺炎支原体抗体227份，阳性率为5．3％、嗜肺军团菌1型抗原97份，阳性率为3．1％。SARS流行期间这五种病原体的感染率为20．2％，阳性结果中未发现一例SARS病人。SARS流行前一年多的时间里所检测病原体感染率仅为12．0%。结论采用酶免疫法检测呼吸道病原体，结果快速可靠，为临床提供了早期诊断和正确治疗的依据，可以尽早有效地排除SARS诊断，并减少抗生素滥用现象。     

鼻咽部系列呼吸道病毒检出率比较

为了提高临床快速检测呼吸道病毒的检出率，采用系列单克隆抗体联接碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（ＡＰＡＡＰ）桥联技术，取１００例呼吸道感染病人鼻部和咽部分泌物做配对检测。结果显示：咽部分泌物检出率达８２％，鼻部分泌物检出率为３２％。二者阳性检出率经χ２检验，具有显著性差异（χ２＝５０．９９９，Ｐ＜０．００５）。提示：采集呼吸道感染病人咽部分泌物标本送检，可提高病毒检出率。     

造血干细胞移植中人巨细胞病毒检测：荧光定量聚合酶链反应的早期诊断价值

背景：动态监测造血干细胞移植受者血浆人巨细胞病毒载量,快速筛选出早期活动性人巨细胞病毒感染者,进而指导临床用药,提高造血干细胞移植的成活率。目的：探讨荧光定量聚合酶链反应对造血干细胞移植患者人巨细胞病毒活动性感染的早期诊断价值。方法：收集41例造血干细胞移植患者共656份血标本,应用实时荧光定量PCR方法动态监测血浆人巨细胞病毒DNA载量,并与60例健康体检者血浆人巨细胞病毒DNA载量对比分析。结果与结论：656份血标本中96份阳性,病毒载量介于5.0×10^2-1.0×10^7 IU/mL之间。治疗有效者人巨细胞病毒DNA迅速转阴,治疗耐药者持续阳性,12例连续阳性者2例死于巨细胞病毒活动性感染。实时荧光定量PCR方法检测人巨细胞病毒DNA适用于造血干细胞移植后巨细胞病毒活动性感染的早期诊断。     

RVP Fast与实时荧光PCR/RT-PCR检测呼吸道病毒结果的比较

目的评价xTAG呼吸道病毒群快速检测(Respiratory Virus Panel Fast Array,RVP Fast)技术检测呼吸道病毒的临床应用价值。方法选取经实时荧光定量PCR/RT-PCR筛查的74份呼吸道病毒阳性和4份阴性鼻拭子标本,用RVP Fast和RTPCR同时检测78份标本的8种呼吸道病毒及其亚型(共19型),运用McNemarχ2检验,Kappa检验和线性回归方法对检测结果进行统计处理。结果两种方法检测78份标本有71份结果完全相符,包括55份单个病毒感染标本,12份混合病毒感染标本和4份阴性标本。两种方法检测结果总体比较无统计学差异(P0.05),一致性较好(Kappa=0.960,P0.01),RVP Fast荧光强度中位数(MFI)与实时荧光PCR/RT-PCR阈值循环数(Ct)呈负相关(r=-0.529,P0.01)。结论 RVP Fast芯片技术的检测性能准确可靠,可应用于国内呼吸道病毒感染的快速、高通量检测,具有推广价值。     

深圳东门市场野生动物SARS病毒的监测

目的　对深圳东门市场野生动物标本中SARS病毒进行监测 ,了解动物携带SARS病毒的情况。方法　对 2 0 0 3年 5月 7日至 12月在东门市场采集的果子狸、貉、鼬獾、猪獾和狗獾等 5种动物标本 ,进行病毒分离鉴定及RT -PCR和SARS荧光定量PCR检测。结果　 5月首先从 4份果子狸和 1份貉标本中分离到SARS病毒。 5月至 12月的 12 1份动物标本中共有 5 5份SARS病毒阳性标本 ,阳性率为 45.45 %。 5月份、10月份、11月份和 12月份野生动物标本中SARS阳性率分别为 50%、83.33%、34.78%和 44.87% ,其中 ,果子狸的SARS病毒携带率为 90 %。结论　东门市场售卖的果子狸可能是携带SARS病毒的重要载体之一 ,在SARS的传播中可能起着重要的作用。     

