脓毒症大鼠肠道肠三叶因子mRNA表达的变化

目的：探讨脓毒症大鼠肠道肠三叶因子（trefoil factor family,TFF3）mRNA表达的变化。方法：32只SD大鼠随机分为对照组（n=8）和脓毒症组（n=24）。采用盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture,CLP）制作大鼠脓毒症模型。于模型建立后3h,6h及12h（n=8）取回肠黏膜,以RT-PCR法检测TFF3 mRNA的表达。结果：脓毒症模型建立3h始TFF3 mRNA表达即显著下降（P〈0.01）,随着时间延长表达进一步下降。结论：脓毒症大鼠肠道TFF3 mRNA表达明显下降,可能是脓毒症肠屏障功能障碍的机制之一并延缓肠道黏膜修复。     

锂-匹鲁卡品致癫痫状态大鼠海马神经元线粒体损伤及caspase-3的表达

目的:观察锂-匹鲁卡品诱导的癫痫持续状态(SE)大鼠海马CA3区神经元线粒体损伤及caspase-3的表达。方法:选择成年雄性Wistar大鼠105只,随机分为SE组60只和对照组45只。SE组用锂-匹鲁卡品诱导大鼠SE2h,对照组采用等容量生理盐水腹腔注射。于SE终止后第3、6、24h取2组大鼠海马,光镜观察神经元形态,并用电镜观察线粒体超微结构,免疫组化方法检测caspase-3的表达。结果:SE组于SE后3h,电镜下可见线粒体嵴肿胀和膜崩解;SE后24h,神经元呈坏死样改变;caspase-3的表达在SE后6h开始增加,24h明显增高,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01)。结论:在实验性SE模型中,早期即出现线粒体超微结构的损伤,其后出现caspase-3的表达增高及神经元形态的改变,提示线粒体损伤是SE后神经元损伤的关键环节。     

AMPK信号通路在异丙酚减轻老年大鼠短暂脑缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨AMPK信号通路在异丙酚减轻老年大鼠短暂脑缺血再灌注损伤中的作用。方法健康雄性SD老龄大鼠(18²2月龄)150只,体重45022月龄)150只,体重450⁶00 g,采用随机数字表法将其分为5组(n=30):对照组(C组);假手术组(S组);缺血再灌注组(IR组);缺血再灌注组+异丙酚组(IR+P组)和缺血再灌注组+异丙酚组+AMPK激活剂组(IR+P+Y组)。采用Pusinelli四动脉阻断法建立全脑缺血模型。于缺血前10 min腹腔内注射异丙酚100 mg/kg,于夹闭动脉前时腹腔注射AMPK激活剂AICAR 500 mg/kg,假手术组仅暴露两侧翼孔和颈总动脉,对照组不行任何处理。采用Lawner等制定的评分标准神经行为学评估。于再灌注1、3和5 d时每组随机取10只处死,采用TUNEL法检测神经元的凋亡情况;采用Western blot法测定大鼠海马内AMPK、pAMPK、Bcl-2和Bax的表达。结果与C组比较,IR组、IR+P组和IR+P+Y组老年大鼠缺血/再灌注24 h后神经行为学评分升高,海马区TUNEL阳性神经元计数增加,海马AMPK、pAMPK表达水平升高,Bcl-2表达下调,Bax表达上调(P<0.05),与IR组比较,IR+P组老年大鼠缺血/再灌注24 h后神经行为学评分降低、海马区TUNEL阳性神经元计数减少、海马AMPK、pAMPK表达水平降低,Bcl-2表达上调、Bax表达下调(P<0.05),与IR+P组比较,IR+P+Y组老年大鼠缺血/再灌注24 h后神经行为学评分升高,海马区TUNEL阳性神经元计数增加,海马AMPK、p-AMPK表达水平升高,Bcl-2表达下调,Bax表达上调(P<0.05)。结论 AMPK信号通路参与了异丙酚减轻老年大鼠短暂脑缺血再灌注损伤的过程。     

