大黄[庶虫]虫丸抑制趋化因子配体17表达对CT26小鼠结肠癌的影响

目的观察大黄[庶虫]虫丸对趋化因子配体17(CCL17)在CT26结肠癌小鼠模型中表达的影响,研究其可能的抗肿瘤作用机制。方法复制CT26结肠癌小鼠模型,将模型小鼠随机分为模型组,大黄[庶虫]虫丸高、中、低剂量组(48、24、12 g·kg^-1·d-1),另设正常组。计算各组小鼠结肠癌的抑瘤率;用流式细胞术和免疫荧光法分别检测外周血、肿瘤归巢淋巴结和肿瘤组织细胞中调节性T细胞(Tregs)百分比,肿瘤组织中CCL17的表达,趋化因子受体4(CCR4)在外周血和肿瘤组织细胞表面的表达百分比和肿瘤组织细胞核转录因子κB(NF-κB)p65的表达。结果大黄[庶虫]虫丸能明显抑制小鼠结肠癌的生长,且呈剂量依赖性;大黄[庶虫]虫丸各剂量组肿瘤组织中Tregs明显减少(P<0.05),肿瘤组织中CCL17的荧光强度明显下降(P<0.05);模型组的CCR4+Tregs百分比和CCL17荧光强度最高,大黄[庶虫]虫丸各剂量组随着用药浓度增加,CCR4+Tregs百分比和CCL17荧光强度均表现为依次降低(P<0.05);大黄[庶虫]虫丸能显著抑制结肠癌细胞NF-κB的活化(P<0.05),NF-κB p65的荧光比例显著降低。结论大黄[庶虫]虫丸可通过减少肿瘤组织中Tregs的聚集,降低肿瘤组织中CCL17的表达,下调CCR4在Treg细胞表面的表达比率,降低结肠癌细胞NF-κB p65在细胞内的表达,从而抑制CT26小鼠结肠癌细胞的生长。     

日本血吸虫再感染相关蛋白基因的克隆和原核表达

目的 从日本血吸虫(S．japonicum)尾蚴文库扩增S．japonicum再感染相关蛋白(RIRP)基因．进行克隆并原核表达出RIRP，为进一步的功能研究奠定基础。方法 根据已登陆的S．japonicum成虫期RIRP基因的序列设计两条特异引物，以S．japonicum尾蚴cDNA文库为模板扩增RIRP基因cDNA，将该基因的cDNA克隆入原核表达载体pGEX-4T-1和真核载体pcDNA3．1。转化的克隆通过氨苄青霉素的筛选、PCR扩增、双酶切和最后的测序鉴定。重组的pGEX-4T-1／RIRP在大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE鉴定其在大肠埃希菌中的表达情况和分子质量。用抗-26 ku GST单抗作western杂交进一步鉴定融合蛋白的表达。结果 从S．japonicum尾蚴文库中扩增出一条长为462 bp的cDNA片段，经测序证实其为RIRP基因的全长cDNA。它编码含153个氨基酸的蛋白质-RIRP，预测其分子质量单位为17．545ku。RIRP cDNA已被成功克隆人pGEX-4T-1和pcDNA3．1载体，大肠埃希菌BL21(DE3)编码一个约17ku的蛋白质。结论 RIRP基因首次从S．japonicum尾蚴文库中扩增出来，并成功构建了原核和真核表达载体，而且，它首次由大肠埃希菌表达，表达蛋白的分子质量单位约17ku。     

日本血吸虫再感染相关蛋白基因的克隆和原核表达

目的　从日本血吸虫 (S .japonicum )尾蚴文库扩增S .japonicum再感染相关蛋白 (RIRP)基因 ,进行克隆并原核表达出RIRP ,为进一步的功能研究奠定基础。　方法　根据已登陆的S .japonicum成虫期RIRP基因的序列设计两条特异引物 ,以S .japonicum尾蚴cDNA文库为模板扩增RIRP基因cDNA ,将该基因的cDNA克隆入原核表达载体 pGEX 4T 1和真核载体 pcD NA3 .1。转化的克隆通过氨苄青霉素的筛选、PCR扩增、双酶切和最后的测序鉴定。重组的 pGEX 4T 1/RIRP在大肠埃希菌BL2 1(DE3 )中进行表达。SDS PAGE鉴定其在大肠埃希菌中的表达情况和分子质量。用抗 2 6kuGST单抗作western杂交进一步鉴定融合蛋白的表达。　结果　从S .japonicum尾蚴文库中扩增出一条长为 462bp的cDNA片段 ,经测序证实其为RIRP基因的全长cDNA。它编码含 15 3个氨基酸的蛋白质—RIRP ,预测其分子质量单位为 17.5 45ku。RIRPcDNA已被成功克隆入 pGEX 4T 1和pcDNA3 .1载体 ,大肠埃希菌BL2 1(DE3 )编码一个约 17ku的蛋白质。　结论　RIRP基因首次从S .japonicum尾蚴文库中扩增出来 ,并成功构建了原核和真核表达载体 ,而且 ,它首次由大肠埃希菌表达 ,表达蛋白的分子质量单位约 17ku。     

