白芍总苷对肝郁脾虚模型大鼠脑-肠轴炎性因子表达的影响

目的：研究白芍总苷对肝郁脾虚证大鼠模型脑-肠轴炎症因子表达的干预作用。方法：采用高脂饮食、冰水浴刺激等方法建立肝郁脾虚证大鼠模型，分别给予不同剂量的白芍总苷，考察各组大鼠机械痛阈和肠推进变化，然后观察大鼠前额叶皮层和空肠组织的炎性病变，以及组织中IL-1β、TNF-α、SP和IFN-γ含量。结果：不同剂量的白芍总苷均能显著增加模型大鼠机械痛阈值，同时可减缓肠推进速率，显著减少模型前额叶皮层和空肠组织中IL-1β、TNF-α的响应，减轻的炎性反应。结论：白芍总苷对肝郁脾虚大鼠模型的脑肠组织炎性因子均有干预作用，其作用机制可能与降低脑内和肠道炎性因子IL-1β、TNF-α水平有关。     

抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因的克隆及原核表达载体的构建

目的 克隆抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因(VH),并构建其原核表达载体.方法 从能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出VH cDNA,用HindⅢ和XhoⅠ酶切纯化的RT-PCR产物和原核表达载体pET28a( ),在T4 DNA连接酶作用下室温连接.重组质粒经酶切鉴定,阳性克隆测序并进行序列分析.结果 扩增出VH cDNA片段,大小约为370bp,重组质粒的酶切鉴定结果与预期一致.VH基因序列长度为366bp,编码122个氨基酸.VH基因属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ亚类.结论 成功克隆出抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因,并成功构建其原核表达载体.     

Sox9、siRNA表达载体的构建与鉴定

目的构建Sox9 siRNA表达载体，分析Sox9在软骨肉瘤中的作用机制。方法根据Kou Ⅰ，IkegawaS提椟的Sox9 mRNA序列，设计并合成两端含有酶切位点的64个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链退火后用T4DNA连接酶连接到线性化的pSilencer质粒中，并对重组质粒（命名为pSilencer／Sox9 siRNA）进行酶切及测序鉴定。结果双酶切证实Sox9 siRNA表达载体克隆构建成功，插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致。结论成功构建Sox9 siRNA表达载体。     

大鼠FasL基因重组慢病毒载体三质粒包装细胞系统的建立

目的 建立真核细胞表达的大鼠FasL基因重组慢病毒载体三质粒包装细胞系统，为进一步研究转FasL基因在同种异体器官移植中诱导免疫耐受、保护移植物的作用奠定基础。方法 制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统：转移质粒（pL0134-FasL），包装质粒（ΔNRF）及包膜蛋白质粒（VsV-G）。脂质体法将三质粒共转染包装细胞293T，72h后收集病毒上清，Western-blot法检测293T细胞的FasL蛋白表达。结果 转染后的293T细胞表达FasL蛋白。结论 成功建立重组慢病毒载体的三质粒包装细胞系统。     

大鼠PDZ1-FLAG的亚克隆及pcDNA3.1载体的构建

目的亚克隆大鼠PDZ1-FLAG基因片段并构建pcDNA3.1载体.方法以pAdTrack-CMV-PDZ1为模板,采用PCR法获得PDZ1-FLAG的双链DNA;与pcDNA3.1载体用T4 DNA连接酶连接;连接产物转化大肠杆菌JM109进行筛选、序列测定.结果①得到了PDZ1-FLAG的双链DNA;②酶切鉴定能观察到PDZ1-FLAG和pcDNA3.1两条带;③PDZ1-FLAG测序图谱与文献报道完全一致.结论获得了含目的基因PDZ1-FLAG的pcDNA3.1载体.     