脓毒症大鼠心肌细胞凋亡与p53和Bcl-2基因表达的关系

目的 探讨脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的变化及其与Bcl-2和p53基因mRNA表达的关系.方法 取体重190～220 g的成年雄性SD大鼠42只,随机分为三组,脓毒症组30只,正常对照组6只,假手术组6只;脓毒症组以盲肠结扎穿刺法(CLP)复制脓毒症大鼠模型,于术后3 h、9 h、12h、24 h各处死6只大鼠,假手术组麻醉满意后打开腹腔,正常对照组仅行麻醉术,均取1.0 mm3大小的心肌组织,另外余下的6只脓毒症鼠术后待其自然死亡不取心肌.采用电镜和TUNEL法检测大鼠心肌细胞的凋亡,用RT-PCR方法检测大鼠心肌细胞Bcl-2和p53基因mRNA的表达.结果 电镜下大鼠凋亡的心肌细胞胞膜皱缩,核固缩、边集、碎裂,胞膜突起、凋亡小体形成,TUNEL法检测各时间点的脓毒症大鼠心肌细胞的凋亡率均较正常对照组和假手术对照组明显升高(P＜0.05),术后12h达到峰值;p53 mRNA表达明显升高(P＜0.05),其表达量与心肌细胞凋亡指数呈正相关性(r=0.976,P＜0.05);Bcl-2 mRNA表达明显降低(P＜0.05),其表达量与心肌细胞凋亡指数呈负相关性(r=-0.833,P＜0.05).结论 脓毒症大鼠心肌细胞的凋亡明显增高,p53和Bcl-2 mRNA的表达异常是其可能机制之一.     

脂联素对脓毒症大鼠白细胞介素-6/信号转导及转录激活因子3通路的影响

目的 研究脂联素（APN）对脓毒症大鼠肺组织白细胞介素-6（IL-6）/信号转导及转录激活因子3（STAT3）通路的影响.方法 盲肠结扎穿孔（CLP）法制作脓毒症动物模型,雄性Wistar大鼠120只,10～ 14周龄,体重250～ 300 g,随机分为对照组（C组）、脓毒症模型组（CLP组）和脂联素预处理组（APN组）,分别于术后2h、6h、12 h、24h、48 h处死,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织匀浆中IL-6表达水平,半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测肺组织匀浆中IL-6 mRNA的表达水平;凝胶阻滞电泳分析技术（EMSA）检测肺组织STAT3的DNA结合活性;同时检测肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性;各组剩余10只大鼠观察术后7d的生存率,并绘制生存曲线.结果 与C组比较,CLP组大鼠肺组织IL-6 mRNA及蛋白表达水平升高,STAT3的DNA结合活性表达升高,肺组织匀浆中MPO活性显著升高,死亡率升高（P均＜0.05）;与CLP组比较,APN组大鼠肺组织IL-6 mRNA及蛋白表达水平下降,STAT3的DNA结合活性表达降低,肺组织匀浆中MPO活性显著下降,死亡率明显降低（P均＜0.05）.结论 脂联素可能通过抑制IL-6/STAT3信号转导通路,从而减轻脓毒症性肺损伤.     

氯沙坦对脓毒症大鼠的脑保护作用及可能机制

目的探讨血管紧张素ⅡAT1受体拮抗剂氯沙坦干预在脓毒症大鼠中枢神经系统损伤中的调节作用及可能机制。方法应用盲肠结扎穿孔(CLP)法建立大鼠脓毒症模型,清洁级Wistar大鼠45只随机分为3组,假手术组15只(Sham,S组)、CLP模型组15只(C组)、氯沙坦干预组15只(L组),术后12 h内死亡者剔除,并再次补足每组大鼠数量,术后24 h行神经功能评分,收集血清,后断颈处死大鼠取脑组织。分别检测血清及脑组织TNF-α、IL-6炎症因子表达,测定脑组织含水量及半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)含量,并观察脑组织病理变化。结果与S组相比,C、L组神经功能评分明显降低、脑组织含水量及caspase-3含量明显增加,血清及脑组织局部TNF-α、IL-6表达上调(P<0.05),病理损伤严重。与C组相比,L组神经功能评分升高、脑组织含水量、血清及脑组织TNF-α、IL-6、caspase-3表达明显下调(P<0.05),脑组织病理损伤减轻。结论氯沙坦可通过下调炎症因子、抑制细胞凋亡蛋白表达对脓毒症大鼠起到一定脑保护作用。     

癫痫持续状态大鼠模型海马区miR-181b表达的变化及意义

目的：探讨癫痫持续状态（status epilepticus,SE）大鼠模型海马区miR-181b表达的变化及意义。方法随机将30只SD（Sprague-Dawley）大鼠分为实验组和对照组,各15只,实验组建立氯化锂-匹罗卡品致SE大鼠模型,对照组以生理盐水代替氯化锂-匹罗卡品,提取两组大鼠右侧海马区脑组织总miRNA和左侧海马组织总蛋白,采用Real-Time RT-PCR检测miR-181b表达及采用Western Blot方法检测caspase-3蛋白的表达变化。结果 SE组大鼠海马区脑组织miR-181b表达较对照组有明显下降（P〈0.05）, caspase-3蛋白表达明显上升（P〈0.05）。结论 miR-181b可能通过调控caspase-3蛋白的表达抑制SE后海马区神经元凋亡过程。     

