幽门螺杆菌重组蛋白PLGA微球和PLGA-壳聚糖复合微球的制备及其释放性能研究

  目的  制备载有幽门螺杆菌重组蛋白（BIB蛋白）的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（poly lactic-co-glycolic acid, PLGA）微球和PLGA-壳聚糖复合微球,优化微球制备参数,并分析两种微球在体外胃、肠液中的释放性能。  方法  采用双乳化-溶剂挥发法（W1/O/W2）制备BIB-PLGA微球和BIB-PLGA-壳聚糖复合微球;通过单因素分析方法,研究水相/油相（W1/O）比例、PLGA质量分数、聚乙烯醇（polyvinyl alcohol, PVA）浓度等对微球外观、粒径、分散指数（polydispersity index, PDI）、包封率和载药率的影响,确定最优参数,采用BCA法测定蛋白浓度,计算微球累计释放率。  结果  本研究的最佳参数条件为:W1/O为1∶2,PLGA质量分数5%,PVA质量分数0.2%。BIB-PLGA微球包封率（78.20±1.73）%,载药率（10.58±0.23）%,粒径（2.11±0.08） μm,PDI（0.35±0.18）;BIB-PLGA-壳聚糖复合微球包封率（78.87±1.30）%,载药率（15.50±0.25）%,粒径（2.28±0.52） μm,PDI（0.39±0.54）。BIB-PLGA微球和BIB-PLGA-壳聚糖复合微球在体外胃、肠液中均能缓慢释放,BIB-PLGA-壳聚糖复合微球的缓释效果更明显。  结论  采用双乳化-溶剂挥发法制备的BIB-PLGA微球和BIB-PLGA-壳聚糖复合微球载药率和包封率都较高,粒径可控,外观分散,对胃肠液有缓释作用。     

稳定表达EGFP-LC3蛋白SH-SY5Y细胞系的构建

目的:建立稳定表达微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)与绿色荧光蛋白(EGFP)形成的融合蛋白(EGFP-LC3)的人神经母细胞瘤株SH-SY5 Y细胞系,验证EGFP-LC3点状聚集物能够实时直观地反映自噬小体和自噬流.方法:以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)的cDNA为模板,克隆LC3,并连接EGFP绿色荧光蛋白.将EGFP-LC3连接入慢病毒载体GV348中,构建慢病毒表达载体EGFP-LC3-GV348.慢病毒转染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5 Y细胞),使用3μg/mL嘌呤霉素筛选并处理细胞1月,筛选得到EGFP-LC3稳转系.诱导自噬后,用共聚焦显微镜观察LC3荧光斑点并定量分析.Western blot检测目的蛋白表达情况.结果:经酶切证实,EGFP-LC3-GV348慢病毒表达载体构建正确.在激光共聚焦显微镜下,可以观察到细胞内的绿色荧光EGFP代表的自噬小体,活体染料LysoTracker Red DND-99将溶酶体染成红色荧光,红色荧光与绿色荧光重叠代表自噬溶酶体.无血清诱导自噬后,自噬小体(绿色荧光斑点)明显增加,差异有统计学意义(P<0.001).Western Blot免疫印迹可见EGFP-LC3融合蛋白表达条带.结论:成功构建了稳定表达EGFP-LC3的SH-SY5 Y细胞系,EGFP-LC3荧光斑点可以直观实时反映自噬囊泡,为进一步探讨神经退行性疾病的自噬机制提供了实验基础.     

体检人群低密度脂蛋白胆固醇计算公式的研究

目的寻找最适合中国人群低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的计算方法。方法将泰州市人民医院的体检者和泰州市中心血站参加免疫体检的献血者共490例纳入研究。对不同公式的计算值和实测值之间的相关性进行分析;对不同公式的计算值与实测值的差值及差值百分比进行计算和比较;评价各公式计算值与实测值的一致性;分析随着TG、HDL-C的增高或降低,4种公式的使用效果。结果 4种LDL-C计算方法的结果与实测LDL-C值均有良好的相关性:相关性由高到低依次为M公式(r=0.980)、P公式(r=0.961)、F公式(r=0.940)、H公式(r=0.895)。M公式计算结果与实测值的差值和差值百分比均低于其他3种公式(P0.001)。M公式计算值与实测值的一致性最佳;M公式差值百分比低于5%和10%的体检者所占比例最高。随着TG、HDL-C水平的增加,M公式的差值和差值百分比变化均为最小。结论 M公式为最适合中国人群的LDL-C计算公式。     

miRNA-21减轻氧糖剥夺对PC12细胞的损伤

目的:探讨微小RNA(miRNA)-21对低氧缺血损伤PC12细胞的影响。方法:体外培养PC12细胞,建立氧糖剥夺(OGD)损伤模型。细胞随机分为对照组、OGD组、阴性对照序列+OGD组、miRNA-21 inhibitor+OGD组和miRNA-21 mimic+OGD组。通过采用CCK-8、real-time PCR、Western blot等技术探讨miRNA-21对OGD损伤PC12细胞的影响和机制。结果:降低miRNA-21的表达,受OGD损伤的PC12细胞活力明显下降;增加miRNA-21的表达,受OGD损伤的PC12细胞活力明显增加。进一步发现miRNA-21促进OGD损伤PC12细胞的AKT磷酸化。结论:miRNA-21明显增加OGD损伤PC12细胞的活力,其机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

