云南省红河州地区60例人类免疫缺陷病毒-1患者分子流行病学研究

目的 对云南省红河州地区部分HIV-1感染者进行分子流行病学调查,为确定该地区流行的HIV-1分子生物学特征提供监测依据.方法 应用反转录(RT)-PCR扩增HIV-1多聚酶基因,DNA测序后进行进化系统树分析,确定基因亚型,并与国际耐药数据库比对,辨别耐药性突变位点.结果 60例患者中,男39例,女21例,平均年龄35.5岁.静脉注射毒品感染34例,性传播感染12例,采供血和输血感染2例,感染途径不详12例.基因亚型分别为08-BC亚型53例,占88.3%;07-BC亚型6例,占10.0%;01-AE亚型1例,占1.7%.耐药相关基因总突变率为33.3%.与蛋白酶抑制剂(PRI)和反转录酶抑制剂(RTI)耐药相关的基因突变率分别为5.0%和31.7%;蛋白酶基因主突变位点为1541M、V82VFIL、M46MI,各占1例.反转录酶基因突变位点分别为T69D 4例,A62V 6例,D67DE 1例,E44D 1例,V179D 2例,V179E 1例,K238KN 1例,L234T+P236S 1例,V106E 1例.结论 云南省红河州地区HIV-1感染以静脉注射毒品为主.HIV-1基因亚型以08-BC亚型为主;已存在与PRI和RTI耐药相关的基因突变.     

一起家庭内HIV-1感染的分子流行病学研究

[目的]采用现场流行病学和分子流行病学相结合的方法,以阐明家庭内成员HIV-1病毒传播关系。[方法]通过定性流行病学,调查一家庭内各成员有关HIV-1感染及其相关因素,并应用巢式RT-PCR扩增HIV-1pol区和env区基因,经DNA测序后用遗传进化系统树比对的方法,结合现场调查资料进行综合分析。[结果]该家庭中3人HIV感染毒株亚型均为CRF 07-BC。3个病例毒株的基因同源性高达99%和98%,且克隆基因差异较小,父母之间的基因克隆进化关系成立,但父子之间的进化关系明显大于母子的关系。3人与耐药相关基因突变位点分布情况基本一致,但在A71T位点上的突变率以儿子最高(100%),父亲其次(83%),母亲则未发生突变。[结论]该家庭中母亲是感染了父亲的部分尚未发生变异的病毒株,儿子则感染了父亲体内的变异株,初步提示为家庭内个人密切接触的HIV感染。     

近全长序列分析HIV-1独特型CRF01_AE/B''重组病毒基因

目的：对上海市发现的1例独特类型的CRF01_AE／B’重组病毒株进行近全长序列分析，以了解其DNA序列的特征．方法：应用巢式逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法，分段扩增HIV-1近全长基因组相应片段，进行克隆、测序．并分析其遗传进化树和序列断点位置。结果：近全长序列分析提示，该患者所感染的病毒由CRF01_AE和HIV-1B’亚型嵌合组成，两者各占约50％：其多聚酶蛋白基因（Pol）和外膜糖蛋白基因（Env）区均有HIV-1B’亚型片段和CRF01_AE片段嵌合组成：2种亚型病毒DNA片段嵌合点的位置与过去报道的重组病毒株（CRF15_AE／B、CRF33_AE／B和CRF34_AE／B）均不同：结论：在我国常见流行的HIV-1CRF01_AE重组病毒与B’亚型已在HIV-1感染人群中发生重组，其可能是在我国散发流行的独特型重组病毒株。     

CD4+CD25 nt/hi CD127lo调节性T细胞对HIV感染者免疫状态及病程进展的影响

目的:探讨具有CD4 CD25nt/hi CD127lo特征的调节性T细胞频率对中国HIV-1感染者免疫状态及病程进展的影响.方法:选取100名未经治疗的HIV-1感染者和4个年龄组的312名健康人对照,采集静脉血,经三重免疫荧光染色,用流式细胞术分析CD4 CD25 Treg表型和CD4 CD25nt/hiCD127loTreg频率并进行CD4 T细胞绝对计数;应用酶联免疫斑点技术(ELISpot)在单细胞水平观察受试者的HIV-1特异性细胞免疫功能;平行检测HIV感染者的病毒载量(NASBA方法).结果:不同病程的HIV-1感染者外周血中CD4 CD25nt/hiCD127loTreg频率存在差异,进展期高于新近感染者(P＜0.001),其平均水平显著高于健康人(P＜0.001);CD4 CD25nt/hiCD127loTreg频率与HIV感染者CD4 T细胞数量呈显著负相关(r=0.354,P＜0.01),与病毒载量呈明显正相关(r=0.287,P＜0.01);高频率CD4 CD25nt/hiCD127loTreg HIV-1感染者(进展期)的外周血PBMCs经HIV-1多肽刺激后分泌IFN-γ的CD8 T细胞频率明显低于无症状的新近感染者.结论:初步证实HIV-1感染者外周血中CD4 CD25nt/hiCD127kloTreg细胞频率增加与CD4 T细胞数量降低及病程进展相关;高频率CD4 CD25nt/hiCD127lo Treg细胞对HIV-1感染者的细胞免疫功能具有抑制作用.本结果为进一步阐明HIV持续感染的免疫机制提供了新依据.     

