LncRNA SNHG7通过调控β-catenin蛋白影响乳腺癌细胞的增值、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA SNHG7 (LncRNA SNHG7)在乳腺癌细胞系中的功能及其机制。方法 RT-qPCR检测LncRNA SNHG7在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系的表达水平,核浆分离实验检测LncRNA SNHG7在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中的定位。在MDA-MB-231细胞系中,siRNA沉默LncRNA SNHG7后,利用MTS和平板克隆形成实验研究LncRNA SNHG7对细胞增殖的影响;利用划痕和transwell实验研究LncRNA SNHG7对细胞侵袭迁移的影响。通过Western blot(WB)实验研究LncRNA SNHG7在乳腺癌细胞系中可能参与的分子机制。结果 qPCR结果显示,与癌旁组织相比,LncRNA SNHG7在乳腺癌组织中高表达(P0.05);与乳腺正常上皮MCF-10A相比,LncRNA SNHG7在乳腺癌细胞系中高表达。siRNA沉默LncRNA SNHG7后,细胞增殖能力和平板克隆形成能力被抑制(P0.05),划痕实验显示细胞的愈合能力降低(P0.05),trans well实验显示细胞的迁移和侵袭能力均被抑制(P0.05)。WB结果显示β-catenin、 C-Myc和CyclinD1蛋白的表达下调,磷酸化的β-catenin(p-β-catenin)蛋白降解增加。结论 LncRNA SNHG7在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中高表达。沉默LncRNA SNHG7后,细胞的增殖和侵袭迁移能力均降低。WB结果表明LncRNA SN HG7调控乳腺癌细胞的增殖和侵袭迁移可能与β-catenin蛋白的表达下调和p-β-catenin蛋白降解增加有关。     

胸腔积液标本留取和检验技术进展

形成胸腔积液的病因繁多,实验室检查可区分漏出液与渗出液,鉴别良性与恶性、结核性与非结核性胸腔积液。胸腔积液的实验室检验包括常规检验、细胞学检验、生化检验、免疫学检验和分子生物学检验。标本留取属于分析前重要的一部分,近年来越来越多的实验室认识到分析前质量控制的重要性,其在临床工作中受到越来越多的关注。形成胸腔积液的病因以结核性和癌性居多,因而出现了大量针对结核性和癌性胸腔积液检验的新项目和新技术。本文就这些新项目、新技术检测结果的意义和全程质量控制进行评述,分析其优缺点,便于临床实验室决定是否开展该项目和技术,同时也便于临床医生选择。     

明胶酶在舌鳞癌发生、演进中的表达和意义

【目的】通过检测明胶酶在口腔正常黏膜、白斑、白斑癌变和鳞癌组织中的表达,探讨其在舌鳞癌的发生和演进中的变化和作用。【方法】应用免疫组织化学的方法检测14例口腔正常黏膜、22例白斑、7例白斑癌变和59例舌鳞癌组织中明胶酶(MMP-2和MMP-9)蛋白的表达。【结果】①MMP-2在口腔正常黏膜、白斑、白斑癌变和舌鳞癌组织中阳性率分别为29%、50%、86%和83%;MMP鄄9在口腔正常黏膜、白斑、白斑癌变和舌鳞癌组织中阳性率分别为50%、100%、100%和83%。②正常黏膜组织中MMP-2的阳性率明显低于白斑癌变(P=0.016)和舌鳞癌组织(P=0.000);白斑组织中MMP-2的阳性率明显低于舌鳞癌组织(P=0.001);白斑癌变组织中MMP鄄2的阳性率明显低于伴有淋巴结转移的舌鳞癌组织(P=0.019);舌鳞癌组织中无淋巴结转移组的阳率明显低于伴有淋巴结转移组(P=0.006)。③正常黏膜组织中MMP-9的阳性率明显低于白斑(P=0.021)和白斑癌变组织(P=0.016);白斑和白斑癌变组织中MMP-9的阳性率低于无淋巴结转移的舌鳞癌(P=0.002和0.007);舌鳞癌组织中无淋巴结转移组的阳率明显低于伴有淋巴结转移组(P =0.033)。【结论】明胶酶在舌鳞癌发生和演进过程中表达明显增加,并可能在这一过程中起着重要作用。     