还原型谷胱甘肽对大鼠脓毒症肺损伤外周血淋巴细胞凋亡率及TNF-α、IL-6水平的影响

目的观察还原型谷胱甘肽对大鼠脓毒症肺损伤外周血淋巴细胞凋亡率及血浆细胞因子TNF-α、IL-6水平的影响，探讨还原型谷胱甘肽对大鼠脓毒症肺损伤的保护作用及其机制。方法应用盲肠结扎穿孔（CLP）法复制大鼠脓毒症肺损伤模型。将清洁级雄性SD大鼠112只，随机分成假手术组（Sham）、脓毒症肺损伤组（ALI）、还原型谷胱甘肽治疗组（GSH）、左旋氧氟沙星治疗组（LEV），每组再分为3、6、12、24h等4个亚组，每个亚组n=7。观察大鼠脓毒症肺损伤肺组织的病理形态学改变，并检测外周血淋巴细胞凋亡率及血浆TNF-α、IL-6水平的变化。结果在脓毒症肺损伤组及左旋氧氟沙星治疗组淋巴细胞凋亡率较假手术组及GSH治疗组明显升高（P〈0．05）；在脓毒症肺损伤组血浆TNF-α水平在CLP术后6h出现升高，较GSH治疗组升高明显（P〈0．01）。脓毒症肺损伤组大鼠血浆IL-6水平于CLP术后3h升高，GSH治疗组CLP术后3h血浆IL-6水平较脓毒症肺损伤组低（P〈0．05）。脓毒症肺损伤组大鼠病理显示明显肺损伤，GSH治疗组大鼠肺损伤程度明显减轻。结论还原型谷胱甘肽能显著抑制外周血淋巴细胞凋亡及血浆TNF-α和IL-6表达水平，对大鼠脓毒症急性肺损伤具有明显的保护作用。     

铁调素基因干扰对脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡的影响

目的：探讨铁调素基因干扰对脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡的影响。方法选择6-8周BALB/C 雄性健康小鼠10只,随机均分为实验组（铁调素基因干扰组,n=5）和对照组（对照RNA干扰腺病毒组,n=5）。采用尾静脉高动力注射的方法分别给予两组小鼠铁调素特异性shRNA腺病毒和对照RNA干扰腺病毒。13 d后,两组小鼠采用盲肠结扎穿孔（CLP）法复制脓毒症模型。CLP模型制备24 h后处死小鼠,留取全血和脾脏标本。采用流式细胞术测定脾脏T淋巴细胞亚型CD4＋和CD8＋的数量百分比、外周血和脾脏T淋巴细胞的凋亡百分比;采用Western blot法检测脾脏组织凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9的活化水平。结果实验组CLP模型24 h后脾脏CD4＋T细胞、CD8＋-T细胞百分比明显低于对照组（t分别=3.28、3.21, P均＜0.05）;实验组小鼠脾脏和外周血T淋巴细胞凋亡率较对照组明显增高（t分别=4.76、5.12, P均＜0.05）;实验组小鼠脾脏组织凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9活化水平较对照组明显增强（t分别=9.86、6.16, P均＜0.05）。结论铁调素基因干扰引起脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡增加,铁调素可能在脓毒症的免疫调控中发挥重要作用。     

早期高压氧联合康复治疗对脑出血自噬蛋白Beclin-1的影响

目的:探讨高压氧联合早期康复训练对脑出血大鼠海马区脑细胞自噬相关蛋白Beclin-1表达及行为学的影响作用。方法：55只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白组、非干预模型组、高压氧组、康复训练组及联合干预组,每组各10只,备用大鼠5只。非干预模型组、高压氧组、康复训练组、联合干预组大鼠采用胶原酶Ⅶ注射建立脑出血模型,高压氧组、康复训练组均于术后第3天分别开始行高压氧、康复训练,联合干预组包括以上干预。干预第7天及第14天,各组随机取5只大鼠行神经行为学Longa评分,评分完毕取海马区行免疫组化法Beclin-1检测。结果：干预7d及14d,高压氧组、康复训练组、联合干预组大鼠Longa评分较非干预模型组同时间点比较均明显下降（均P＜0.05）,联合干预组Longa评分均更低于高压氧组和康复训练组（均P＜0.05）。高压氧组、康复训练组、联合干预组大鼠海马区Beclin-1阳性反应较非干预模型组同时间点比较均明显下降（均P＜0.05）,联合干预组的下降幅度均大于高压氧组及康复训练组（均P＜0.05）。结论：高压氧及康复训练均可有效调节脑出血早期脑细胞自噬相关蛋白的表达,而高压氧联合早期康复的调节作用优于单纯高压氧和康复训练,脑出血后神经行为学的改善可能与脑的自噬相关蛋白调控相关。     

