流感嗜血杆菌氨苄西林耐药基因研究

目的明确我院分离的流感嗜血杆菌（H1）氨苄西林耐药的基因。方法用E试验测定我院上呼吸道感染患儿鼻咽部分离300株HI对氨苄西林耐药情况；以Nitrocdin纸片检测β内酰胺酶；PCR扩增及序列分析确定产酶株的基因型。结果32株氨苄西林耐药株均产β内酰胺酶，占总菌株数11％（32／300），PCR检测出TEM-131株，ROB-11株。结论产β内酰胺酶是H1对氨苄西林耐药的重要机制，TEM-1型是β内酰胺酶主要基因型，ROB-1型β内酰胺酶也首次被检出，值得关注和长期监测。     

上海地区艾滋病病毒感染者/艾滋病患者原发性耐药基因调查及抗病毒治疗效果观察

目的 了解上海地区伴有HIV-1原发性耐药的艾滋病病毒感染者/艾滋病患者（HIV/AIDS）对高效抗反转录病毒治疗（HAART）效果的影响,评估长期抗病毒治疗方案,为调整治疗策略提供依据。方法 从上海市艾滋病治疗数据库中随机选取2007-2013年期间被诊断为HIV-1的感染者,在未治疗前进行原发性耐药检测。对其中原发性耐药的病例进行1~7年不等的随访检测,通过CD4+T淋巴细胞计数及病毒载量结果评估抗病毒治疗效果。结果 1 543例HIV-1感染者中发现HIV原发性耐药42例,其中失访8例,死亡1例,停药1例,最后获得32例原发性耐药者。32例中非核苷类反转录酶抑制剂（NNRTI）耐药相关突变11例,核苷类反转录酶抑制剂（NRTI）耐药相关突变7例,蛋白酶抑制剂（PI）耐药相关突变6例;对NRTIs和NNRTIs同时耐药突变有3例,同时发生对PIs和NNRTIs的耐药相关突变1例,同时发生对PIs和NRTIs的耐药相关突变2例;对整合酶抑制剂（IN）耐药相关突变2例,平均原发性耐药率为2.7%。随访监测CD4+T淋巴细胞计数和病毒载量变化结果显示,32例患者的CD4+T淋巴细胞数量在HAART治疗前和治疗后的0.5、1、2、3、4、5、6和7年（1个月）时分别为249.5157.4、304.9188.7、356.3206.4、441.4245.7、455.4256.8、453.2168.5、458.2202.4、454.066.8和432.0100.4个/l。服药依从性指标评估显示所有病例均每年检测病毒载量,除了2例病例病毒载量为600拷贝/ml和700拷贝/ml外,其余病毒载量检测均低于检测下限,病毒抑制率为100%。上述病例在随访期间,均因毒副反应而更换为其他一线药物或二线药物。结论 通过随访观察上海地区伴原发性耐药的HIV/AIDS对抗病毒的治疗效果,在原发性耐药率低的流行地区,如果治疗管理规范,患者服药依从性好,并经常开展公共卫生原发性耐药监测,在条件有限的情况下可不考虑进行治疗前原发性耐药检测。     

2007-2013年上海市HIV-1感染者毒株耐药监测

目的 了解上海市2007-2013年HIV-1感染者的原发耐药基因突变情况,掌握耐药毒株变化趋势。 方法 随机选取2007-2013年随访的常住上海未经抗病毒治疗的HIV-1感染者血浆标本1296例,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增、DNA测序、亚型鉴定,并与国际HIV耐药数据库比对分析。 结果 获得1085例pol区基因片段,其中亚型分布显示,CRF01_AE 651例(60.0%),其次为CRF07_BC 253例(23.3%)、B亚型97例(8.9%)、CRF08_BC 52例(4.8%)、C亚型12例(1.1%)、CRF01_B 10例(0.9%)、F2亚型2例(0.2%)、G亚型2例(0.2%)、CRF02_AG 5例(0.5%)和CRF03_AB 1例(0.2%)。原发耐药率平均为1.4%,其中核苷类反转录酶抑制剂(NRTI)耐药相关突变率为0.3%(3/1085),非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTI)耐药相关突变率为0.9%(9/1085),整合酶抑制剂(IN)耐药相关突变率为0.2%(2/1085)。同时发生对蛋白酶抑制剂(PIs)和NNRTIs的耐药相关突变1例。 结论 2007-2013年上海市HIV-1感染者中存在原发耐药基因变异,耐药率呈下降趋势,从2007年的4.5%下降到2013年的1.1%。耐药基因型以CRF01_AE为主,男男同性传播为主,极少数HIV感染者同时存在对2种主要治疗药物耐药,应加强CRF01_AE耐药毒株的动态监测和研究,尤其是在男男性接触人群中的变化趋势。     

一起家庭内HIV-1感染的分子流行病学研究

[目的]采用现场流行病学和分子流行病学相结合的方法,以阐明家庭内成员HIV-1病毒传播关系。[方法]通过定性流行病学,调查一家庭内各成员有关HIV-1感染及其相关因素,并应用巢式RT-PCR扩增HIV-1pol区和env区基因,经DNA测序后用遗传进化系统树比对的方法,结合现场调查资料进行综合分析。[结果]该家庭中3人HIV感染毒株亚型均为CRF 07-BC。3个病例毒株的基因同源性高达99%和98%,且克隆基因差异较小,父母之间的基因克隆进化关系成立,但父子之间的进化关系明显大于母子的关系。3人与耐药相关基因突变位点分布情况基本一致,但在A71T位点上的突变率以儿子最高(100%),父亲其次(83%),母亲则未发生突变。[结论]该家庭中母亲是感染了父亲的部分尚未发生变异的病毒株,儿子则感染了父亲体内的变异株,初步提示为家庭内个人密切接触的HIV感染。     

