亲脂素增加血管平滑肌细胞的脂质集聚

目的 观察乙酰化的低密度脂蛋白(AcLDL)对血管平滑肌细胞亲脂素(adipophilin)表达的影响及亲脂素对血管平滑肌细胞的AcLDL摄取及脂质集聚的影响.从而探讨其在糖尿病大血管病变发生中的作用.方法 以不同浓度AcLDL干预人血管平滑肌细胞(HVSMCs).应用Northern印迹及Western印迹技术检测AcLDL对亲脂素表达的影响;以RNA干扰技术、流式细胞仪、酶法和油红O染色检测亲脂素对HVSMCs的脂质集聚及AcLDL摄取的影响.结果 AcLDL呈剂量依赖性地增加HVSMCs的亲脂素的表达,沉默亲脂素基因使HVSMCs对AcLDL的摄取(降低38.7%,P<0.05)和脂质集聚能力下降(甘油三酯、总胆固醇分别下降30.6%和29.8%,均P<0.01).结论 亲脂素促进HVSMCs摄取AcLDL,增加HVSMCs脂质集聚,这可能是亲脂素促进动脉粥样硬化的机制之一.     

2型糖尿病和慢性肾脏病的相关性分析

目的：探讨2型糖尿病与慢性肾脏病（CKD）的相关性。方法：采用整群抽样方法调查了上海中心城区1039例30岁以上已确诊2型糖尿病患者,其中资料完整者共1005例患者,作为本研究对象。检测项目包括身高、体质量、腰围、臀围、血压、血糖、血脂、尿白蛋白肌酐比。采用不同的公式计算估算肾小球滤过率（eGFR）。采用卡方检验和Logistic回归分析进行统计。结果：（1）分别采用Cockcroft—Gault（C—G）公式、肾脏病膳食改良试验（MDRD）公式、根据中国人cKD患者校正后的MDRD（C-MDRD）公式计算eGFR,均显示低肾小球滤过率组（eGFR〈60ml／min／1．73m^2）较对照组年龄显著增高,病程显著延长,血尿素氮、血肌酐、血尿酸显著升高（P〈0．05）。（2）采用C—G公式、MDRD公式和c—MDRD公式计算得出3种公式计算的低肾小球滤过率组大量蛋白尿的比率分别是11．9％、39．2％和44．1％,糖尿病视网膜病变的比率分别是29．3％、46．4％和50％,后两公式的筛出率明显高于C—G公式,其中C—MDRD公式最高（P〈0．05）。（3）采用C—MDRD公式,逐步Logistic回归分析显示年龄、腰围、收缩压、肌酐和空腹血糖是CKD的独立危险因素,比数比（OR）值分别为1．014、1．020、1．028、1．010和1．129,P值均〈0．05。结论：MDRD公式和c-MDRD公式比CG公式能更好的评估糖尿病的血管病变,c-MDRD公式更具有优越性。2型糖尿病与慢性肾脏病密切相关。     

Hcdc14A在体外糖尿病环境下人脑血管内皮细胞损伤中的作用

目的 观察体外糖尿病环境如高糖、高游离脂肪酸(FFA)和低氧刺激对人脑血管内皮细胞(HBVEC)人类细胞分裂周期蛋白14A(Hcdc14A)和相关周期蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响,进而探讨糖尿病诱发脑血管内皮细胞损伤的新机制.方法 分别采用不同条件的高糖、FFA和低氧刺激HBVEC,RT-PCR检测Hcdc14A的mRNA表达,Western印迹法检测Hcdc14A及相关周期蛋白周期素B、周期素D、周期素E和p53的蛋白表达,XXT法检测细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 不同浓度葡萄糖(10、15和25 mmol/L)和FFA(50、100及200 μmol/L)分别孵育HBVEC 72 h,或以25 mmol/L葡萄糖、200μmol/L FFA分别刺激24、48和72 h,均呈剂量和时间依赖性地降低Hcdcl4A的mRNA和蛋白表达(均P＜0.05),同时下调周期素B、周期素D和周期素E的蛋白表达(均P＜0.05),上调p53蛋白表达(均p＜0.05),低氧刺激也显示相似结果.联合刺激(葡萄糖25 mmdl/L+FA 200 μmol/L)48 h后,再进行低氧刺激24 h后,与正常对照组、高糖组、高FFA组及低氧组相比,高糖+高FFA+低氧联合刺激组显著下调HBVEC的Hcdc14A mRNA和蛋白表达(均P＜0.05),同时下凋周期素B、周期素D和周期素E的蛋白水平(均P＜0.05),并上调p53蛋白水平(均P＜0.05).与正常对照组、高糖组、高FFA组及低氧组相比,高糖+高FFA+低氧联合刺激组抑制HBVEC增殖的作用最为明显(40.7％±12.1％对100.0％±10.2％、67.5％±12.1％ 、55.3％±11.2％和64.4％ ±11.3％,均P＜0.05),并使细胞凋亡率明显增加(22.5％±1.77％对5.7％±0.83％、9.3％±0.95％、16.3％±1.69％和16.3％ +1.15％,均P＜0.05).结论 细胞周期调控蛋白Hcdc14A可能在糖尿病诱发脑血管内皮细胞损伤中起重要作用,可能是参与细胞损伤的主要信号通路.     

