基于UPLC指纹图谱结合化学模式识别的丹灯通脑软胶囊质量控制研究

采用UPLC建立丹灯通脑软胶囊的指纹图谱,并结合化学模式识别技术对其进行系统、全面和科学的质量评价。采用Waters UPLC超高效液相色谱仪,ACQUITY UPLCHSS T3色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,检测波长256 nm,建立10批次丹灯通脑软胶囊的指纹图谱;同时通过相似度分析并结合聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)等模式识别技术对丹灯通脑软胶囊的总体质量进行分析评价。结果显示,该研究建立的指纹图谱共标定77个共有峰,经对照品进行化学指认并鉴定了其中的15个色谱峰。10批供试品的相似度均大于0.960,表明该药物总体质量较为稳定;但通过CA及PCA均发现不同批次药物质量之间仍然存在有微小差异,且主要分为两大类,最后进一步采用OPLS-DA筛选出了导致批次药物质量差异的6个共有峰。该分析方法科学、准确、可靠且简便易行,指纹图谱结合化学模式识别技术可更加系统、全面地评价丹灯通脑软胶囊的药物质量,同时为中药及其制剂的质量控制提供参考。     

基于UPLC指纹图谱结合化学模式识别的复方血栓通胶囊质量控制研究

目的： 采用UPLC法建立复方血栓通胶囊的指纹图谱，并结合化学模式识别技术对其进行系统、全面和科学的质量评价。方法： 采用Waters UPLC超高效液相色谱仪，ACQUITY UPLC^® HSS T3色谱柱，以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱，检测波长为256 nm，建立10批次复方血栓通胶囊的指纹图谱。通过相似度分析并结合聚类分析（CA）、主成分分析（PCA）及正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）等模式识别技术对复方血栓通胶囊的总体质量进行分析评价。结果： 建立的指纹图谱共标定67个共有峰，经对照品进行化学指认并鉴定了其中的12个色谱峰。10批供试品的相似度均大于0.96，表明该药物总体质量较为稳定；但通过CA及PCA均发现不同批次药物质量之间仍然存在有微小差异，且主要分为两大类，最后进一步采用OPLS-DA筛选出了导致批次药物质量差异的7个共有峰。结论： 本研究建立的分析方法科学、准确、可靠且简便易行，指纹图谱结合化学模式识别技术可更加系统、全面地评价复方血栓通胶囊的药物质量。     

基于超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱的益心舒片中多种成分定量测定研究

目的建立基于超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱的益心舒片中多成分(绿原酸、芦丁、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、欧当归内酯A、丹参酮Ⅱ_A)的定量分析方法。方法采用BEH C_(18)色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.2 m L/min;质谱采用ESI离子源,平行反应监测(PRM)的扫描方式进行检测。结果在优化的色谱质谱条件下,绿原酸、芦丁、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、欧当归内酯A、丹参酮Ⅱ_A分别在0.3～3.0、0.000 5～0.005 0、0.01～0.10、0.04～0.40、0.1～1.0、5.0～50.0、0.2～2.0、0.1～1.0、0.1～1.0、0.004～0.040、5.0～50.0μg/m L线性关系良好(r≥0.999 5);精密度、重复性及稳定性良好;加样回收率在99%～102%,RSD均小于3%;本研究所测成分在各批次样品中的质量分数依次为绿原酸217.80～502.25μg/g、芦丁0.50～0.59μg/g、咖啡酸8.45～13.54μg/g、阿魏酸2.61～3.56μg/g、迷迭香酸66.70～188.56μg/g、丹酚酸B 4 002.53～8 793.80μg/g、丹酚酸A 158.04～321.65μg/g、丹参酮Ⅰ 127.72～612.48μg/g、隐丹参酮75.56～285.70μg/g、欧当归内酯A 2.68～3.98μg/g、丹参酮Ⅱ_A 2 921.86～6 085.88μg/g。结论本实验建立的方法灵敏度高且准确性好,方法学考察结果符合测定要求,可用于益心舒片中多种活性成分的快速测定;并为其质量评价提供新的科学依据和参考。     

基于UHPLC-Q-Orbitrap和网络药理学的灯盏生脉胶囊治疗心绞痛的机制研究

目的系统阐明灯盏生脉胶囊中的化学成分组成,并初步探究其治疗心绞痛的作用机制。方法采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术对灯盏生脉胶囊中的化合物进行准确定性,并结合网络药理学分析在灯盏生脉胶囊中治疗心绞痛过程中起调控作用的靶点及通路。结果共鉴定出黄酮类、木脂素类、酚酸类、皂苷类和其他类共5类共30种化合物,其中16种化合物为灯盏生脉胶囊入血成分,可通过调控丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)通路和p53通路等来发挥治疗心绞痛的作用。结论为探索灯盏生脉胶囊药效物质基础提供了新的思路,并为指导临床合理用药提供了科学的理论依据。     