中国健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo特征的调节性T细胞频率

目的:初步确定健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo特征的调节性T细胞(Treg)频率,为临床相关疾病的研究及Treg的分选提供参考.方法:采集312名8～60岁(5个年龄组)、不同性别健康人的静脉血,经三重免疫荧光染色,用流式细胞术分析CD4+CD25nt/hiCD127lo Treg细胞频率,并观察细胞内Foxp3转录因子的表达.结果:健康人CD4+CD25nt/hiCD127lo Treg细胞在外周血中约占CD4+T细胞的(6.55±0.11)%,各年龄组之间有差异(P=0.015),组内性别之间也存在统计学意义(P＜0.05);CD25nt/hiCD127lo细胞特异性地表达Foxp3转录因子.结论:初步确定了中国健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo表达特征的细胞频率,为Treg细胞的临床研究奠定了基础;CD25nt/hiCD127lo作为CD4+CD25+Treg细胞表面的特征性标志,可在分选时排除其他细胞干扰,获得较完整的Treg细胞.     

MAL表达对HIV感染者疾病进展的影响及相关机制研究

目的研究T淋巴细胞成熟相关蛋白(MAL)对HIV感染者疾病进展的影响,并探索其相关分子机制。方法利用流式细胞术检测MAL在HIV感染不同阶段T细胞上的表达,分析MAL表达水平与疾病进展的相关性;通过细胞系和体外刺激模型研究MAL对细胞因子分泌、细胞增殖的影响;利用细胞系模型检测MAL对HIV病毒包装的影响。结果 MAL表达水平与HIV感染者CD4~+T细胞绝对数和CD4~+T/CD8~+T比值呈显著正相关,高CD4~+T细胞组MAL的表达显著高于低CD4~+T细胞组;MAL敲除下调T细胞IL-2分泌,对细胞增殖影响不明显;MAL过表达对病毒总量无影响,但可提高HIV在细胞内的感染效率。结论本研究发现MAL表达水平与HIV感染者疾病进展呈显著负相关,其下调表达可抑制IL-2分泌,从而影响T细胞活性;MAL过表达可提高HIV的感染效率,机制有待进一步研究。     

上海市新诊断114例人类免疫缺陷病毒Ⅰ型感染者的分子生物学研究

目的对上海市2004至2005年新诊断的114例人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（H1V-1）感染者进行分子流行病学调查，为确定上海市流行的HIV-1的分子生物学特征提供监测依据。方法应用逆转录聚合酶链反应扩增HIV-1多聚酶基因，DNA测序后进行进化系统树分析确定基因亚型并与国际耐药数据库比对辨别耐药性突变位点。结果1．114例中除1例不详外，本市户口33例，占28．95％，外来人口80例，占70．18％；经性传播感染51例，占44．74％，经静脉注射吸毒感染43例，占37．72％，经采供血和输血感染3例，占2．63％，感染途径不详17例，占14．91％；2．基因亚型分别为B亚型9例，占7．89％，B’亚型15例，占13．16％，C亚型1例，占0．88％，G亚型1例，占0．88％，CRF01_AE38例，占33．33％，CRF07_BC46例，占40．35％和CRF08BC4例，占3．51％；3．耐药分析结果表明本次研究人群的耐药性主突变率为18．42％。与蛋白酶抑制剂（PRIs）和逆转录酶抑制剂（RTIs）耐药相关的基因主突变率分别为2．63％（3／114）和17．54％（20／114）。蛋白酶基因主突变位点突变频率为M46I，占66．67％，M46L，占33．33％。逆转录酶基因主突变位点突变频率分别为M41L，占7．69％、A62V，占7．69％、T69S，占7．69％、V75I／L，占15．38％、K103R，占25．00％、V118I,占23．08％、V179D／E／T，占33．33％、G190R，占8．33％、L210K／M／X，占38．46％、F227L／I，占16．67％、M230R，占8．33％和P236R，占8．33％。结论上海市新诊断的HIV-1感染者依然以静脉吸毒和性传播为主，感染者以外省市流动人口为主。HIV-1基因亚型流行呈多样性，主要以CRF01_AE、CRF07_BC和B／B’为主。在114例新诊断、尚未经抗病毒治疗的HIV-1感染者中，已存在与PRIs和RTIs耐药相关的基因主突变。