线粒体膜电位在三氧化二砷诱导K562细胞凋亡中的作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡的发生机制。方法分别以1、2、4、8、16μmol/LAs2O3诱导K562细胞凋亡,MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率,DNA Ladder法检测细胞凋亡,Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Rhodamine123染色流式细胞术检测线粒体膜电位(ΔΨm)变化,ELISA法检测胞浆细胞色素C(CYTC)水平,分光光度法检测Caspase-3活性,流式细胞术检测Bcl-2和Bax表达。结果MTT结果显示As2O3能抑制K562细胞生长,且呈现时间剂量依赖性;4~16μmol/L的As2O3作用24h均可诱导K562细胞凋亡,同时伴有ΔΨm下降,胞浆内CYTC蛋白浓度及Caspase-3活性增高,胞浆Bcl-2/Bax值下降,且均呈剂量依赖性。结论As2O3诱导K562细胞凋亡可能是通过降低ΔΨm,激活线粒体凋亡途径实现的,Bcl-2/Bax值下降可能与其有关。     

儿童过敏性鼻炎特异性免疫治疗过程中外周血CD4＋调节性T细胞的变化及意义

目的：探讨儿童过敏性鼻炎（allergic rhinitis, AR）的发病及特异性免疫治疗（specific immunotherapy, SIT）的治疗机制。方法采用流式细胞术检测56例 AR 患者 SIT 治疗前、治疗1年后外周血中 CD4＋CD25＋CD127lo/-Treg表达水平：采用ELISA 法检测血清中IL-10、TGF-β1,并与30例健康儿童进行对比。结果56例AR患儿 SIT 治疗前外周血中 CD4＋CD25＋CD127lo/-Treg 占 CD4＋ T 细胞的百分比为（5.36＆#177;1.31）%,显著低于对照组（10.23＆#177;2.26）%,P＆lt;0.05,但SIT治疗1年后其数值为（9.37＆#177;2.15）%,与对照组无明显差异。 AR患儿治疗前血清中IL-10值为（3.68＆#177;1.21）pg/ml,显著低于对照组的（12.37＆#177;2.18）pg/ml,P＆lt;0.05;TGF-β1表达水平与对照组比较差异无统计学意义。 SIT 治疗1年后血清中IL-10水平亦与对照组差异不明显（P＆lt;0.05）;而TGF-β1表达水平分别为（20.16＆#177;4.45）pg/ml及（9.27＆#177;2.38）pg/ml,其差异有统计学意义（P＆lt;0.05）。结论儿童AR患者外周血中CD4＋Treg表达水平低,且存在功能缺陷,导致体内诱导免疫耐受机能不足,SIT治疗可以明显调节免疫免疫细胞的功能。     

B7/CD28在强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞中的表达及意义

目的:探讨B7/CD28分子在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者外周血淋巴细胞中的表达及意义.方法:采用流式细胞仪检测69例AS患者和50例健康对照者外周血淋巴细胞表面标志CD3、CD4、CD8、CD19的表达情况,检测CD28在CD3 CD4 T细胞和CD3 CD8 T细胞上的表达以及B7-1和B7-2在CD19 B细胞上的表达情况.用ELISA法测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的水平.结果:AS患者CD3 、CD3 CD4 、CD19 细胞较正常对照组增高(P＜0.05),CD3 CD8 T细胞较正常对照组降低(P＜0.05);AS患者CD3 CD4 T细胞和CD3 CD8 T细胞上的CD28、CD19 B细胞上B7-1和B7-2的表达较正常对照组增高(P＜0.05);AS患者血清中IgG、IgA的水平较正常对照组显著增高(P＜0.01).结论:B7/CD28分子的异常表达可能与AS患者T淋巴细胞和抗原呈递细胞(APC)的功能变化有关.B7-1低水平与B7-2的高水平表达表明,AS患者T细胞的活化可能主要是通过CD28与B7-2的交联传递共刺激信号,介导以Th2型反应为主的免疫应答反应,产生大量的免疫球蛋白.     

三氧化二砷通过JNK信号通路诱导K562细胞凋亡

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡中的作用及机制。方法:体外培养K562细胞,用As2O3及特异性JNK抑制剂SP600125对K562细胞进行处理;倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率;AnnexinV/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测p-JNK蛋白表达的变化;流式细胞术检测突变型P53表达。结果:ELISA显示4μmol/LAs2O3作用48h后p-JNK蛋白表达增强,经SP600125预处理后,As2O3诱导的K562细胞p-JNK蛋白表达明显减弱(P<0.01),As2O3诱导的细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均下降,与As2O3单作用组相比突变型P53表达增加(P<0.05)。结论:JNK信号转导通路在As2O3诱导K562细胞凋亡过程中发挥重要作用,是As2O3诱导K562细胞凋亡的主要途径之一。     

苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的:研究苦瓜蛋白对诱导K562细胞凋亡相关基因P53和Bcl-2表达的影响。方法:采用CCK-8法检测苦瓜蛋白对K562细胞体外生长的影响;采用Giemsa染色和电镜观察细胞形态学变化;利用流式细胞仪,采用Anexinn-V法检测苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡的作用;采用流式细胞仪检测苦瓜蛋白对Bcl-2和突变型P53蛋白表达的影响。结果:K562细胞经苦瓜蛋白处理后,细胞生长受到明显抑制,光镜和电镜下见到典型的细胞凋亡形态学变化;Anexinn-V法检测到细胞凋亡,凋亡率随药物作用时间延长而升高,5μg/ml苦瓜蛋白诱导凋亡效果最明显;Bcl-2和突变型P53表达下降。结论:苦瓜蛋白能够诱导K562细胞凋亡,发生机理与其调控Bcl—2和突变型P53的表达有关。     