人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析

目的 研究IL-18结构与功能的关系。方法 用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白介素18（hIL-18）突变体hIL-18D134R。将突变体eDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达蛋白质，SDS-PAGE证实，表达的目的蛋白质以包涵体形式存在。菌体经超声破碎后，包涵体以2mol／L尿素洗涤，8mol／L尿素溶解，并经Sephadex G-75柱纯化及稀释、透析复性。然后以诱导人外周血单个核细胞（PBMC）产生干扰素-γ（IFN-γ）及对核因子-κB（NF-κB）的激活能力为指标，检测突变体的生物学活性。结果 构建的突变体hIL-18D134R可在大肠杆菌DH5n中高效表达，经包涵体洗涤和Sephad G-75柱纯化后，纯度达92％以上。突变体D134R对IFN-γ的诱生能力及对NF-κB的激活能力分别为野生型hIL-18的19％和23％。结论 在人IL-18的氨基酸序列中，Asp134对其生物学功能有非常重要的作用。     

人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析

目的研究IL-18结构与功能的关系。方法用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白介素18(hIL-18)突变体hIL-18D134R。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达蛋白质,SDS-PAGE证实,表达的目的蛋白质以包涵体形式存在。菌体经超声破碎后,包涵体以2 mol/L尿素洗涤,8 mol/L尿素溶解,并经Sephadex G-75柱纯化及稀释、透析复性。然后以诱导人外周血单个核细胞(PBMC)产生干扰素-γ(IFN-γ)及对核因子-κB(NF-κB)的激活能力为指标,检测突变体的生物学活性。结果构建的突变体hIL-18D134R可在大肠杆菌DH5α中高效表达,经包涵体洗涤和Sephadex G-75柱纯化后,纯度达92%以上。突变体D134R对IFN-γ的诱生能力及对NF-κB的激活能力分别为野生型hIL-18的19%和23%。结论在人IL-18的氨基酸序列中,Asp134对其生物学功能有非常重要的作用。     

血清糖萼标志物和心脏骤停患者预后关系研究

目的探讨心脏骤停(CA)患者复苏后早期血清糖萼标志物水平和患者预后的关系。方法本研究是一项回顾性队列研究。以徐州医科大学附属医院2021年9月至2022年10月发生CA后恢复自主循环(ROSC)超过24 h并且入住重症监护病房的患者为研究对象, 收集CA后第24小时的血清用以检测血清糖萼标志物水平, 包括硫酸乙酰肝素(HS)、透明质酸(HA)和黏结蛋白聚糖-1(Sdc-1)。按照CA后30 d的脑功能分级(CPC)将患者分为功能良好组(CPC=1～2)和功能不良组(CPC=3～5), 以logistic回归分析血清糖萼标志物和神经功能预后的关系。以30 d生存结局重新将患者分组, 即存活组和死亡组, 以Cox回归分析血清糖萼标志物和患者30 d死亡率之间的关系。结果共纳入71例患者, 其中女31例(43.7%), 男40例(56.3%);年龄(59.0±17.0)岁。与功能良好组(n=22)相比, 功能不良组(n=49)HS和HA水平均更高[HS:2 461.0(1 623.0, 5 492.0)μg/L比1 492.0(914.0, 2 550.0)μg/L, P=0.008;HA:...     

基于Nomogram图预测甲状腺术后低钙血症的模型建立及临床价值

目的：基于Nomogram图建立预测甲状腺术后发生低钙血症的模型,并探究该模型的临床价值。方法：纳入徐州医科大学附属医院2020年11月—2021年11月收治的247例甲状腺手术患者,按照其术后低钙血症发生情况,将患者分别纳入发生组、未发生组。运用单因素和多因素Logistic回归模型,分析影响患者发生低钙血症的相关因素。以独立危险因素构建二元Logistic回归并建立Nomogram图预测模型,并纳入74例甲状腺手术患者,验证模型的效能。结果：247例患者中,共有82例（33.20%）发生低钙血症。多因素Logistic回归模型示,女性、手术时间≥100 min、甲状旁腺腺体损伤均为影响甲状腺术后发生低钙血症的独立危险因素,单侧腺叶加峡部加对侧部分切除为保护性因素（P<0.05）。将基于独立危险因素建立的Nomogram图应用于训练集行内部验证,AUC为0.869 (95%CI:0.820～0.918);验证集外部验证结果显示,AUC为0.876(95%CI:0.796～0.956),校正曲线均接近理想曲线,预测概率与实测值基本一致。结论：甲状腺术后患者低钙血症发生风险较高,且...