脂蛋白受体的研究进展

脂蛋白受体属生物膜的糖蛋白,它具有特异识别脂蛋白的功能。血浆脂蛋白经过一系列酶的降解作用,它们的载脂蛋白和脂类在脂蛋白间交换和转移,最后形成的残粒和低密度脂蛋白等,主要通过与细胞脂蛋白受体结合在细胞内进行分解代谢,才能从血浆中清除。     

稳定表达EGFP-LC3蛋白SH-SY5Y细胞系的构建

目的:建立稳定表达微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)与绿色荧光蛋白(EGFP)形成的融合蛋白(EGFP-LC3)的人神经母细胞瘤株SH-SY5 Y细胞系,验证EGFP-LC3点状聚集物能够实时直观地反映自噬小体和自噬流.方法:以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)的cDNA为模板,克隆LC3,并连接EGFP绿色荧光蛋白.将EGFP-LC3连接入慢病毒载体GV348中,构建慢病毒表达载体EGFP-LC3-GV348.慢病毒转染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5 Y细胞),使用3μg/mL嘌呤霉素筛选并处理细胞1月,筛选得到EGFP-LC3稳转系.诱导自噬后,用共聚焦显微镜观察LC3荧光斑点并定量分析.Western blot检测目的蛋白表达情况.结果:经酶切证实,EGFP-LC3-GV348慢病毒表达载体构建正确.在激光共聚焦显微镜下,可以观察到细胞内的绿色荧光EGFP代表的自噬小体,活体染料LysoTracker Red DND-99将溶酶体染成红色荧光,红色荧光与绿色荧光重叠代表自噬溶酶体.无血清诱导自噬后,自噬小体(绿色荧光斑点)明显增加,差异有统计学意义(P<0.001).Western Blot免疫印迹可见EGFP-LC3融合蛋白表达条带.结论:成功构建了稳定表达EGFP-LC3的SH-SY5 Y细胞系,EGFP-LC3荧光斑点可以直观实时反映自噬囊泡,为进一步探讨神经退行性疾病的自噬机制提供了实验基础.     

甲泼尼龙对大鼠急性脊髓损伤后髓鞘碱性蛋白的作用研究

目的探讨大剂量甲泼尼龙(MP)对急性脊髓损伤(ASCI)后大鼠脊髓组织和血清中的髓鞘碱性蛋白(MBP)的影响。方法 60只雄性SD大鼠,随机分成A组(正常对照组)、B组(实验对照组)、C组(治疗组)三组,每组20只。A组单纯全椎板切除,不损伤脊髓;B、C组采用Allen's法制作T10脊髓损伤模型,C组首剂量以30 mg/kg甲泼尼龙尾静脉注射,余剂量以5.4 mg·kg-1·h-1,每4 h静脉给药一次,24 h给完,A、B组以生理盐水代替甲泼尼龙尾静脉注射,剂量同C组。术后24 h、48 h对A、B、C三组大鼠后肢运动功能行BBB评分;再在各时间点取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色观察形态学变化和MBP在脊髓组织中的分布特点;同时应用RT-PCR方法测定各组相应时间点脊髓组织中MBP m RNA表达量;取血清应用ELISA方法检测各组中血清MBP含量。结果 C组大鼠在损伤后24 h、48 h后肢运动功能恢复程度显著高于B组,差异有显著性(P<0.01)。B、C组血清中的MBP蛋白浓度较A组均明显升高,而C组血清的MBP蛋白浓度显著低于B组,差异有显著性(P<0.01);C组脊髓组织中MBP表达高于B组,而低于A组,差异有显著性(P<0.01);C组MBP m RNA表达显著高于B组(P<0.01),而低于A组,差异有显著性(P<0.05)。结论大鼠急性脊髓损伤后血清中MBP显著升高,脊髓组织中MBP表达会降低,早期应用大剂量MP对脊髓急性损伤具有明显的保护作用。     

蒙药童格勒格-1对大鼠肝细胞BRL株B族I型清道夫受体表达的影响

目的:探讨蒙药童格勒格-1(TGLG-1)提取物对大鼠正常肝细胞BRL株B族I型清道夫受体(SR-BI)基因表达的影响。方法:用乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚四种物质分别提纯蒙药童格勒格-1,采用MTT比色法确定每种提取物的用药浓度。将大鼠肝细胞分为五组,一组为正常对照组,其余四组为用药组。将四种提取物与正常大鼠肝细胞培养24小时后,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定大鼠肝细胞SR-BI mRNA表达水平。结果:蒙药童格勒格-1四种提取物中乙醇和石油醚提取物作用后的大鼠正常肝细胞SR-BI mRNA相对含量明显高于对照组,具有显著性差异(P<0.01),正丁醇和乙酸乙酯提取物作用后的大鼠正常肝细胞SR-BI mRNA相对含量也高于对照组(P<0.05)。结论:蒙药童格勒格-1的提取物能明显增强大鼠正常肝细胞SR-BI的基因表达,从而促进高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)的选择性摄取,对动脉粥样硬化起保护性作用。     