高糖可上调肝脏超氧化物歧化酶2的表达

氧化应激是糖尿病及糖尿病并发症发生的机制之一,糖尿病机体的抗氧化物质不能清除过多的反应性氧化代谢产物(Reactive Oxygen Specis,ROS)是造成胰腺β细胞损伤[1]和糖尿病并发症的重要原因[2]。SOD(superoxide dis-mutase,SOD)是机体重要的抗氧化物质,其作用是把体内的超氧阴离子转换成过氧化氢。按中心所含金属离子和分布的不同,SOD可分为3种类型:胞浆型Cu/ZnSOD(SOD1)、线粒体型MnSOD(SOD2)和FeSOD(SOD3),不同的SOD亚型其抗氧化作用不同,有报道SOD1的抗氧化作用最强,SOD3无抗氧化作用,SOD2的作用介于两者之间[3]。有大量的研究报道提示糖尿病患者胰腺组织[1]、红细胞[4]、肾脏组织SOD[5]表达下调。我们通过cDNA基因芯片(affymetrix)的技术发现糖尿病肝脏组织较正常肝脏组织SOD2mRNA表达明显上调(上调9倍),高血糖是否可以上调肝脏SOD2的表达目前尚无文献支持。本文试在人、猴子和大鼠证实高血糖状态下肝脏SOD2表达上调,由于样本例数受限,我们进一步在人肝细胞株HepG2观察高血糖刺激下是否可上调肝细胞的...     

采用cDNA微阵列杂交技术对垂体瘤基因表达谱的研究

目的应用cDNA微阵列杂交技术筛选垂体瘤组织差异表达基因,并初步讨论了差异表达基因在垂体瘤发病过程中的作用。方法用cDNA微阵列技术筛选垂体瘤组织差异表达基因,对于在3种垂体瘤中高差异表达基因用RTPCR和实时定量PCR进行初步验证。结果用cDNA微阵列技术筛选垂体瘤组织差异表达基因按照基因功能分类,发现差异表达的基因主要与信号转导相关和发育、分化相关。PP4R2,GHRHR和clusterin分别在泌乳素瘤,生长激素瘤,无激素瘤中明显高表达,并经RTPCR,实时定量PCR等证实。结论PP4R2,GHRHR,clusterin可能分别在泌乳素瘤,生长激素瘤,无激素瘤的发生发展中发挥了重要作用。     

亲脂素增加血管平滑肌细胞的脂质集聚

目的 观察乙酰化的低密度脂蛋白(AcLDL)对血管平滑肌细胞亲脂素(adipophilin)表达的影响及亲脂素对血管平滑肌细胞的AcLDL摄取及脂质集聚的影响.从而探讨其在糖尿病大血管病变发生中的作用.方法 以不同浓度AcLDL干预人血管平滑肌细胞(HVSMCs).应用Northern印迹及Western印迹技术检测AcLDL对亲脂素表达的影响;以RNA干扰技术、流式细胞仪、酶法和油红O染色检测亲脂素对HVSMCs的脂质集聚及AcLDL摄取的影响.结果 AcLDL呈剂量依赖性地增加HVSMCs的亲脂素的表达,沉默亲脂素基因使HVSMCs对AcLDL的摄取(降低38.7%,P<0.05)和脂质集聚能力下降(甘油三酯、总胆固醇分别下降30.6%和29.8%,均P<0.01).结论 亲脂素促进HVSMCs摄取AcLDL,增加HVSMCs脂质集聚,这可能是亲脂素促进动脉粥样硬化的机制之一.     