地黄多糖对 SD大鼠骨髓间充质干细胞骨向诱导的实验研究

目的：观察地黄多糖对 SD 大鼠骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）增殖及骨向分化的影响。方法：采用全骨髓贴壁法分离培养SD 大鼠骨髓间充质干细胞;MTT 法检测不同浓度地黄多糖在不同时间点（1、3、5、7、9,、11 d）对大鼠 BMSCs 增殖情况的影响;对硝基苯磷酸盐（pNPP）法检测不同浓度地黄多糖在不同时间点（3、7、14 d）对细胞上清中 ALP 活性的影响;茜素红染色法检测不同浓度地黄多糖对 BMSCs 矿化能力的影响。结果：地黄多糖可以促进BMSCs 增殖,其最佳浓度为50μg/mL, P＜0.05;同时可以促进 BMSCs向成骨分化,其最佳浓度也为50μg/mL,P＜0.05。结论：地黄多糖具有促 BMSCs 增殖及骨向分化的作用。     

α平滑肌肌动蛋白红色荧光蛋白报告基因载体的构建及其在细胞中的表达

目的构建α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,为研究细胞内α-SMA的基因表达调控提供重要工具。方法克隆并构建含α-SMA启动子区的红色荧光报告质粒pDsRed-SMAp;用脂质体瞬时转染上皮细胞A549,观察α-SMA启动子对转化生长因子（TGF-β1）刺激的反应。结果酶切和DNA测序证明所构建的红色荧光蛋白报告基因载体是pDsRed-SMAp重组载体;该表达载体在上皮细胞静息状态下表达水平很低,经TGF-β1,刺激后,在荧光显微镜下可看到高亮度的红色荧光。结论成功构建了α-SMA启动子驱动的红色荧光蛋白报告质粒pDsRed-SMAp,对生理相关刺激有很好的反应,可有效地用于α-SMA基因表达调控机制的研究。     

热带病研究新进展

一种新型抗疟原虫药物已经被报道 ,代号Ｇ2 5的这种药物可以阻止红内期的疟原虫构建它的细胞壁。在体外和猴 (Ｏｗｌｍｏｎｋｅｙｓ)体内的实验显示它和奎宁相比有显著的活性和相对低的毒性[1] 。第一个对自然感染的恶性疟原虫有明显保护作用的红细胞前期疫苗是ＲＴＳ ,Ｓ。据报道在冈比亚 ,该疫苗与新型佐剂ＡＳＯ2合用 ,对那些免疫不完全的恶性疟原虫感染者部分有效。保护作用是部分而且短时的 ,但是这种疫苗在低度流行区域或低传播季节可能具有潜在的应用价值[2 ] 。ＷＨＯ已将Ｃｏａｒｔｅｍ ,一种青蒿素和非青蒿素混合物 (蒿甲醚 / )的…     

日本血吸虫TCTP编码基因DNA免疫的效果评价

目的评价pEGFP-TCTP真核重组质粒联合免疫佐剂CpG诱导小鼠保护性免疫的效果。方法构建日本血吸虫TCTP真核重组质粒,将pEGFP-TCTP注射入BABL/c小鼠,采用ELISA法检测免疫小鼠血清中IFN-γ水平;尾蚴攻击感染后45d处死小鼠,收集成虫和虫卵,计算减虫率和减卵率;小鼠肝脏送病理切片,计算虫卵肉芽肿的数量。结果TCTPDNA免疫保护性效果显示:实验组与阴性对照组相比,显示出一定的保护性效果,TCTP组的减虫率和减卵率分别为43.91%和53.48%,与GST组效果相似。DNA免疫后及感染后期,TCTP组与PBS对照组血清IFN-γ水平有显著性差异(P<0.05);攻击感染前后组间比较发现,GST组和GST CpG组有显著性差异(P<0.05),提示CpG显著提高了DNA免疫的效果。结论SjTCTPDNA免疫能诱导较明显的保护性Th1免疫应答,CpG基序可以有效的诱导保护性Th1免疫应答,是一种有效的DNA免疫佐剂。     

日本血吸虫TCTP编码基因DNA免疫的效果评价

目的评价pEGFP—TCTP真核重组质粒联合免疫佐剂CpG诱导小鼠保护性免疫的效果。方法构建日本血吸虫TCTP真核重组质粒．将pEGFP—Tc口注射入BABL／c小鼠，采用ELISA法检测免疫小鼠血清中IFN-γ水平；尾蚴攻击感染后45d处死小鼠，收集成虫和虫卵，计算减虫率和减卵率；小鼠肝脏送病理切片，计算虫卵肉芽肿的数量。结果TCTP DNA免疫保护性效果显示：实验组与阴性对照组相比，显示出一定的保护性效果．TCTP组的减虫率和减卵率分别为43．91％和53．48％．与GST组效果相似。DNA免疫后及感染后期，TCTP组与PBS对照组血清IFN-γ水平有显著性差异（P〈0．05）；攻击感染前后组间比较发现，GST组和GST＋CpG组有显著性差异（P〈0．05），提示CpG显著提高了DNA免疫的效果。结论SjTCTP DNA免疫能诱导较明显的保护性Thl免疫应答。CpG基序可以有效的诱导保护性Th1免疫应答，是一种有效的DNA免疫佐剂。     

日本血吸虫翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因真核表达质粒的构建及其序列分析

目的研究日本血吸虫翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因的生物学功能.方法根据已公布的日本血吸虫TCTP(SjTCTP)基因序列设计引物,从日本血吸虫成虫cDNA文库中扩增出TCTP基因ORF序列,并克隆到真核表达载体pcDNA3.O中.结果通过PCR扩增、双酶切及测序鉴定证实重组质粒pcDNA3.O-TCTP已正确插入SjTCTP基因ORF序列,该序列具有TCTP特征性TCTP1和TCTP2结构.结论 SjTCTP基因真核表达质粒构建成功,为研究SjTCTP基因的生物学功能打下基础.