LAK细胞之诱导条件的探讨

目的探讨LAK细胞的诱导条件.方法采用不同含量的r-IL-2T和PHA制备LAK细胞,经台盼兰拒染实验计数法及MTT比色法检验LAK细胞数目及活性.结果在r-IL-2 300μ/ml和PHA10μg/ml时,制备的LAK细胞数量多,杀伤活性较高.结论结论r-IL-2和PHA可诱导LAK细胞增殖.     

B7-1和IL-12基因转染对肝癌细胞免疫原性的影响

目的 观察Ｂ７－１和ＩＬ－１２基因表达对人肝癌细胞免疫原性原影响。方法 分别将Ｂ７－１和ＩＬ－１２基因以逆转录病毒介导转染ＨｅｐＧ２细胞。阳性克隆细胞与健康人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）混合培养后,用流式细胞仪检测ＰＢＬ表面Ⅰ类人白细胞抗原（ＨＬＡ－Ⅰ）分子表达,以ＭＴＴ法检测ＰＢＬ的特异性杀伤活性Ｋ５６２细胞的活性。结果 混合ＨｅｐＧ２／Ｂ７－１ＨｅｐＧ２／ＩＬ－１２细胞组ＰＢＬ表面的ＨＬＡ－Ⅰ分子     

重组人内皮抑素腺病毒抑制肝癌裸鼠移植瘤生长

目的 观察重组人内皮抑素腺病毒(Ad/hEndo)对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法 人脐静脉内皮细胞ECV-304经Ad/hEndo感染后,western印迹检测人内皮抑素的表达。人肝癌BEL-7402细胞移植到裸鼠背脊部后,检测Ad/hEndo对肝癌移植瘤生长的抑制作用。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤组织中内皮抑素mRNA的表达。分析人内皮抑素在裸鼠体内的表达分布。结果 Western印迹检测到人内皮抑素基因在ECV-304细胞内高效表达。Ad/hEndo明显抑制人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤生长(F=4.061,P<0.05)。Ad/hEndo组血管密度计数为6.88±1.08,DMEM组为13.60±1.71(t=9.216,P<0.01)。瘤内注射Ad/hEndo后3d,RT-PCR在肿瘤组织检测到内皮抑素mRNA的表达,7d后表达不明显。人内皮抑素蛋白主要分布在肿瘤组织。结论 腺病毒介导的人内皮抑素基因在体内、体外获得高效表达,并明显抑制肝癌裸鼠移植瘤的生长与血管生成。     

严重急性呼吸综合征患者康复期T淋巴细胞亚群变化的临床应用分析

严重急性呼吸综合征（SARS）是由SARS冠状病毒（SARS-CoV）感染引发的一种新型传染性疾病，以肺部病变为主，出现合并感染，并引起肺外多器官损伤、功能衰竭。SARS传染性极强，人群普遍易感，发病后，机体出现严重的细胞免疫和体液免疫损害。我们针对SARS患者康复后的免疫恢复状况进行监测，结合正常对照以及文献报道进行对比研究，为临床预后判断提供指导。     

小鼠T-bet基因真核表达载体的构建

目的构建小鼠T—bet基因重组真核表达载体pcDNA3一T—bet,为T—bet基因治疗研究提供有效的生物表达系统。方法采用内切酶切从质粒T—bet/GFP—RV中获得约1.7 kb的小鼠T—betcDNA片段,以单酶切非定向克隆方式与真核表达质粒pcDNA3连接,构建真核表达载体pcDNA3-T-bet。结果经PCR筛选阳性重组子,双酶切鉴定T—bet基因重组方向,并测序鉴定无错配及插入移位等DNA顺序改变。结论本实验成功构建了小鼠T—bet基因真核表达载体pcDNA3-T-bet。     

严重急性呼吸综合征患者血清病毒抗体消长规律的研究

2003年传染性非典型肺炎在全世界几十个国家和地区暴发流行，世界卫生组织根据其发病特征于2003年4月16日正式命名为严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome，简称SARS)。由SARS冠状病毒(SARS-associated coronavirus，简称SARS-CoV)引起的此次传染性非典型肺炎发病后，病情发展较急，部分病人病情较重，临床上大致符合病毒感染的病情变化。我们检测了95例SARS患者体内不同时期SARS病毒抗体，探讨病毒抗体在患者体内出现的规律，现报道如下。     