尼克酰胺-N-甲基转移酶在链脲佐菌素致糖尿病猴胰岛中的高表达及意义

目的： 本文旨在明确尼克酰胺-N-甲基转移酶（NNMT）在链脲佐菌素（STZ）致糖尿病猴胰腺中的表达及其定位，进而分析NNMT在β细胞损伤中的重要作用。方法： 应用基因芯片技术筛选STZ致糖尿病猴胰腺组织差异表达基因，选择NNMT作为研究对象。半定量RT-PCR及Western印迹法分别从mRNA及蛋白水平验证该差异，然后应用免疫组化技术观察该蛋白在胰腺内外分泌细胞中的表达情况。结果： NNMT在正常猴胰腺中仅有微弱表达，但在STZ致糖尿病猴胰腺中其mRNA及蛋白水平均明显上调。免疫组化结果显示该差异表达主要表现在胰岛β细胞分布区。结论： NNMT可以催化对维持细胞功能极为重要的尼克酰胺甲基化，其在糖尿病β细胞内表达上调可能会引起细胞内能量代谢障碍而导致β细胞损伤。     

高糖对人大血管细胞钾依赖钠钙交换蛋白6表达的影响

目的 观察钾依赖钠钙交换蛋白6（NCKX6）基因在人主动脉内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞的表达，以及高糖对大血管NCKX6表达的影响。方法 Western印迹检测正常血管组织和2型糖尿病血管组织NCKX6蛋白的差异表达，RT—PCR检测NCKX6基因在人主动脉平滑肌细胞（HASMC）、人主动脉内皮细胞（HAEC）和人血管巨噬细胞（THP-1）中的表达，Northern印迹杂交检测高糖作用HAEC细胞NCKX6mRNA的表达差异。结果 Western印迹初步显示NCKX6在2例糖尿病患者大血管中明显高表达，RT—PCR观察到NCKX6基因主要在HAEC细胞中表达，而HAMSC和THP-1细胞中表达量低。Northern印迹杂交进一步观察到随着培养液D-葡萄糖浓度的增加，作用72h后HAEC细胞NCKX6mRNA表达明显增高，30mmol／LD-葡萄糖作用下NCKX6mRNA表达量可增加5—6倍。结论 NCKX6主要在人主动脉内皮细胞中表达，并且受到葡萄糖的调控。提示NCKX6与糖尿病大血管病变有密切的关系。     

亲脂素增加血管平滑肌细胞的脂质集聚

目的 观察乙酰化的低密度脂蛋白(AcLDL)对血管平滑肌细胞亲脂素(adipophilin)表达的影响及亲脂素对血管平滑肌细胞的AcLDL摄取及脂质集聚的影响.从而探讨其在糖尿病大血管病变发生中的作用.方法 以不同浓度AcLDL干预人血管平滑肌细胞(HVSMCs).应用Northern印迹及Western印迹技术检测AcLDL对亲脂素表达的影响;以RNA干扰技术、流式细胞仪、酶法和油红O染色检测亲脂素对HVSMCs的脂质集聚及AcLDL摄取的影响.结果 AcLDL呈剂量依赖性地增加HVSMCs的亲脂素的表达,沉默亲脂素基因使HVSMCs对AcLDL的摄取(降低38.7%,P<0.05)和脂质集聚能力下降(甘油三酯、总胆固醇分别下降30.6%和29.8%,均P<0.01).结论 亲脂素促进HVSMCs摄取AcLDL,增加HVSMCs脂质集聚,这可能是亲脂素促进动脉粥样硬化的机制之一.     

亲脂素增加血管平滑肌细胞的脂质集聚

目的 观察乙酰化的低密度脂蛋白(AcLDL)对血管平滑肌细胞亲脂素(adipophilin)表达的影响及亲脂素对血管平滑肌细胞的AcLDL摄取及脂质集聚的影响.从而探讨其在糖尿病大血管病变发生中的作用.方法 以不同浓度AcLDL干预人血管平滑肌细胞(HVSMCs).应用Northern印迹及Western印迹技术检测AcLDL对亲脂素表达的影响;以RNA干扰技术、流式细胞仪、酶法和油红O染色检测亲脂素对HVSMCs的脂质集聚及AcLDL摄取的影响.结果 AcLDL呈剂量依赖性地增加HVSMCs的亲脂素的表达,沉默亲脂素基因使HVSMCs对AcLDL的摄取(降低38.7%,P<0.05)和脂质集聚能力下降(甘油三酯、总胆固醇分别下降30.6%和29.8%,均P<0.01).结论 亲脂素促进HVSMCs摄取AcLDL,增加HVSMCs脂质集聚,这可能是亲脂素促进动脉粥样硬化的机制之一.