| 稳定表达EGFP-LC3蛋白SH-SY5Y细胞系的构建 |
| |
| 引用本文： | 陶美彤,朱伟,舒凡,陈昱,张蓉,谢雅彬,谢伟,巴德仁贵,姜树原,刘晓蕾,邵国,贾小娥,周成江.稳定表达EGFP-LC3蛋白SH-SY5Y细胞系的构建[J].包头医学院学报,2022,38(1):26-30. |
| |
| 作者姓名： | 陶美彤 朱伟 舒凡 陈昱 张蓉 谢雅彬 谢伟 巴德仁贵 姜树原 刘晓蕾 邵国 贾小娥 周成江 |
| |
| 作者单位： | 包头医学院基础医学与法医学院,内蒙古 包头014040;包头医学院神经科学研究所;内蒙古自治区低氧转化医学重点实验室;包头医学院药学院;包头市第三医院;包头医学院神经科学研究所;内蒙古自治区低氧转化医学重点实验室;包头医学院神经科学研究所;内蒙古自治区低氧转化医学重点实验室;首都医科大学宣武医院低氧适应转化医学北京市重点实验室;包头医学院基础医学与法医学院,内蒙古 包头014040 |
| |
| 摘 要： | 目的:建立稳定表达微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)与绿色荧光蛋白(EGFP)形成的融合蛋白(EGFP-LC3)的人神经母细胞瘤株SH-SY5 Y细胞系,验证EGFP-LC3点状聚集物能够实时直观地反映自噬小体和自噬流.方法:以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)的cDNA为模板,克隆LC3,并连接EGFP绿色荧光蛋白.将EGFP-LC3连接入慢病毒载体GV348中,构建慢病毒表达载体EGFP-LC3-GV348.慢病毒转染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5 Y细胞),使用3μg/mL嘌呤霉素筛选并处理细胞1月,筛选得到EGFP-LC3稳转系.诱导自噬后,用共聚焦显微镜观察LC3荧光斑点并定量分析.Western blot检测目的蛋白表达情况.结果:经酶切证实,EGFP-LC3-GV348慢病毒表达载体构建正确.在激光共聚焦显微镜下,可以观察到细胞内的绿色荧光EGFP代表的自噬小体,活体染料LysoTracker Red DND-99将溶酶体染成红色荧光,红色荧光与绿色荧光重叠代表自噬溶酶体.无血清诱导自噬后,自噬小体(绿色荧光斑点)明显增加,差异有统计学意义(P<0.001).Western Blot免疫印迹可见EGFP-LC3融合蛋白表达条带.结论:成功构建了稳定表达EGFP-LC3的SH-SY5 Y细胞系,EGFP-LC3荧光斑点可以直观实时反映自噬囊泡,为进一步探讨神经退行性疾病的自噬机制提供了实验基础.
|
| 关 键 词： | SH-SY5Y细胞 自噬 EGFP-LC3 稳定细胞系 |
Construction of SH-SY5 Y cell line stably expressing EGFP-LC3 protein |
| |
| TAO Meitong,ZHU Wei,SHU Fan,CHEN Yu,ZHANG Rong,XIE Yabin,XIE Wei,BADE Rengui,JIANG Shuyuan,LIU Xiaolei,SHAO Guo,JIA Xiao'e,ZHOU Chengjiang.Construction of SH-SY5 Y cell line stably expressing EGFP-LC3 protein[J].Journal of Baotou Medical College,2022,38(1):26-30. |
| |
| Authors: | TAO Meitong ZHU Wei SHU Fan CHEN Yu ZHANG Rong XIE Yabin XIE Wei BADE Rengui JIANG Shuyuan LIU Xiaolei SHAO Guo JIA Xiao'e ZHOU Chengjiang |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