HIV抗原抗体联合检测试剂在高危人群筛查中的应用

目的：应用第四代人类免疫缺陷病毒（HIV）抗原抗体联合检测试剂,对静脉吸毒及性乱人群、同性恋人群和临床可疑HIV感染患者进行HIV筛查,以了解第四代试剂的检测灵敏度和特异度。方法：分别用第三代和第四代HIV抗原抗体检测试剂,对静脉吸毒及性乱、同性恋、可疑HIV感染人群的样本进行检测,阳性反应样本用免疫印迹法（Westernblot,WB）进行确认;第三代试剂检测为阴性而第四代试剂呈阳性反应的标本,除进行WB确认试验外,再加作P24抗原检测和HIV-1RNA检测。结果：第三代和第四代试剂检测HIV感染的灵敏度均为100%,特异度则分别为97.99%和96.36%。但在早期感染样本中,第四代试剂的阳性反应较第三代试剂强;在检测静脉吸毒及性乱人群样本中,第四代试剂的特异度为99.37%,假阳性率为0.62%（95%可信区间为0.3%～1.2%）;在检测同性恋人群样本中,第三代试剂和第四代试剂的特异度分别为99.03%和98.45%。在可疑HIV感染患者样本中,第三代和第四代试剂筛查呈阳性反应经WB确认的阳性符合率分别为92.86%和89.00%。结论：相对于第三代HIV检测试剂,第四代HIV抗原抗体联合检测试剂诊断HIV感染的灵敏度与之相同,而特异度则稍低。     

CD4+CD25 nt/hi CD127lo调节性T细胞对HIV感染者免疫状态及病程进展的影响

目的:探讨具有CD4 CD25nt/hi CD127lo特征的调节性T细胞频率对中国HIV-1感染者免疫状态及病程进展的影响.方法:选取100名未经治疗的HIV-1感染者和4个年龄组的312名健康人对照,采集静脉血,经三重免疫荧光染色,用流式细胞术分析CD4 CD25 Treg表型和CD4 CD25nt/hiCD127loTreg频率并进行CD4 T细胞绝对计数;应用酶联免疫斑点技术(ELISpot)在单细胞水平观察受试者的HIV-1特异性细胞免疫功能;平行检测HIV感染者的病毒载量(NASBA方法).结果:不同病程的HIV-1感染者外周血中CD4 CD25nt/hiCD127loTreg频率存在差异,进展期高于新近感染者(P＜0.001),其平均水平显著高于健康人(P＜0.001);CD4 CD25nt/hiCD127loTreg频率与HIV感染者CD4 T细胞数量呈显著负相关(r=0.354,P＜0.01),与病毒载量呈明显正相关(r=0.287,P＜0.01);高频率CD4 CD25nt/hiCD127loTreg HIV-1感染者(进展期)的外周血PBMCs经HIV-1多肽刺激后分泌IFN-γ的CD8 T细胞频率明显低于无症状的新近感染者.结论:初步证实HIV-1感染者外周血中CD4 CD25nt/hiCD127kloTreg细胞频率增加与CD4 T细胞数量降低及病程进展相关;高频率CD4 CD25nt/hiCD127lo Treg细胞对HIV-1感染者的细胞免疫功能具有抑制作用.本结果为进一步阐明HIV持续感染的免疫机制提供了新依据.     

上海市常住人口HIV-1感染者基因亚型和耐药性突变横断面研究

目的:采用分层整群随机抽样原则,对本市95例已确诊的人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)感染者进行基因亚型和耐药性突变研究,以了解上海市HIV-1基因亚型及耐药性HIV-1的流行情况。方法:应用巢式RT-PCR扩增HIV-1聚合酶基因,经DNA测序后进行进化系统树分析和重组分析,以确定HIV-1基因亚型和重组体,并与国际耐药数据库比对,辨别耐药性突变位点,结合流行病学资料进行分析。结果:①在95例本市HIV感染者中经RT-PCR扩增并获得基因亚型序列70例,基因分型以CRF01_AE重组体30例(42.9%)为主,其余分别为B亚型6例(8.6%)、B’亚型10(4.3%)、G亚型2例(2.9%)、K亚型1例(1.4%)、CRF02_AG3例(4.3%)、CRF07_BC8例(11.4%)和CRF08_BC7例(10.0%),亚型间或重组体间二重重组体(CRF02_AG/CRF01_AE、B/CRF01_AE、K/G)3例(4.3%);②耐药分析结果表明,本组人群的蛋白酶抑制剂(PIs)原发耐药突变率为4.3%。在抗病毒治疗的HIV感染者15例中,11例(73.3%)发生反转录酶抑制剂(RTIs)耐药基因突变,其中核苷和非核苷类反转录酶抑制剂的耐药突变率分别为10例和11例(66.7%和73.3%),远高于未治疗者。结论:本研究分析了上海市HIV-1基因亚型和耐药突变的流行与变迁情况,对HIV-1遗传变异多样性和耐药监测体系的建立及上海市的艾滋病预防和控制工作有重要指导意义。