亚低温对复苏后大鼠脑细胞凋亡相关因子的影响

  目的  研究亚低温对心肺复苏后大鼠神经细胞凋亡及凋亡基因表达的影响。  方法  60只健康雄性SD大鼠随机分为常温组(T=37℃±0.5℃)和亚低温组(T=33℃±1.0℃), 每组30只; 窒息法建立心肺复苏模型, 于自主循环恢复后12、24 h通过神经功能缺损评分评价神经功能, 使用TUNEL染色观察脑细胞凋亡情况, 并于自主循环恢复后0、2、6、12、24 h采用RT-PCR检测脑组织中凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor, AIF)、caspase-3、Fas基因mRNA表达。  结果  亚低温组大鼠12及24 h神经功能缺损评分明显高于常温组(P < 0.05), 6、12、24 h神经细胞凋亡数量明显少于常温组(P < 0.05);与常温组相比, 自主循环恢复后各时间点AIF、caspase- 3及6、12、24 h Fas基因mRNA表达显著下调(P < 0.05)。  结论  亚低温可能通过抑制脑组织中AIF、caspase-3、Fas凋亡基因表达, 减少神经元凋亡, 改善神经功能。     

参麦注射液对早期脓毒症大鼠血清C反应蛋白和促炎性介质水平的影响

目的研究参麦注射液(shenmai,SM)对盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)脓毒症大鼠模型早期促炎性介质IL-6、IL-8和C反应蛋白(CRP)水平的影响。方法96只SD大鼠随机分为A组(假手术组,n=32)、B组(0.9%氯化钠溶液组,n=32)和C组(参麦注射液组,n=32),分别于CLP造模后1/2、12、24、36 h A组、B组皮下注射0.9%氯化钠溶液(5 ml/kg),C组皮下注射参麦注射液(5 ml/kg),并于术后12、24、36、48 h测量三组SD大鼠血清中IL-6、IL-8、CRP水平。结果CLP造模后B、C两组血清IL-6、IL-8、CRP水平均明显升高,C组在各时点的IL-6、IL-8、CRP水平显著低于B组(P<0.01)。结论参麦注射液可显著降低早期脓毒症大鼠血清CRP、IL-6、IL-8水平,可能对早期脓毒症大鼠具有保护作用。     

辛伐他汀预处理对脓毒症大鼠血清血管性血友病因子的影响

目的 评价辛伐他汀预处理对脓毒症大鼠血管内皮细胞功能的影响.方法 清洁级雌性Wistar大鼠96只,体质量200～250 g,4月龄.采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组:假手术组32只、脓毒症组32只和辛伐他汀组32只.脓毒症组和辛伐他汀组采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型.辛伐他汀组制模前胃内灌注辛伐他汀20 mg·kg-1 ·d-1,每日l次,连续2周;假手术组和脓毒症组胃内灌注等容量生理盐水.分别于术后3、6、24和48小时取8只大鼠,采集颈动脉血样,测定白细胞计数;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清血管性血友病因子(vWF)水平;记录术后3小时内、＞3～6小时、＞6～24小时和＞24～48小时各时段大鼠的死亡情况.结果 与假手术组比较,脓毒症组和辛伐他汀组术后各时点白细胞计数和血清vWF浓度升高,术后6小时达峰值,白细胞计数分别为(7.45±0.69)×109/L,(12.79±0.51)×109/L,(10.36±0.19)×109/L; vWF水平分别为(0.543±0.001)μg/L,(1.198±0.035)μg/L,(1.018±0.005)μg/L( P＜0.05);与脓毒症组比较,辛伐他汀组术后各时点白细胞计数和血清vWF水平降低,术后24～48小时内病死率降低(脓毒症组75.0％,辛伐他汀组50.0％)(P＜0.05).结论 辛伐他汀可保护脓毒症大鼠的内皮细胞功能,从而降低48小时内的病死率.     