一例H7N9禽流感感染病例病毒载量、耐药性与抗体水平变化分析

目的通过对北京市1例人感染H7N9禽流感病例连续检测H7N9病毒及血清抗体,掌握H7N9病毒载量、抗体、耐药性在病程发展中的变化。方法以24 h为间隔,共收集病例的下呼吸道盥洗液样本25份,血清样本23份。采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)法监测病程发展中下呼吸道盥洗液样本中的H7N9病毒载量变化、神经氨酸酶(NA)基因上R294K耐药位点变化;采用血凝抑制实验监测病例病程发展中血清样本中H7N9抗体水平变化。结果随着病程进展和临床抗病毒治疗的进行,病例H7N9禽流感病毒载量逐渐降低,抗体水平逐渐升高。病程后期部分样本中发现少量NA基因R294K耐药突变。结论 real-time RT-PCR和血凝抑制试验可用于人感染H7N9禽流感患者的病毒载量、耐药性变化和抗体水平变化监测,为临床救治提供依据。     

RVP Fast与Seeplex PneumoBacter ACE Detection assay联合诊断呼吸道感染病原体

目的采用RVP Fast与Seeplex PneumoBacter ACE Detection assay两种方法,联合诊断呼吸道感染病原体。方法收集南京市呼吸道感染患者咽拭子标本67份,提取RNA及DNA,呼吸道病毒群快速检测(Respiratory Virus Panel Fast Array,RVP Fast)技术检测呼吸道病毒,Seeplex PneumoBacter ACE Detection assay检测呼吸道六重病原体。结果 67份标本中,呼吸道病毒阳性仅4例,主要为肠鼻病毒。呼吸道六重病原体检测中,阳性标本为26例,其中肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎衣原体阳性较多。结论 RVP Fast与Seeplex PneumoBacter ACE Detection assay联合使用,有利于明确呼吸道感染病原体。     

不同保存时间对血浆标本中人巨细胞病毒载量的影响

目的研究4℃条件下存放30d后血浆中人巨细胞病毒DNA的稳定性。方法选择进行造血干细胞移植的150例患者的血浆标本,将其按照人巨细胞病毒DNA载量分为3组:低载量组(n=50,人巨细胞病毒DNA载量为300~1 000copy/mL)、中载量组(n=50,人巨细胞病毒DNA载量为1 000~10 000copy/mL)和高载量组(n=50,人巨细胞病毒DNA载量为10 000~100 000copy/mL)。标本采集后2h内完成基线载量(0d)检测,其余血浆在4℃条件下保存,分别在保存1、2、3、7、14、21、30d时检测人巨细胞病毒载量。结果低、中、高载量组标本在保存1、2、3、7、14、21、30d后,其人巨细胞病毒载量与0d结果比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论血浆标本在4℃条件下存放30d对人巨细胞病毒载量检测结果无影响。     

DNA芯片检测肝组织及血清中乙型肝炎病毒DNA的临床研究

目的：研究DNA芯片检测乙型肝炎和肝硬化患者肝组织及血清中乙型肝炎病毒（HBV）DNA的应用价值。方法：用点样仪将聚合酶链反应（PCR）扩增的HBV DNA探针制成基因芯片。对15例慢性乙型肝炎病人的血清和肝活检组织，99例乙型肝炎后肝硬化肝组织，分别用基因芯片、原位分子杂交、免疫组织化学和雅培试剂检测HBV DNA、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)、乙型肝炎表面抗原（HBsAg)和乙型肝炎e抗原（HBeAg)。结果：用基因芯片对15份HBsAg,HBeAg阳性的乙型肝炎患者血清进行检测，HBV DNA均阳性，阳性率符合率为100％；15份肝活检组织标本，免疫组化法检测HBcAg阳性15例，原位分子杂交法和基因芯片检测HBV DNA均阳性14例，阳性率93％。99份肝炎后肝硬化患者肝组织标本，HBcAg阳性67份，HBV DNA阳性53份，基因芯片检测HBV DNA阳性46份，阳性率分别为69％、88％。32例HBcAg、HBV DNA阳性的肝组织中，基因芯片检测HBV DNA均为阴性。结论：肝炎基因诊断芯片可检测肝组织及血清中HBV DNA，诊断准确率高，假阳性率低。     

SARS-coronavirus modulation of myocardial ACE2 expression and inflammation in patients with SARS