辛伐他汀对高糖损伤乳鼠心肌细胞NADPH氧化酶亚基基因表达的影响

取原代培养的SD雄性乳鼠心肌细胞在高糖刺激下加入10-7、10-6和10-5mol/L辛伐他汀作用72 h.结果显示,与对照组比较,高糖组心肌细胞活力明显降低(P＜0.01),乳酸脱氢酶(LDH)活性显著增加(P＜0.01),NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA表达和活性氧簇(ROS)水平明显增高(均P＜0.05);与高糖组比较,辛伐他汀各组心肌细胞活力明显增加(P＜0.05),LDH活性显著降低(P＜0.05),p22phox、p47phox mRNA表达和ROS水平明显降低,且辛伐他汀浓度对心肌细胞活力的影响呈剂量依赖效应.这些结果提示辛伐他汀能够抑制NADPH氧化酶亚基的基因表达,减轻高糖引起的心肌损伤.     

右腋下切口心脏不停跳术在小儿先天性心脏外科的应用

目的报告右腋下切口心脏不停跳术在小儿先天性心脏外科的应用。方法65例患者均采用右侧腋中线切口长约8～12cm,经第3或4肋间进胸,在心脏跳动下行房间隔缺损修补术32例,室间隔缺损修补术26例,法乐三联症矫治术5例,肺动脉瓣狭窄成形术2例。结果全组无围手术期死亡,无空气栓塞所致的并发症。1例ASD患者术后左肺不张。所有患者出院前复查心脏彩超检查结果满意。结论右腋下切口心脏不停跳术治疗小儿先天性心脏病简化了操作程序,最大限度地避免了再灌注损伤;切口隐蔽,无胸部的畸形愈合及钢丝残留,减轻了患者的心理负担。     

慢性萎缩性胃炎的临床病理形态观察及分析

目的：探讨慢性萎缩性胃炎的临床病理特征及分析。方法：我院经胃镜和病理活检确诊为慢性萎缩性胃炎和慢性浅表性胃炎的病例,应用HE染色,光镜观察其形态改变。结果：134例胃粘膜活检中,慢性萎缩性胃炎39例,轻度萎缩24例,中度萎缩11例,重度萎缩4例,慢性浅表性胃炎95例。结论：慢性萎缩性胃炎与胃癌的发生密切相关,常由慢性浅表性胃炎发展而来,胃内幽门螺旋苗的感染是本病的基本原因,与肠上皮化生,非典型性增生也有密切关系。     

儿童湿疹1 538例过敏原分析

目的 了解过敏原在儿童湿疹发病中的比例,为防治儿童湿疹提供依据。 方法 利用生物共振治疗仪对1 538例门诊湿疹患儿进行过敏原检测。结果 1 538例湿疹患儿中,食物过敏原检测阳性1 272例(82.70%),吸入过敏原检测阳性653例(42.46%),食物和吸入过敏原均阳性504例(32.77%)。食物过敏原以谷类(1 020,66.32%)最高,其后依次是牛奶、鸡蛋、海鲜、坚果、大豆、食品添加剂、牛羊肉;吸入过敏原以屋尘(340例,22.11%)最高,其后依次是螨虫、花粉、动物皮毛、霉菌、废气、香烟、烹调油烟。不同年龄段,食物、吸入过敏原阳性结果差异均有统计学意义(P<0.05),婴儿期主要以食物过敏原为主,随着年龄增长,吸入性过敏原阳性检出率逐渐增高,食物性过敏原阳性检出率逐渐下降。 结论对湿疹患儿进行过敏原检测,可以找出湿疹的诱发因素,为预防和治疗湿疹提供依据。     

血清IL-2、IL-6、IL-10与分化型甲状腺癌诊断及侵袭性的相关性分析

<正>甲状腺癌在世界癌症发病率中排名第九，是女性第五常见的恶性肿瘤^[1]。临床上，诊断甲状腺良恶性结节一般采用高分辨率超声及细针穿刺细胞学检查。B超具有一定的诊断主观性，而穿刺细胞学检查由于取样标本较少，可能存在假阴性。因此需要寻找更有效的检查指标来弥补目前临床诊疗的不足。白细胞介素(ILs)是属于细胞因子超家族的小蛋白信号分子，在自身免疫性甲状腺疾病中的作用至关重要^[2]。各种血清白细胞介素在临床上可作为不同肿瘤的诊断、预后标志物^[3]。