蒙药童格勒格-1四种粗提物对大鼠肝细胞BRL株低密度脂蛋白受体基因表达的影响

目的观察蒙药童格勒格-1(TGLG-1)四种粗提物对大鼠正常肝细胞BRL株低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因表达的影响。方法制备出蒙药童格勒格-1的乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚的提取物。体外培养大鼠正常肝细胞BRL株,通过MTT比色法观察蒙药童格勒格-1提取物对大鼠肝细胞体外毒性的量效关系,确定合适的用药浓度。将大鼠肝细胞分为5组,一组为对照组,其余四组为给药组。将四种粗提物以一定的给药浓度与正常大鼠肝细胞培养24 h后,用RT-PCR法测定大鼠肝细胞低密度脂蛋白受体mRNA表达水平。结果蒙药童格勒格-1提取物中正丁醇和乙酸乙酯提取物作用后的大鼠正常肝细胞低密度脂蛋白受体mRNA相对含量高于对照组,具有显著性差异(P<0.01)。乙醇和石油醚提取物与对照组相比,无显著性差异(P>0.05)。结论蒙药童格勒格-1正丁醇和乙酸乙酯提取物能明显增强大鼠正常肝细胞低密度脂蛋白受体基因表达,从而加快血中低密度脂蛋白的清除,起到调控血脂水平的作用。     

蒙药童格勒格-1四种粗提物对大鼠肝细胞BRL株低密度脂蛋白受体基因表达的影响

目的 观察蒙药童格勒格-1(TGLG-1)四种粗提物对大鼠正常肝细胞BRL株低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因表达的影响.方法 制备出蒙药童格勒格-1的乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚的提取物.体外培养大鼠正常肝细胞BRL株,通过MTT比色法观察蒙药童格勒格-1提取物对大鼠肝细胞体外毒性的量效关系,确定合适的用药浓度.将大鼠肝细胞分为5组,一组为对照组,其余四组为给药组.将四种粗提物以一定的给药浓度与正常大鼠肝细胞培养24 h后,用RT-PCR法测定大鼠肝细胞低密度脂蛋白受体mRNA 表达水平.结果 蒙药童格勒格-1提取物中正丁醇和乙酸乙酯提取物作用后的大鼠正常肝细胞低密度脂蛋白受体mRNA相对含量高于对照组,具有显著性差异(P<0.01).乙醇和石油醚提取物与对照组相比,无显著性差异(P>0.05).结论 蒙药童格勒格-1正丁醇和乙酸乙酯提取物能明显增强大鼠正常肝细胞低密度脂蛋白受体基因表达,从而加快血中低密度脂蛋白的清除,起到调控血脂水平的作用.     

中药穿心莲和当归对小鼠红细胞血红蛋白再释放的影响

目的：探讨穿心莲和当归对小鼠红细胞血红蛋白再释放的影响。方法：将实验用小鼠雌雄各半按体重均匀分为7组（6个用药组和1个对照组）,按实验设计分别对穿心莲和当归高、中、低浓度用药组小鼠用穿心莲和当归水煎液进行灌胃,对照组用生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃15 d,然后分别采血分离红细胞观察其血红蛋白再释放的情况,并用BandScan扫描定量,进行统计分析。结果：中、高浓度的穿心莲和高浓度的当归都能使小鼠红细胞血红蛋白的再释放增强。结论：穿心莲和当归水煎液均能影响实验小鼠的血红蛋白再释放,但影响程度随浓度不同而有差异。     

穿心莲致小鼠嗜多染红细胞和成熟红细胞微核的实验研究

目的:动态观察穿心莲水煎液对小鼠嗜多染红细胞和成熟红细胞微核的影响。方法:20只小鼠随机分为对照组和实验组,每组10只,分别连续灌胃蒸馏水和穿心莲水煎液15 d,观察嗜多染红细胞和成熟血细胞,比较细胞微核率的差异。结果:实验组嗜多染红细胞和成熟血细胞微核率呈阳性,微核率≥5‰,但成熟红细胞的微核数量明显比嗜多染红细胞低(P<0.05)。结论:穿心莲对小鼠骨髓细胞具有潜在致染色体断裂效应;外周血涂片是观察成熟红细胞微核简单、有效的方法。     

实时荧光定皇PCR的研究进展及其应用

随着PCR（聚合酶链反应）技术的飞速发展，实时荧光定量PCR（real—time quantitative PCR）技术以其特异性强、灵敏度高、自动化和重复性好、定量准确、污染少等优点，成为分子生物学和其它领域的重要技术工具，并广泛应用于遗传病、病原体和肿瘤等方面的检测和诊断。本文就实时荧光定量PCR技术的主要原理、定量方法及目前在研究领域中主要的应用进行了概述。