胶体金免疫层析法检测念珠菌抗原对侵袭性念珠菌肺炎的诊断价值

目的研究胶体金免疫层析法检测念珠菌抗原对侵袭性念珠菌肺炎的诊断价值。方法纳入2015年4月至2019年9月本院诊治的怀疑为侵袭性念珠菌肺炎、侵袭性曲霉菌肺炎、非真菌感染病例253例,使用我们与军事医学研究院共同研发的胶体金免疫层析试剂检测血液中念珠菌抗原。结果本研究共测定临床血液标本253例,其中诊断为侵袭性肺念珠菌感染的有30例,非真菌感染患者213例,侵袭性肺曲霉菌感染10例。胶体金法检测念珠菌的灵敏度为87%,特异性为93%,阳性预测值为63%,阴性预测值为98%。结论胶体金免疫层析法对于侵袭性肺念珠菌肺炎具有较高的灵敏度和特异性,且具有快速、方便等特点,能够用于临床念珠菌肺炎的检测。     

基于镧系高敏荧光的生物毒素现场快速检测方法的研究

目的 利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法.方法 首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效价最高的捕获抗体,分别与相应检测抗体平行组合,确定最优的配伍组合条件建立检测方法.其次,对该法的敏感性、精密性、定量能力和特异性进行评价.结果 所建立的时间分辨荧光免疫层析法(TRFIC)可在20 min内完成对3种生物毒素的定性/定量检测.3种毒素的最低检出限均可达0.5 ng/ml,定量范围为0.5～50 ng/ml,3种毒素间及与黄曲霉毒素B1、T-2毒素均无交叉反应,批内重复性和批间重复性变异系数均小于15％.结论 该研究建立了一种基于可见光激发的TRFIC,在生物毒素的检测中获得了较高的最低检测限,与配套的小型便携式检测仪器一起使用,具有检测快速、可远程传输结果的优势,未来在生物反恐、生物武器核查等领域具有较高的应用价值和应用前景.     

霍乱弧菌外膜蛋白W的原核表达及抗原性分析

目的在大肠杆菌中表达霍乱弧菌种特异性外膜蛋白（Omp）W,纯化后制备检测用OmpW抗体。方法采用PCR法以霍乱弧菌基因组为模板扩增ompW基因,插入表达载体pET-32a（＋）的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-32a-ompW;重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,筛选阳性重组菌株,经IPTG诱导获得目的蛋白,纯化后免疫新西兰大耳白兔,制备OmpW的多克隆抗体并进行鉴定。结果扩增得到ompW基因片段,并成功构建pET-32a-ompW原核表达系统,重组蛋白OmpW以包涵体形式高效表达;制备的OmpW抗体能与天然的O1群和O139群霍乱弧菌结合。结论霍乱弧菌OmpW可由原核系统高效表达,免疫获得的抗体具有较好的效价,为进一步制备霍乱弧菌检测用抗体奠定基础。     

利用BioNumerics软件读取API50CH试验条方法的建立

目的建立一种利用BioNumerics生物软件分析API细菌鉴定系统50CH试验条发酵反应结果的方法。方法将70株芽孢杆菌属（Bacillus）细菌API 50CH试验条发酵反应结果储存为数码图像,用BioNumerics软件将图像中的红黄颜色转换为数值,再运用百分位数统计方法分析上述数值并计算出每个反应的阈值,定义大于或等于阈值的反应结果为＂＋＂,小于阈值的反应结果为＂-＂。将＂＋/-＂输入apiweb-API 50CHB V3.0细菌鉴定数据库获取鉴定结果。结果与结论该方法对Bacillus的鉴定结果与API经典方法鉴定结果一致。应用上述方法可帮助初级实验人员客观地获得生化反应结果,有利于实验室检测的标准化建设。     

肺炎衣原体及肺炎支原体临床血清学检测试剂的研发及应用

目的 通过实验获得工程重组肺炎支原体和肺炎衣原体的抗原,探讨其临床诊断价值;分析儿童肺炎支原体和肺炎衣原体的发病情况.方法 采集医院收治的社区获得性肺炎患儿的血标本进行肺炎支原体和肺炎衣原体检测,并通过PCR方法得到肺炎衣原体的特异性抗原Cpn-MOMP和Cpn-CPAF和肺炎支原体P1-C和P1-B基因片段,应用工程重组抗原进行肺炎衣原体抗原特异性及灵敏度检测和肺炎支原体的灵敏度实验.结果 肺炎支原体及肺炎衣原体感染的阳性率随着年龄的增长而增加,肺炎衣原体冬季发病率较高.PCR方法可以得到完整的Cpn-MOMP和Cpn-CPAF基因片段,且Cpn-MOMP重组抗原产量高特异性较好.重组肺炎支原体P1-C和P1-B抗原产量较满意.结论 肺炎支原体及肺炎衣原体感染阳性率逐年升高,通过重组的Cpn-MOMP和Cpn-CPAF抗原可用于肺炎衣原体感染的血清学检测,具有临床应用前景.     

鹦鹉热衣原体基因工程亚单位疫苗免疫羊抗体产生动力曲线

目的观察鹦鹉热衣原体基因工程亚单位疫苗免疫羊后产生的动力学曲线。方法用不同剂量鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白基因工程亚单位疫苗免疫绵羊,免疫前及免疫后不同时间采血检测抗体情况,观察绵羊抗体的产生和变化水平。结果免疫剂量为0.5mg/只颈部肌肉多点注射,具有良好的免疫效果。结论鹦鹉热衣原体基因工程亚单位疫苗免疫剂量为0.5mg/只颈部肌肉多点注射,在绵羊整个妊娠期内具有保护作用。     

鹦鹉热嗜衣原体两对荧光定量PCR引物的应用与比较

针对鹦鹉热嗜衣原体(Cps)的主要外膜蛋白(MOMP)基因和多形态膜蛋白(PMP)基因分别设计引物,建立荧光定量PCR方法,比较两对引物的灵敏度和特异性。试验结果表明,两对引物均可用于Cps检测,在样本中靶标浓度高时,PMP引物的检测灵敏度优于MOMP引物;但前者的扩增效率低于后者,后者更适合用于Cps的实时定量PCR检测。相对定量研究表明国内不同Cps流行株的PMP基因在基因组上的拷贝数可能存在较大差异。     

免疫胶体金试剂检测布鲁菌苗接种牛血清结果分析

目的：评价实验室研制的布鲁菌病抗体快速检测试剂（胶体金法）能否鉴别布鲁菌自然感染和免疫接种所产生的抗体。方法用胶体金试剂对272份接种S2和A19布鲁菌苗的牛血清进行检测,并以虎红平板凝集试验作为对照。结果与结论结果显示,两种方法一致率100％。布鲁菌病抗体快速检测试剂（胶体金法）不被疫苗免疫抗体干扰,可用于布鲁菌感染诊断。