苦参碱诱导RPMI8226细胞凋亡及其对Bcl-2、增殖细胞核抗原蛋白表达的影响

目的：研究苦参碱是否具有诱导RPMI8226细胞凋亡的生物学活性,探讨苦参碱对RPMI8226细胞Bcl-2及增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的影响及其作用的分子机制。方法：CCK-8法检测一定浓度的苦参碱对RPMI8226细胞的体外增殖抑制作用;AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡;PI单染色法检测细胞周期改变;同时应用流式细胞术检测Bcl-2及PCNA蛋白表达的变化。结果：苦参碱对RPMI8226细胞生长具有明显的抑制作用,呈量效和时效关系;苦参碱能诱导RPMI8226细胞凋亡,呈量效关系;细胞周期分析,G0/G1期细胞相对增多、S期相对减少、G2/M期无明显变化。苦参碱处理组RPMI8226细胞中Bcl-2及PCNA蛋白的表达跟未加药组相比阳性表达率均降低。结论：苦参碱对RPMI8226细胞生长具有明显抑制作用,其作用主要通过诱导RPMI8226细胞产生细胞周期阻滞和凋亡,降低PCNA的表达。苦参碱诱导RPMI8226细胞凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达下调对调控细胞凋亡有重要作用。     

线粒体膜电位在三氧化二砷诱导 K562 细胞凋亡中的作用

目的 探讨三氧化二砷 (As2O3) 诱导 K562 细胞凋亡的发生机制。方法 分别以 1、2、4、8、16 μmol/L As2O3 诱导 K562 细胞凋亡,MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率,DNA Ladder 法检测细胞凋亡,Annexin V/PI 染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Rhodamine 123 染色流式细胞术检测线粒体膜电位 (ΔΨm) 变化,ELISA 法检测胞浆细胞色素C (CYTC) 水平,分光光度法检测 Caspase-3 活性,流式细胞术检测 Bcl-2 和 Bax 表达。结果MTT结果显示 As2O3 能抑制 K562 细胞生长,且呈现时间剂量依赖性;4～16 μmol/L 的 As2O3 作用 24 h 均可诱导 K562 细胞凋亡,同时伴有ΔΨm下降,胞浆内 CYTC 蛋白浓度及 Caspase-3 活性增高,胞浆 Bcl-2/Bax 值下降,且均呈剂量依赖性。结论 As2O3 诱导 K562 细胞凋亡可能是通过降低ΔΨm,激活线粒体凋亡途径实现的,Bcl-2/Bax 值下降可能与其有关。     

苦瓜蛋白在K562/A02细胞生长抑制和凋亡中的作用及其机制研究

目的:研究苦瓜蛋白(momordin)诱导人慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02的凋亡及作用机制.方法:采用CCK-8法检测细胞生长抑制率,FCM法和细胞形态学检测细胞凋亡,FCM法检测P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)、p53、bcl-2和caspase-3蛋白表达水平,并运用caspase-8活性检测试剂盒检测caspase-8的活性.结果:苦瓜蛋白能抑制K562/A02耐药细胞的生长且呈剂量依赖关系,并能诱导细胞凋亡,能使P-gp、p53和bcl-2的表达下降,而使caspase-3和caspase-8活性增强.结论:苦瓜蛋白可逆转耐药细胞株K562/A02的细胞凋亡受抑性,主要机制可能与其下调p53、P-gp和bcl-2的表达以及提高caspase活性有关.     

银屑病患者外周血T细胞亚群及B7/CD28的表达

银屑病的确切发病机制尚不清楚。近年来的免疫学研究表明,银屑病可能是一种T细胞介导的自身免疫性疾病,T细胞的活化是其发病的重要环节。共刺激分子CD28、CD80、CD86是决定T细胞激活的关键因素。本文采用流式细胞仪检测银屑病患者外周血T细胞及其亚群的变化,以及这些共刺激分子     

抗CD20scFv-Fc-CD28/ζ基因修饰T细胞靶向杀伤Raji细胞的研究

目的 研究重组抗cD20scFv-Fc-CD28/ζ基因修饰T淋巴细胞在杀伤Raji细胞时T细胞活化情况和诱导Raji细胞凋亡的变化,进一步探讨特异基因修饰T细胞杀伤淋巴瘤细胞的机制.方法 将重组质粒转染至PA317细胞中,用转染成功的PA317培养液感染外周血T淋巴细胞后,用800μg/ml的G418筛选1周后杀伤Raji细胞,分别在不同时间点用流式细胞仪检测Raji细胞Bcl-2的阳性率,用ELISA检测培养上清液中的IL-10、IFN-γ.结果 Raji细胞Bcl-2的阳性率在24 h内就明显下降,72 h内由98.43%下降到38.45%,下降幅度明显高于对照组和空白组.72 h检测IL-10发现实验组为100.3 pg/ml,明显低于对照组(210.88 pg/ml)和空白组(286.71 pg/ml),同时IFN-γ的分泌量(1487.23 pg/ml)也显著高于对照组.结论 抗CD20介导的T细胞靶向杀伤Raji细胞不需要CD28的协同刺激.CD28和CD3ζ协同刺激可增强T细胞抑制Raji细胞TL-10表达使其降低Bcl-2的表达从而加速靶细胞的裂解.CD28/ζ在没有外源协同刺激分子B7/CD28时能允分激活T细胞,促进其分泌IFN-γ,增强了抗CD20修饰T细胞靶向杀伤Raji细胞的能力.