幽门螺杆菌基因组DNA芯片的研制

目的研制幽门螺杆菌(H.pylori)基因组DNA芯片。方法以H.pylori26695和J99作为模板,利用多聚酶链反应(PCR)扩增得到所需要的开放阅读框(open reading frame,ORF)片段。使用Genemachine点样仪进行点样,采用Cy3-dCTP或Cy5-dCTP以及Klenow片段标记H.pylori基因组DNA,并完成芯片杂交和数据读取。数据判断标准是标化后Cy3/Cy5比值(ratio)<0.5则认为不存在这一基因(记作0),若ratio值≥0.5则认为存在这一基因(记作1)。使用芯片重复性、信噪比以及假阳性率和假阴性率评估芯片质量。结果研制的H.pylori基因组DNA芯片共包括1 882个基因片段,相对应于1 636个ORF,其中H.pylori26695为1 549个,H.pyloriJ99为87个。信噪比(S/N)<2的基因点数约为10%。芯片的假阳性率分别为3.4%(H.pylori26695)和7.21%(H.pyloriJ99),假阴性率分别为0.27%(H.pylori26695)和0.24%(H.pyloriJ99)。芯片内点间重复率为98%,芯片间重复率为97%。结论成功制备了H.pylori基因组DNA芯片,所制备的芯片具有较高点一致性、信噪比和统计学重复性,为在全基因组范围内进行H.pylori的基础和应用研究提供了一工具。     

BALB/c和C57BL/6小鼠在基因功能检测中行为学的比较研究

1 Introduction 1.1 THE CONCEPT OF ANIMAL CARE.Ethics and the developing demand for relevant legislation During the late 19th Century there was an increasing concern in the UK with respect to a aspects of illtreatment of animals. This was reflected in the thinking of the research community and in 1871 The British Association For the Advancement of Science issued a set of basic principles of animal experimentation.This was a response to the growing awareness by the BA of the need for an ethical approach to biomedical research and for the considerate treatment of laboratory animals.     

首次在我国发现多发性脂囊瘤患者角蛋白17的突变

多发性脂囊瘤(ｓｔｅａｔｏｃｙｓｔｏｍａｍｕｌｔｉｐｌｅｘ)也称为多发性皮脂囊肿,是一种少见的常染色体显性遗传病,以全身多发性皮肤囊肿为特点。1994年我们在徐州市遗传病流行病学调查中发现3例患者,为一个家系成员。经追踪调查,在此家系5代人中共发现患者31例。1998年4月我们与中国科学院上海生物工程中心合作开始对该家系进行基因分析,应用连锁分析、ＲＴ-ＰＣＲ、限制性片段长度多态性和序列分析等方法首次在国内证实该家系患者角蛋白(ｋｅｒａｔｉｎ)17第94位密码子发生突变,使原编码的氨基酸由精氨酸变为半胱氨酸,即Ｒ94Ｃ的错义…     

用BALB/c小鼠制作抗青霉素酰化酶和抗头孢菌素酰化酶抗体及其交叉反应的观察

用3种不同方法制备的抗原分别免疫BALB／c小鼠，制备了抗青霉素酰化酶a亚基、β亚基和抗头孢菌素酰化酶a亚基、β亚基共4种抗体，测定了它们的效价并比较这几种方法的优缺点；还比较了用同一种方法制备的抗原免疫小鼠后制作这两类抗体的效价以及上述毛种抗体的交叉反应。结果：用割胶法制备的抗原（加用不完全佐剂）免疫小鼠后所得抗体效价较高，且所制备的两类抗体效价无显著差异：在交叉反应测试中，抗头孢菌素酰化酶抗体也能识别青霉素酰化酶，但抗青霉素酰化酶抗体却几乎不能识别头孢菌素酰化酶，说明抗青霉素酰化酶抗体更为专一、而同类抗体对相应抗原的2个亚基之间的交叉反应说明其互相结合部位的结构有类似之处，同时也说明只有进一步制作单克隆抗体才能提高抗体的特异性。##6—动物实验—     

在新分离的稀有放线菌群体中检测线型染色体、质粒和噬菌体

稀有放线菌属于革兰阳性细菌，具有重要的应用价值。目前对绝大多数稀有放线菌还没有合适的遗传操作系统。本文报道利用脉冲电泳技术和碱变性方法，对土壤中新分离的约200株稀有放线菌的遗传物质进行了检测。结果显示，除约20个菌株的染色体可能为环型结构外，其余染色体为线型结构。在检测到的染色体外遗传因子中，包括在诺卡菌属菌株中检测到1个线型质粒、4个环型质粒和1个噬菌体，此外，在链孢囊菌属中首次检测到1个质粒。这些遗传因子的发现，为发展稀有放线菌类群的遗传操作体系提供了基础。     