多重PCR法和HPV分型基因芯片法在高危型人乳头瘤病毒感染检测中的应用

目的评价高危型人乳头瘤病毒（HPV）多重核酸扩增荧光检测法和HPV分型基因芯片检测法在HPV感染女性患者标本基因分型的临床应用效果。方法应用13种高危型HPV多重PCR荧光检测法对在深圳市人民医院进行宫颈癌筛查的653例疑似HPV感染女患者的宫颈细胞样本进行检测,并与HPV分型基因芯片检测法的检测结果进行比较,2种方法检测13种高危型HPV不一致的样本经序列分析方法进一步验证。结果13种高危型HPV多重PCR荧光检测法检测HPV阳性样本,阳性检出率为21．5％（140／653）;用HPV分型基因芯片检测法验证,与13种高危型HPV多重PCR荧光检测法一致的阳性样本占20．4％（133／653）,总一致率为98．2％。2种方法的检测结果具有高度一致性（kappa值一o．945）;用HPV分型基因芯片检测法检出：HPV单一型别感染占59．4％（79／133）,主要的高危HPV型别为HPV16、52、39、68、33和59型,6种高危型占总数的87．3％（69／79）,其中HPV16和HPV52为主要感染,占44．9％。结论高危型HPV多重PCR荧光检测法和HPV分型基因芯片检测法在13种高危型HPV的检结果具有高度一致性;多重PCR荧光检测法覆盖主要的13种高危型HPV,分型基因芯片检测法可进行具体的单一型别分型。2种检测方法的联合应用,对宫颈癌筛查和预防具有较高的临床应用价值,同时可为HPV分子流行病学和HPV疫苗的应用研究提供依据。     

白介素-1受体拮抗剂基因多态性与散发性帕金森病的关系

目的探讨白介素-1受体拮抗剂（IL-1RA）基因多态性与帕金森病（PD）的关系。方法本实验用PCR-片段长度多态性分析法检测了89例中国散发性帕金森病病人和67例正常对照的白介素-1受体拮抗剂基因多态性。结果与对照组相比,PD组中IL-1RA基因VNTR多态性的A2等位基因有增加的趋势,但两者差异无统计学意义（P〉0.05）。帕金森病合并痴呆组（PDD组）中IL-1RA基因A2等位基因频率较非痴呆组（PDND组）有显著性增加（P〈0.05）,而且在PDD组中,IL-1RA基因A2/A2纯合子和A1/A2杂合子基因型频率较PDND组有显著性增加（P〈0.05）。结论IL-1RA基因多态性可能与我国人散发性帕金森病的发病无关,而与帕金森病并发痴呆发病过程中有关。     

15例新生儿骨折的原因分析及护理

目的探讨近2年新生儿骨折发生的原因、护理及预防措施。方法对分娩的3922例所发生15例新生儿骨折进行回顾性分析。结果3922例分娩,新生儿骨折15例,发生率0．38％,其中股骨骨折1例,双锁骨骨折1例,单侧锁骨骨折13例。结论正确估计胎儿体质量,正确的助产,提高助产技术水平,及时剖官产,可以减少和避免新生儿骨折的发生。     