肝癌特异性HSV-TK／CD基因表达质粒的构建及其杀伤活性

[目的]构建肝癌特异性双自杀基因表达质粒。[方法]用平端连接方法将pUH-3质粒中822bp的pALBeAFP片段(含有416bp的白蛋白启动子pALB和406bp的甲胎蛋白增强子eAFP)代替pCEA-CD／TK质粒的CEA启动子，用PCR法鉴定插人方向，构建肝癌特异性双自杀基因表达质粒pALBeAFP-CD／TK。将pALBeAFP-CD／TK转染HepG2等4种肝癌细胞，MTT法测定前药GCV、5-FC对HepG2细胞的杀伤作用。[结果]获得pALBeAFP-CD／TK克隆，RT-PCR证实HepG2细胞转染pALBeAFP-CD／TK后可表达自杀基因．pALBeAFP-CD／TK转染可使前药GCV、5-FC特异性地杀伤HepG2细胞。[结论]肝癌特异性HSV-TK／CD基因表达质粒构建成功。     

HSV-TK/CD基因联合IL-12基因体内治疗肝癌

目的观察HSV-TK/CD基因联合IL-12基因体内治疗肝癌的疗效.方法SCID小鼠双侧腋部皮下植入5×105(0.2ml)HepG2细胞,同时腹腔注射PBL 2×107(0.5 ml).荷瘤小鼠分为4组,左侧腋部瘤内分别注射5×105(0.1 ml)丝裂霉素处理过的HepG2-IL-12细胞、5×105(0.1 ml)HepG2-pALBeAFP-CD/TK细胞或两者(各0.05 ml),次日起腹腔注射PBS或GCV 100 mg/kg 5-FC 500 mg/kg,连续10天.Ⅰ组:HepG2-IL-12 GCV,5-FC;Ⅱ组:HepG2-pALBeAFP-CD/TK PBS;Ⅲ组:HepG2-pALBeAFP-CD/TK GCV,5-FC;Ⅳ组:HepG2-pALBeAFP-CD/TK HepG2-IL-12 GCV,5-FC.治疗结束5天后作常规肿瘤组织病理学检查.结果与Ⅱ组比较,Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组治疗侧均有明显的生长抑制,第30天较Ⅱ组分别减小20.5%、54.9%和87.6%,且Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组之间差异明显.Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组右侧肿瘤较Ⅱ组同侧显著缩小,分别达23.2%、24.9%和45.0%.结论pALBeAFP-CD/TK双自杀基因体内治疗肝癌有效.在免疫活性鼠,局部转染IL-12基因可增强双自杀基因的疗效和远处旁观者效应.     

人神经营养素-3受体基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建

【目的】构建人神经营养素-3（neurotrophin-3，NT-3）受体（即酪氨酸蛋白激酶受体C，tyrosine protein kinase C，TrkC）基因重组的腺病毒表达载体。【方法】从人脑组织mRNA中扩增Trkc基因全长cDNA，定向克隆于穿梭质粒pShuttle中，获得一个带有CMV启动子的表达盒。再将表达盒与腺病毒骨架DNA（Adeno-X viral DNA）体外连接，形成重组腺病毒质粒（pAd-TrkC）。用pAd-TrkC转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒（Adeno-Trkc）。【结果】TrkC基因RT-PCR扩增产物为2478bp。Adeno-TrkC经PCR鉴定为正确重组子。【结论】应用体外连接法已构建了人TrkC重组腺病毒表达载体，这为进一步应用NT-3进行基因治疗中枢神经损伤奠定了基础。     

携带SARS-CoV刺突蛋白N端片段重组腺病毒的构建

[目的]构建携带SARS冠状病毒刺突蛋白N端基因片段的重组腺病毒.[方法]从SARS病毒cDNA扩增刺突蛋白N端基因片段(-45～1469nt,截短的S1区,SN),插入腺病毒穿梭质粒pShuttle,通过体外连接法构建重组腺病毒Ad-SN.用Ad-SN感染Vero-E6细胞,通过RT-PCR和Western blot法检测SN的表达.[结果]克隆的SN基因序列与文献报道基本一致;Ad-SN基因组结构与预期一致.在Ad-SN感染的Vero-E6细胞中存在SN基因的转录和分泌型SN蛋白的表达.[结论]体外连接法是一种简便易行的重组腺病毒载体构建方法;重组腺病毒Ad-SN能正确表达分泌型SN蛋白,可用于诱导抗SARS免疫的动物实验研究.