骨髓造血前体细胞发育与粘附分子

造血前体细胞(hematopoietic progenitor cells,HPCS)在骨髓微环境内的发育是一个复杂过程。其间离不开HPCS与微环境内基质细胞、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)、生长因子之间密切、协调的相互作用。业已证明,一组细胞膜表面的粘附分子(cytoadhesion molecules,CAM)在介导这些相互作用中起至关重要的作用。本文从参与HPCS发育过程中的CAM种类、作用、机制等方面,就近年国外研究进展作一综述。1 参与HPCS发育的CAM 参与HPCS发育的CAM多种多样。早期资料来源于对骨髓移植时造血干细胞“归巢”(homing)机制的探讨。研究表明,HPCS可通过膜表面凝集素(lectin)样分子与骨髓基质细胞膜上含甘露糖、半乳糖成份的糖化类结构特异性结合介导其归巢骨髓,而这种凝集素与选择素L密切相关。进而Lewinsohn等通过流式细胞分析发现人HPCS（包括CFU-GM、BFU-E）高表达归巢相关粘附分子     

浸润性乳腺癌组织中14-3-3σ、p73α蛋白表达及临床意义

目的探讨表皮细胞特异性标志物14-3-3σ、p73α蛋白在浸润性乳腺癌发生发展中的作用。方法选择我院手术切除的浸润性乳腺癌组织标本94份（浸润癌组）,导管原位癌15份（原位癌组）,上皮不典型增生15份（不典型增生组）,导管内乳头状瘤15份（乳头状瘤组）,乳腺增生症20份（增生症组）,乳腺癌旁5 cm组织10份（癌旁组）,采用免疫组化PV-9000两步法检测各组14-3-3σ、p73α蛋白表达情况,并分析两者间及与浸润性乳腺癌临床病理特征的相关性。结果浸润癌组14-3-3σ蛋白阳性率明显低于其余各组,p73α蛋白阳性率明显高于其余各组,P均〈0.05。14-3-3σ蛋白阳性表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移、HER-2受体、组织学分级、TNM分期相关,p73α蛋白与腋窝淋巴结转移、ER受体、PR受体、TNM分期相关。14-3-3σ与p73α蛋白表达呈负相关。结论 14-3-3σ和p73α蛋白与浸润性乳腺癌的发生发展相关,两者联合检测可为乳腺癌早期诊断和治疗提供参考。     

先天性白内障手术后计划外再手术原因及相关危险因素研究

目的　探讨先天性白内障手术后计划外再手术的原因及相关危险因素,为先天性白内障手术提供参考。方法　回顾性研究。收集2009年1月至2018年12月于青岛眼科医院就诊并行先天性白内障手术后计划外再次入院手术治疗的患者资料,分析患者再手术发生率、再手术时间以及发生原因等。结果　将白内障手术后计划外再手术36例（42眼）患者纳入本研究。计划外再手术占前三位的疾病分别为:后发性白内障(54.76%,23/42）、继发性青光眼(21.43%,9/42)、瞳孔闭锁（14.29%,6/42）;其他原因有人工晶状体异位（7.14%,3/42）、视网膜脱离（2.38%,1/42）。计划外再手术发生率在0～3个月龄组为13.29%,显著高于4～12个月龄组（3.82%）和>12个月龄组（1.96%）,组间差异有统计学意义（P=0.00）;低月龄（≤3个月）白内障手术、一期未植入人工晶状体与后发性白内障、继发性青光眼和瞳孔闭锁均高度相关（均为P＜0.05）。结论　后发性白内障、瞳孔闭锁和继发性青光眼为先天性白内障手术后计划外再手术的主要原因,低月龄（≤3个月）患者行白内障手术与计划外再手术高度相关。     

暗视野显微镜在眼科实验研究中的应用

目的 探讨暗视野显微镜在眼科实验研究中的应用.方法 使用Nikon E800研究显微镜,透射光模式和暗视野模式下直接观察眼科常见的实验标本,包括培养1周的角膜上皮细胞爬片、小鼠角膜缘血管网、视网膜铺片和玻璃体手术中切取的视网膜前膜组织.结果 显微镜透射光模式观察培养角膜上皮细胞胞浆内结构不清;暗视野模式下可观察到细胞内微丝的走行和排列方式,细胞立体感明显增强.显微镜透射光模式观察可见细胞层次不清,血管形态不清晰;暗视野模式下观察可见小鼠角膜缘组织血管网立体感强,色彩对比良好,细胞层次清晰,细胞形态和界限明显,血管走行和形态非常清楚.暗视野显微镜模式与透射光模式相比较,可清晰观察到视网膜前膜内增生的新生血管,血管走行和分布规律均可得到较好的显示.结论 暗视野显微镜简便易行,提高对病变的观察和认识,可广泛用于眼科科研工作中.     