NF-κB介导大鼠肾小球系膜细胞Visfatin对促纤维化因子和细胞外基质表达的影响

目的观察大鼠肾小球系膜细胞中内脏脂肪素(Visfatin)对促纤维化因子和细胞外基质(ECM)表达的影响并探讨核因子-κB(NF-κB)在此过程中的作用。方法分别构建Visfatin表达质粒及Visfatin RNAi质粒,将细胞分为八组:A组:正常糖对照组;B组:正常糖+NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC)组;C组:过表达Visfatin组;D组:过表达Visfatin+PDTC组;E组:空白表达载体组;F组:空白表达载体+PDTC组;G组:Visfatin RNAi组;H组:空白沉默载体组。比较过表达或沉默Visfatin前后促纤维因子及细胞外基质基因及蛋白表达的变化。用Realtime-PCR方法检测转录生长因子β(TGF-β)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤维蛋白溶解酶原激活物抑制剂(PAI-1)、纤维连接蛋白(FN)、I型胶原(Col I)、IV胶原(Col IV)等基因表达的变化,用Western Blot检测Visfatin、CTGF、FN等蛋白的表达,用电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测NF-κB活性;以及通过观察PDTC处理对照组、过表达Visfatin组、空白表达载体组前后上述指标的变化。结果大鼠肾系膜细胞过表达Visfatin后,NF-κB活性、Visfatin、TGF-β、CTGF、PAI-1、FN、Col I、Col IV的m RNA表达量及Visfatin、CTGF、FN蛋白表达量显著升高(P0.05)。下调Visfatin表达后,NF-κB活性、Visfatin、TGF-β、CTGF、PAI-1、FN、Col I、Col IV的m RNA表达量及Visfatin、CTGF、FN蛋白表达量均显著降低(P0.05)。PDTC处理的各组,NF-κB活性、TGF-β、CTGF、PAI-1、FN、Col I、Col IV表达量与对应的未经PDTC处理组相比显著降低(P0.05)。结论在大鼠肾小球系膜细胞中,Visfatin可通过NF-κB通路诱导促纤维化因子和细胞外基质的表达。     

阿霉素对K562细胞凋亡及FAK mRNA的影响

目的 探讨阿霉素体外作用于K562细胞后,观察其对细胞增殖的影响,促进细胞凋亡情况,以及调节细胞周期和粘着斑激酶(FAK) mRNA基因,进一步探讨通过调控FAK表达,研究抗白血病的作用机制.方法 应用细胞增殖实验(CCK8法)观察不同浓度阿霉素作用不同时间对K562细胞增殖的影响,应用流式细胞仪观察不同浓度阿霉素对K562细胞细胞凋亡,细胞周期的影响,应用RT-PCR和Western blot技术检测不同浓度阿霉素作用对K562细胞36 h后FAK mRNA以及蛋白表达水平的变化.结果 随着阿霉素浓度增加及作用时间延长,K562细胞的增殖抑制率逐渐升高,同一时间不同浓度之间比较,或者同一浓度不同时间组之间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);阿霉素能引起K562细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率也逐渐增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);阿霉素能引起K562细胞周期阻滞,多停留在S期;阿霉素能引起K562细胞FAK mRNA表达显著降低.阿霉素能引起K562细胞FAK蛋白表达水平的降低.结论 阿霉素抑制分裂期细胞的增殖,诱导细胞凋亡增加,对细胞FAK基因和蛋白水平均显著下调,为进一步研究FAK基因表达的调控与肿瘤细胞凋亡的分子机制提供了实验基础.     

表皮肿瘤中COX-2与P53的检测

目的了解表皮肿瘤组织环氧合酶-2(COX-2)与P53的表达情况。方法免疫组化法检测脂溢性角化病(SK)15例、Bowen’s病(BD)15例、基底细胞上皮瘤(BCE)20例、鳞癌(SCC)20例COX-2和P53的表达。结果所检测的各肿瘤组织标本均有COX-2的表达,分别为SCC95%,BD73.3%,SK46.6%,BCE68.0%,表达强度以SCC最为显著,周围正常组织未见表达。突变型P53在SCC(80.0%),BCE(75.0%),BD(33.3%)肿瘤组织的阳性率较高,而在SK(13.3%)中基本不表达。SCC和BCECOX-2表达阳性者其突变型P53表达的阳性率较COX-2表达阴性者高(P<0.05)。结论表皮肿瘤存在COX-2的过表达;P53的突变与COX-2的过表达有关,p53突变可能是通过上调COX-2水平发挥抗凋亡作用,从而促进SCC,BCE的形成和发展。     

口腔扁平苔藓与超氧化物歧化酶关系探讨

目的 探讨超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）与口腔扁平苔藓的关系。方法 选择口腔扁平苔藓（ＯＬＰ）患者、健康对照者各３０例。分别采用比色法、硫代巴比妥酸比色法（改良ＴＢＡ法）检测血清中ＳＯＤ、ＭＤＡ含量。结果 ＯＬＰ患者ＳＯＤ活性及ＭＤＡ含量均高于对照组（Ｐ〈０．０１）,而ＯＬＰ治愈组ＳＯＤ活性及ＭＤＡ含量与对照组相比差异无显著性（Ｐ〉０．０５）。结论 血清ＳＯＤ活性与ＯＬＰ有一定关系。