基于UPLC-Q-Orbitrap HRMS益智仁中倍半萜类物质的分析与鉴定

目的 建立中药复杂体系快速、准确鉴定的分析方法，系统阐明益智仁（益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实）中倍半萜类物质的化学组成。方法 采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱（UPLC-Q-Orbitrap HRMS）技术，在优化倍半萜类物质提取工艺的基础上，通过质谱全扫描捕捉未知化合物的精确相对分子质量及二级碎片离子信息，同时与对照品的相对保留时间和质谱数据进行比对，并结合相关参考文献及数据库，实现对益智仁中倍半萜类未知化合物的准确快速鉴定。结果 共鉴定出24种倍半萜类化合物，根据骨架结构将其归为4类，其中9个桉叶烷型、6个杜松烷型、8个艾里莫芬烷型、1个刺参酮型。结论 利用所建立的分析方法，实现对益智仁中多种倍半萜类成分的快速、准确鉴定，为益智仁药效物质基础及质量控制研究提供理论依据。     

UHPLC-Q-Orbitrap HRMS结合主成分分析的芪参益气滴丸质量评价研究

目的：建立基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS的芪参益气滴丸中多种活性成分定量分析方法,并采用主成分分析法对其质量进行综合评价。方法：本实验采用ACQUITY UPLC^® BEH C₁₈色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.7 μm）,以乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）为流动相进行梯度洗脱,以实现化合物的前期分离;然后通过Q-Orbitrap MS先进的正负离子同时监测、一级全扫描及自动触发二级质谱扫描的模式捕捉目标成分的精确分子量及碎片离子信息,以实现对待测物的准确定性和定量;最后将定量结果与主成分分析法相结合对不同批次药物进行科学的质量评价分析。结果：在优化的色谱质谱条件下,甜菜碱、琥珀酸、丹参素钠、丹参素、原儿茶酸、咖啡酸、原儿茶醛、人参皂苷Rg1、迷迭香酸、丹酚酸A、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和丹参酮ⅡA分别在0.013 7~0.439 7、0.050 2~1.607 5、0.837 0~26.785 1、1.457 9~46.653 8、0.012 4~0.397 0、0.002 8~0.088 7、0.216 5~6.927 0、0.265 0~8.479 4、0.143 2~4.583 7、0.143 0~4.574 5、0.019 1~0.611 7、0.006 1~0.193 7、0.001 0~0.032 2、0.002 8~0.090 9、0.001 8~0.058 4 μg·mL^-1线性关系良好（r ≥ 0.999 0）;精密度、重复性及稳定性良好（RSD ≤ 5%）;加样回收率在98%~101%,RSD均小于4%;定量分析结果表明大多数批次药物质量较为稳定,其中丹参素、丹参素钠和丹酚酸A对药物质量具有较大影响,可对其进行重点监控以保证药物批次质量。结论：本实验建立的定量方法灵敏度高且准确性好,方法学考察结果符合测定要求,可用于芪参益气滴丸中多种活性成分的快速测定;并为其质量评价提供新的科学依据和参考。     

昆仙胶囊治疗蛋白尿的“成分-靶点-通路”研究

目的：系统研究昆仙胶囊的主要化学成分,并探讨其治疗蛋白尿的主要作用机制,为其药效物质基础研究提供一定的科学依据。方法：基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术对昆仙胶囊中的化学成分进行全面分析,根据化合物的一级、二级质谱信息,并与对照品或参考文献进行比对,以实现对药物的化学信息进行快速、精准识别。在此基础上,采用网络药理学方法对药物的化学成分进行靶标分析、功能富集,初步筛选出药物的主要药效物质,并探讨其作用机制。结果：从昆仙胶囊中共鉴定出51种化学成分,通过OB≥30%和DL≥0.18筛选得到雷公藤红素、淫羊藿苷、朝藿定B、淫羊藿素、儿茶酚、槲皮素、山柰酚、木犀草素、表儿茶素、异鼠李素、儿茶素、甘氨酸等12个主要活性成分;昆仙胶囊靶点220个;尿蛋白靶点2 179个;昆仙胶囊降低尿蛋白靶点115个,主要核心靶点为AKT1、VEGFA、TNF、IL6、TP53、CASP3、MMP9、JUN、MAPK1和EGF;昆仙胶囊降低蛋白尿涉及GO 158条,主要为Inflammatory response等;KEGG通路分析主要得到61条信号通路,主要为PI3K-Akt signaling pathway等。结论：昆仙胶囊可能主要通过对PI3K-Akt、TNF、HIF-1、FoxO、MAPK和TLR等信号通路的干预来发挥治疗蛋白尿的作用,体现了昆仙胶囊多成分、多靶点、多途径的作用特点,为进一步深入揭示昆仙胶囊治疗蛋白尿的作用机制奠定了一定基础。     

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术的益心颗粒化学成分研究

目的 建立一种快速、准确识别益心颗粒中复杂化学成分的定性分析方法。方法 主要通过UHPLC-Q-Orbitrap HRMS捕捉化合物的精准分子量以及多级碎片离子信息,同时将其与对照品的保留时间和质谱信息进行比对,并结合相关参考文献或Chemical Book等数据库信息最终实现对未知化合物的快速定性。结果 从益心颗粒中共鉴定出43种化学成分,主要包括有机酸类、内酯类、木脂素类、甾体皂苷类和其他类。结论 该方法可快速、准确、系统地识别益心颗粒中多种化学成分,并为其质量控制、药效物质基础研究及进一步的临床应用提供扎实的理论依据和科学的研究思路。