Pilon骨折的手术治疗

目的评价Pilon骨折手术治疗的疗效。方法回顾2013年5月至2018年5月收治的26例Pilon骨折患者进行外固定和内固定治疗。平均年龄37.5岁,骨折按Ruedi-Allgower分型:Ⅰ型11例,Ⅱ型7例,Ⅲ型8例。结果术后所有患者的平均随访时间为11个月,根据Tornetta等评分标准,优10例,良11例,总体优良率80.8%。结论 Pilon骨折内固定治疗效果较佳,尽可能采用内固定治疗,尽量避免一期关节融合术。     

鼠视网膜新生血管发生过程中Twist基因的表达

目的 探讨视网膜新生血管发生过程中Twist基因的表达情况.方法 对照实验研究.将40只新生C57/BL小鼠分为两组:(1)对照组,正常空气环境中饲养;(2)高氧组,在高氧环境中制作小鼠缺氧性视网膜新生血管动物模型.将出生第7天的小鼠放人氧箱,在75%浓度的高氧环境中饲养5 d后,取出氧箱.待出氧箱第12天和第17天(视网膜新生血管发生高峰时间)分别处死小鼠,制作视网膜铺片和切片,观察小鼠视网膜新生血管发生情况.应用免疫组织化学染色检测小鼠视网膜血管内皮细胞(VE)-钙黏蛋白、波形蛋白及Twist基因表达变化情况;提取全视网膜RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测VE-钙黏蛋白、波形蛋白及Twist基因表达变化情况.应用SPSS 11.5统计学软件进行数据处理,对高氧组与对照组小鼠出生后不同时间的VE-钙黏蛋白、波形蛋白、Twist基因表达的灰度值比较,采用两因素析因设计的方差分析,以P<0.05作为差异有统计学意义.结果 免疫组织化学检测结果显示,出生后第17天的小鼠,高氧组VE-钙黏蛋白表达的灰度值(65.19±8.39)与对照组(75.36±7.04)相比明显减少(F=8.616,P=0.009),波形蛋白表达的灰度值(95.09±14.13)与对照组(82.14±6.32)相比明显升高(F=6.999,P=0.016),Twist基因表达的灰度值(119.48±7.90)与对照组(93.30±6.37)相比亦明显升高(F=66.557,P=0.000).RT-PCR检测结果显示,不同处理组间波形蛋白、Twist基因表达的灰度值与检查时间存在交互作用(F=5.508,P=0.032;F=17.760,P=0.001).结论 在小鼠视网膜新生血管形成过程中,细胞转型调控的Twist基因发挥着重要作用,其作用机制可能是通过下调血管内皮细胞间的紧密连接蛋白,促进内皮细胞转型实现.     

七叶皂苷片促进合并组织学炎症的前列腺增生患者术后下尿路症状的改善

目的探讨将七叶皂苷片应用于合并前列腺组织学炎症的前列腺增生（BPH）患者,观察其对经尿道前列腺电切术（TURP）后早期下尿路症状（LUTS）的改善作用。 方法2015年11月至2018年5月,我院116例合并前列腺组织学炎症的BPH患者,随机分为治疗组（n=58）和对照组（n=58）,均行TURP。治疗组在对照组基础上,从手术后第3天起开始口服七叶皂苷片2片/次,2次/d,直至拔导尿管后4周。记录两组患者术前、拔管后第7天和拔管后第28天的国际前列腺症状评分（IPSS）和生活质量（QOL）评分,并记录两组急性尿潴留（AUR）和急迫性尿失禁（UUI）发生的例数。 结果两组患者术后IPSS和QOL评分均较术前有明显下降,但治疗组较对照组的IPSS和QOL评分下降幅度更大,差异有统计学意义（P<0.05）,治疗组发生UUI的例数明显少于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,而两组发生AUR的例数差异无统计学意义。 结论七叶皂苷片可以促进合并前列腺组织学炎症的BPH患者TURP术后早期LUTS的改善。     