Background  Angiotensin converting enzyme 2 (ACE2), a monocarboxylase that degrades angiotensin II to angiotensin 1–7, is also the functional receptor for severe acute respiratory syndrome (SARS) coronavirus (SARS-CoV) and is highly expressed in the lungs and heart. Patients with SARS also suffered from cardiac disease including arrhythmias, sudden cardiac death, and systolic and diastolic dysfunction.
Materials and methods  We studied mice infected with the human strain of the SARS-CoV and encephalomyocarditis virus and examined ACE2 mRNA and protein expression. Autopsy heart samples from patients who succumbed to the SARS crisis in Toronto (Canada) were used to investigate the impact of SARS on myocardial structure, inflammation and ACE2 protein expression.
Results  Pulmonary infection with the human SARS-CoV in mice led to an ACE2-dependent myocardial infection with a marked decrease in ACE2 expression confirming a critical role of ACE2 in mediating SARS-CoV infection in the heart. The SARS-CoV viral RNA was detected in 35% (7/20) of autopsied human heart samples obtained from patients who succumbed to the SARS crisis during the Toronto SARS outbreak. Macrophage-specific staining showed a marked increase in macrophage infiltration with evidence of myocardial damage in patients who had SARS-CoV in their hearts. The presence of SARS-CoV in the heart was also associated with marked reductions in ACE2 protein expression.
Conclusions  Our data show that SARS-CoV can mediate myocardial inflammation and damage associated with down-regulation of myocardial ACE2 system, which may be responsible for the myocardial dysfunction and adverse cardiac outcomes in patients with SARS.     

严重急性呼吸道综合征冠状病毒Spike蛋白抗原特异性的临床应用研究

目的 探讨严重急性呼吸道综合征（SARS）患者的SARS冠状病毒（SARS—CoV）抗体产生情况以及SARS-CoVSpike蛋白抗原的特异性。方法 运用酶联免疫法（ELISA）和蛋白质印迹法（WesternBlotting）检测95例SARS患者体内抗体的产生情况和验证病毒Spike蛋白抗原的特异性。结果 95例SARS患者血清抗体结果中，大部分患者出现抗体阳性，抗SARS-CoVIgM总阳性率为91．6％（87／95），抗SARS-CoVIgG总阳性率为97．9％（93／95）；高暴露人群组和正常对照组的抗SARS-CoVIgM和抗SARS-CoVIgG阳性率为0％。经过携带Spike-protein基因的重组病毒Ad-sn感染COS-1细胞后表达的s蛋白抗原，使用SARS患者抗血清能够检测出特异性蛋白条带；重组病毒感染CNE-2细胞后，表达的S蛋白抗原，能够通过不同患者抗血清同时检测到相应的特异性抗原蛋白。结论 SARS患者感染SARS-CoV后，体内可产生相应抗体；利用SARS患者所产生特异性抗血清，可以检测出克隆SARS-CoV的Spike基因所表达的Spike蛋白。     

广州不同人群血清SARS冠状病毒抗体研究

目的　了解广州不同人群血清SARS冠状病毒 (SARS CoV)抗体水平。方法　用酶联免疫分析 (ELISA)和免疫荧光分析(IFA)对SARS临床确诊病人、病人接触者、野生动物销售人员及正常人群的血清SARS冠状病毒IgG抗体进行检测和分析。结果　SARS确诊病人、病人接触者、野生动物销售人员及正常人群的血清抗体阳性率分别为 6 8.7% (36 6 / 5 33)、4 .9% (13/ 2 6 7)、13.2 % (4 8/ 36 3)、2 .3% (7/ 310 ) ;抗体几何平均滴度 (GMT)分别为 15 6 .97、18.90、2 8.73、11.0 4 ;SARS病人、野生动物销售人员的抗体水平明显高于正常人群 (P <0 .0 1)。SARS病人的血清IgG抗体阳性率及抗体滴度随发病天数逐渐上升 ,15d后阳性率达6 5 .0 %以上 ,GMT超过 93.3,30～ 4 0d达峰值 (阳性率和GMT分别为 77.8%、189.3) ,15 0d左右仍维持较高水平。各年龄组和性别组的抗体水平无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　广州不同人群血清中都有不同程度的SARS冠状病毒IgG抗体 ,经过本次SARS流行 ,人群的免疫性有所提高。     

Serum proteomic fingerprints of adult patients with severe acute respiratory syndrome