大黄素对脓毒症大鼠保护作用的实验研究

目的探讨大黄素对于脓毒症大鼠的保护作用。方法将健康大鼠随机分为三组,A组：假手术组;B组：盲肠结扎穿刺（CLP）组;C组：CLP大黄素治疗组。造模72h后分别测定各组血浆肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、血浆和腹腔白蛋白浓度、肠系膜微静脉流速等并观察肠粘膜损伤程度。结果CLP后大鼠血浆TNF-α浓度、白蛋白渗出率明显升高,而B组升高较C组明显（P〈0.01）,肠粘膜损伤评分变化也有相同趋势（P〈0.017）;肠系膜微静脉流速减慢,血浆白蛋白浓度降低,而B组下降较C组明显（P〈0.05）。结论大黄素能减轻CLP所致脓毒症大鼠的炎症反应和肠粘膜的损伤。     

δ阿片受体激动剂D-丙2,D-亮5脑啡肽对脓毒症大鼠死亡率的影响

目的观察δ阿片受体激动剂D-丙2,D-亮5脑啡肽（[D-Ala2,D-Leu5]enkephalin,DADLE）对脓毒症大鼠存活时间和死亡率的影响。方法采用盲肠结扎穿孔（CLP）方法制备大鼠脓毒症模型。120只SD大鼠（雌雄不拘）,按随机数字表法分为假手术组（n=20）、模型对照组（n=20）,及4个DADLE治疗组。各DADLE组按给药剂量及方式分为制模前给药3mg/kg组（n=20）、制模前给药5mg/kg组（n=20）、制模后给药3mg/kg组（n=20）、制模后给药5mg/kg组（n=20）。观察各组大鼠CLP术后的存活时间,计算7d累积死亡率。结果与CLP模型未治疗组比较,各DADLE治疗组大鼠CLP术后的存活时间显著延长（P〈0.05）,各组7d死亡率分别为85%、60%、70%及75%,均较CLP组明显降低 但各DADLE治疗组之间无统计学差异（P〉0.05）。结论δ阿片受体激动剂DADLE能够明显延长脓毒症大鼠的存活时间,降低脓毒症大鼠的死亡率。     

脓毒症大鼠心功能的变化

目的：研究脓毒症大鼠离体心脏心功能的变化。方法：12只雄性SD大鼠随机分为假手术组（n=6）和脓毒症组（n=6）,脓毒症模型采用盲肠结扎穿孔术（CLP）,术后12h检测血清肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、丙氨酸转氨酶（ALT）及天冬氨酸转氨酶（AST）的水平,确定脓毒症模型是否成功。术后12h取出心脏,置于langendorff离体灌流装置上,记录灌流10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min的心率（HR）、收缩期左心室内压上升的最大变化速率（＋dp/dtmax）、舒张期左心室内压变化的最大速率（-dp/dtmax）、左室内压差（△LVP=左室收缩压-左室舒张压）及测定冠脉流量（CPF）。结果：与假手术组比较,心率未有显著改变（P〉0.05）,但＋dp/dtmax、-dp/dtmax、△LVP及CPF均出现显著下降（P〈0.05）。结论：CLP诱导的脓毒症大鼠离体心脏早期即有心肌损伤的存在,主要表现为收缩和舒张功能的下降。     

大黄素对脓毒症急性肺损伤大鼠水通道蛋白1表达的影响

目的探讨大黄素对脓毒症急性肺损伤大鼠水通道蛋白1(AQP-1)表达的影响。方法成年雄性SD大鼠120只,体质量200～230g。大鼠分为6组:空白对照组、假手术组、模型组、大黄素低剂量预处理组、大黄素中剂量预处理组、大黄素高剂量预处理组,每组各20只。采用盲肠结扎穿孔法复制脓毒症大鼠模型,假手术组探查取出盲肠后还纳腹腔。各组按取材时间不同又分为造模后3、6、12、24小时4个时相点,每个时相点5只大鼠。分别用实时荧光多聚酶链反应(PCR)和蛋白免疫电泳(western-blot)法检测肺组织水通道蛋白1信使RNA(AQP-1mRNA)和蛋白的表达。结果各组3小时AQP-1表达差异无统计学意义,造模后6小时AQP-1逐渐降低,12小时达最低。大黄素中、高剂量预处理组12小时AQP-1均显著高于同剂量其他时间点(P0.01),且两组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论脓毒症可造成大鼠AQP-1表达明显降低,早期预防性使用中高剂量大黄素可明显提高AQP-1的表达,从而有效减轻脓毒症大鼠肺水肿的程度。