高氧诱导小鼠视网膜新生血管模型中端粒酶逆转录酶的表达变化

目的 研究高氧诱导视网膜新生血管模型中小鼠端粒酶逆转录酶(TERT)基因表达水平是否有变化,为进一步研究视网膜新生血管疾病的预防和治疗提供新的靶点.方法 实验研究.选取7 d龄C57BL/6J新生小鼠32只,分高氧组和对照组,每组16只.高氧组小鼠以密闭氧箱内以75%±2%氧浓度饲养5 d后置于正常氧浓度环境中,正常对照组小鼠于正常氧环境中饲养.于小鼠生后12、14及19 d时分别取高氧组和对照组小鼠各2只(4只眼),经尾静脉行2%伊文思蓝溶液灌注并做视网膜铺片,荧光显微镜下观察视网膜新生血管的形成情况.高氧模型组和正常对照组生后19 d幼鼠3只,行HE染色,光学显微镜下观察视网膜血管形态,观察突破内界膜的内皮细胞核数.取生后19 d高氧组和对照组小鼠,分别取其视网膜组织并提取总RNA,反转录成cDNA后行反转录PCR,2%琼脂糖凝胶电泳并照相.提取视网膜总RNA,反转录成cDNA后(同RT-PCR),配制荧光定量实时PCR反应体系(总计20μl),在60℃检测荧光信号,分析图像.分别取高氧模型组和正常对照组P19小鼠行眼球切片,常规处理后TERT抗体孵育37℃ 60 min,HRP酶标二抗孵育30 min,DAB显色,中性胶封片,镜下观察并照相.结果高氧诱导模型小鼠牛后12 d眼底后极部出现大片无灌注区,生后14 d眼底后极部出现新牛血管迂曲、渗漏等视网膜血管病变.生后17～19 d视网膜新生血管形成达到高峰.正常小鼠视网膜组织切片HE染色基本看不剑突出内界膜的血管芽及血管管腔,内界膜下视网膜内的血管内皮细胞核散在分布、数量较少;高氧组见大量突出内界膜伸向玻璃体腔的血管管腔及血管芽,内界膜下视网膜内也有大量血管内皮细胞增生.19 d高氧模型组小鼠视网膜TERT及bFGF mRNA表达较同日龄正常对照组小鼠明显提高,二者差异有统计学意义(F=8.575,5.667;P＜0.05).生后19 d实时PCR检测高氧模型组小鼠视网膜TERT mRNA表达较同日龄正常对照组小鼠明显上调,差异有统计学意义(F=173.104,P＜0.05).生后19 d高氧诱导小鼠视网膜新生血管模型中视网膜新生血管TERT表达阳性,同日龄对照组新生小鼠视网膜血管TERT表达阴性.结论高氧诱导视网膜新生血管小鼠模型中端粒酶逆转录酶和新生血管形成相关因子表达水平明显上调,可能会成为视网膜新生血管疾病预防和治疗的新靶点.(中华眼科杂志,2009,45:199-205)     

小鼠视网膜组织石蜡切片制作方法的探讨

目的寻找一种效果好的视网膜固定方法.方法 30只小鼠取出眼球后在角巩膜缘刺一小口,A组24只眼球,用体积分数10%中性甲醛固定;B组16只眼球,用FAA固定液(体积分数10%中性甲醛10 mL、体积分数95%乙醇85 mL、冰醋酸5 mL混合)固定;C组20只眼球,置于FAA固定液中浸泡1 min后用体积分数10%中性甲醛固定过夜,脱水后去除角膜、虹膜和晶状体,分别做HE:染色和免疫组织化学染色,镜下观察其差异.结果大体观察A组大部分眼球皱缩变形,视网膜脱离率高;B组、C组眼球形态均无明显变化,无视网膜脱离发生.HE染色示A组标本视网膜结构疏松,有较多裂隙,且易发生视网膜碎裂;B组标本视网膜过度压缩,视网膜各层结构不清晰;C组标本视网膜结构清晰,细胞排列紧密,色泽艳丽.免疫组织化学染色3组均显示神经元特异性烯醇化酶NSE阳性,但C组标本染色效果优于A组、B组,且脱片程度低,适用于视网膜组织的固定.结论采用FAA先浸泡再用体积分数10%中性甲醛固定视网膜组织的效果优于单独使用体积分数10%中性甲醛和FAA固定液.     

小鼠血管灌注造影视网膜铺片操作技术及技巧探讨

保持原有的形态;C组视网膜黏附黑色视网膜色素上皮层,不易分离.荧光显微镜下照相观察:A组铺片成功率为30%,视网膜血管变形,模糊不清;B组铺片成功率为90%,视网膜血管均匀规则分布;C组铺片成功率为30%,黑色视网膜色素上皮层部分黏附,血管背景成像不均匀.结论 良好的规范操作技巧和恰当的多聚甲醛固定时间是保证小鼠血管灌注造影视网膜铺片成功的关键.