BACKGROUND: Severe acute respiratory syndrome (SARS) is an emerging infectious disease caused by a new coronavirus strain, SARS-CoV. Specific proteomic patterns might be present in serum in response to the infection and could be useful for early detection of the disease. METHODS: Using surface-enhanced laser desorption/ionization (SELDI) ProteinChip technology, we profiled and compared serum proteins of 39 patients with early-stage SARS infection and 39 non-SARS patients who were suspected cases during the SARS outbreak period. Proteomic patterns associated with SARS were identified by bioinformatic and biostatistical analyses. Features of interest were then purified and identified by tandem mass spectrometry. RESULTS: Twenty proteomic features were significantly different between the 2 groups. Fifteen were increased in the SARS group, and 5 were decreased. Their concentrations were correlated with 2 or more clinical and/or biochemical variables. Two were correlated with the SARS-CoV viral load. Hierarchical clustering analysis showed that a majority of the SARS patients (95%) had similar serum proteomic profiles and identified 2 subgroups with poor prognosis. ROC curve analysis identified individual features as potential biomarkers for SARS diagnosis (areas under ROC curves, 0.733-0.995). ROC curve areas were largest for an N-terminal fragment of complement C3c alpha chain (m/z 28 119) and an internal fragment of fibrinogen alpha-E chain (m/z 5908). Immunoglobulin kappa light chain (m/z 24 505) positively correlated with viral load. CONCLUSIONS: Specific proteomic fingerprints in the sera of adult SARS patients could be used to identify SARS cases early during onset with high specificity and sensitivity.     

基于SPR技术高通量呼吸道病毒检测方法研究

目的结合表面等离子共振(SPR)和基因芯片技术优势,针对9种常见呼吸道病毒[包括A型、B型流感病毒(Influ A,B),甲型H1N1,呼吸道融合病毒(RSV),副流感病毒1~3型(PIV1、2、3),腺病毒(ADV)以及引发严重急性呼吸综合征的冠状病毒(SARS)],构建特异性强、通量高的生物传感器方法。方法首先利用软件premier 5等在保守序列上设计相关病毒的特异性引物及探针;将所设计的9种相应呼吸道病毒的探针固定于化学修饰后的SPR芯片的特定区域,利用SPR技术实时监测探针与PCR产物的杂交过程,最后通过生物素与链霉亲和素系统实现信号的放大。结果设计的基因芯片可以高通量地检测9种呼吸道病毒,具有很好的检测特异性;芯片表面通过一定的再生条件后可以重复利用,避免芯片批间差对结果的影响;检测灵敏度都达到纳摩尔级。结论初步研究结果表明,利用SPR传感技术建立高通量检测呼吸道病毒的检测方法具有一定的实用性和可行性,有望成为快速、大规模、高通量筛查呼吸道病毒感染的手段,具有较好的应用前景。     

严重急性呼吸综合征患者外周血血液学与生化指标结果分析

目的 :探讨严重急性呼吸综合征 (SARS)患者外周血血液学和生化指标的改变 ,为临床诊治提供依据。方法 :收集本院确诊SARS患者 37例 ,正常对照组 43例的静脉血标本 ,分别进行血常规和生化常规检测 ,并对相应指标进行比较。结果 :SARS组白细胞计数 (WBC)、血小板计数 (PLT)、血小板平均体积 (MPV)、淋巴细胞百分数 (Lym %)、淋巴细胞 (Lym)均低于正常对照组 ,且有显著性差异 (P <0 0 1) ;其余血液学指标和生化指标两组间无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :SARS患者外周血实验室检查血液学和生化指标产生有意义的改变。提示SARS病毒可能引起人体肝脏、骨髓及免疫系统的损伤。     

广州地区SARS流行期和非流行期献血人群SARS病毒抗体的流行病学调查

目的　分析广州地区SARS流行期和非流行期无偿献血人群中严重急性呼吸道综合征(SARS)病毒感染 情况,为制定预防输血传播SARS病毒措施提供科学依据。方法　采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对无偿献血者血 液进行SARS病毒抗体筛查,对SARS病毒抗体阳性样本用荧光聚合酶链反应(PCR)法进一步检测SARS病毒核 酸。采用统一的个案调查表对20名SARS病毒抗体阳性无偿献血者进行电话咨询调查,同时对31名SARS康复献 浆者进行检测,分析相关数据作对照。结果　6120名无偿献血者中,共检测出SARS病毒抗体阳性56例,阳性率为 0.92%,31名SARS康复献浆者中,检测出SARS病毒抗体阳性30例,阳性率为96.77%;SARS流行期和非流行期 无偿献血者SARS病毒抗体阳性率分别为0.91%和0.92%,56名无偿献血者SARS病毒抗体阳性的平均S/CO值 (2.34)和抗体平均滴度(≤1∶2)均明显低于30名SARS康复献浆者的平均S/CO值(14.8)和抗体平均滴度(≤1∶ 32);56例SARS病毒抗体阳性无偿献血者血液样本均未检测出SARS病毒核酸;20例SARS病毒抗体阳性无偿献 血者的调查显示:献血者身体健康,无SARS患者密切接触史。结论　广州地区无偿献血人群中存在的低水平 SARS病毒抗体阳性率,是否表明SARS病毒抗体阳性献血者曾经感染过SARS病毒,尚需进一步