多发性脂囊瘤患者角蛋白17基因突变的研究

目的 了解多发性脂囊瘤和角蛋白17基因异常的关系。方法 应用逆转录-聚合酶链反应及其产物直接测序,巢式聚酶链反应及限制性片段长度多态性分析。研究多发性脂囊瘤家系中患者患肿组织cDNA及外周血DNA的角蛋白17基因突变。结果 囊肿组织显示角蛋白17基因第94位密码子,428碱基发生C→A的突变,使原编码的氨基酸曲精氨酸变为半胱氨酸,即R94C的杂合突变。巢式聚合酶链反应后Acil限制酶谱多态性分析,显示患者多周血DNA标本均有一条突变等位基因缺乏该酶酶切位点,产生200bp的条带,另有一条野生型等位基因已被切开,形成2条带,分别为108bp,92bp,进一步证实R94C的突变,系杂合性突变,而正常人10人份及2000人份正常人DNAPool标本2条等位基因均有Acil的酶切位点,只显示108bp和92bp3条带。结论 角蛋白17基因R94C的突变,是导致中国人多发性脂囊瘤的遗传学基础之一。这一研究结果为该病的基因诊断及遗传咨询提供了科学依据。     

胞内抗体研究进展及临床应用前景

胞内抗体(intracellular antibody,intrabody)是一类在细胞内表达、特异性地靶向胞内抗原以期实现对相应功能的调节甚至阻断的新型基因工程抗体。最常见的胞内抗体形式为单链抗体(ScFv)。通过相应定位信号肽序列,胞内抗体能定位于胞浆、胞核、内质网、线粒体、高尔基体、细胞膜和过氧化酶体等各种细胞器,以实现对靶标抗原的功能性调控。其应用也由早先的干扰病毒复制和抑制肿瘤生长,逐渐拓展至治疗中枢神经系统退行性疾病、自身免疫病以及抑制免疫排斥等方面。本文对胞内抗体的作用机制、筛选策略、优缺点、应用及跨膜抗体作一综述。     

关于法定计量单位使用的注意事项

为研究深低温停循环（DHCA）和深低温低流量（DHLF）两种体外循环方法对肺功能的影响,采用幼猪模拟临床复制出DHCA和DHLF模型,于转流前,转流结束和停体外循环后1h等3个时点测定肺顺应性,气道阻力,动脉－肺泡氧分压比率,肺血管阻力指数和中性粒细胞滞留率等指标值,结果表明DHLF后,肺顺应性和动－肺泡氧分压比率的下降程度,肺血管阻力指数和中性粒细胞滞留率的增加程度均明显高于DHCA,两组气道阻力无差别,结果提示,DHLF较之DHCA对肺的的损伤更为严重。     

抗H5N1禽流感病毒VHH抗体库的构建

目的:构建抗H5N1禽流感病毒的小羊驼免疫噬菌体重链可变区抗体库(VHH型抗体库),为抗H5N1的VHH抗体筛选奠定基础。方法:利用H5N1灭活疫苗免疫小羊驼,一定免疫时间后测定小羊驼外周血清中抗体中和活性,分离其外周淋巴细胞,利用RT-PCR方法得到VHH抗体片段。通过优化连接和电转化方法,将足量VHH片段与pCANTAB5E连接后电转入大肠杆菌TG1,获得VHH抗体基因库;检测基因库库容以及多样性,并采用血凝抑制试验对噬菌体抗体库进行初步功能性鉴定。结果:利用H5N1灭活疫苗免疫小羊驼四次后,其外周血清中抗体血清抑制效价可达1∶2 560,构建的VHH抗体基因库库容可达3×108,随机挑选14个抗体基因克隆进行测序鉴定,结果显示均为独立克隆,表明所建抗体库多样性好。上述基因库经辅助噬菌体拯救后,得到抗H5N1的噬菌体VHH型抗体初级库,对初级库进行血凝抑制试验,结果呈阳性,表明初级库中存在具有潜在中和活性的抗H5N1抗体。结论:结果表明,已成功构建抗H5N1禽流感病毒的小羊驼免疫噬菌体重链抗体库,为进一步筛选抗H5N1禽流感的重链抗体打下良好基础,并为H5N1的早期临床诊断和治疗提供新的手段。