建立只标记加成碱基的^32P后标记法以用于检测致癌物—DNA加成物

本文报道建立~(32)P后标记方法(~(32)P-Postlabeling Method)以用于检测致癌物-DNA加成物。其基本原理:用核酸酶P1(Nu.P1)完全消化DNA,释出5′单磷酸脱氧核苷(pN),而加成的碱基(Xi),则释出5′磷酸二脱氧核苷(pXipN);经前列腺酸性磷酸酶(PAP)作用后,分别生成N和XipN,然后经T_4多聚核苷酸激酶(PNK)作用,将[γ-~(32)P]ATP的~(32)P转移XipN的5′末端上,生成标记*pXipN而N不被标记。经聚乙烯亚胺(PEI)纤维素薄层纯化、分离和放射自显影,则可确定已加成的碱基,若DNA量已知,则可进行定量分析。在人羊膜上皮细胞FL中,适量苯并(a)芘[B(a)P]处理24b后,可分离到4个加成物斑块,其总相对标记量(Relative Adduct Labeling,RAL)有剂量依赖性关系。     

细胞色素P450调节剂对DNA加合物形成的影响

人羊膜上皮细胞ＦＬ系分别接触ａ－萘黄酮（０．６ｍｍｏｌ·Ｌ￣（－１））β－萘黄酮（２０ｐｍｏｌ·Ｌ￣（－１））２４ｈ后，再用苯并（ａ）芘［Ｂ（ａ）Ｐ，１０ｕｍｏｌ·Ｌ￣（－１）］处理２４ｈ，用３２Ｐ后标记技术测定以Ｂ（ａ）－ＤＮＡ加合物。结果发现，阳性对照组，ａ－萘黄酮预处理组及β－萘黄酮预处理组加合物的量分别为（加合物个数／１０’个核苷酸）：４．７±０．２（１００％），１．８±０．９（３８．３％），１６．０±２．２（３４０．１％）．该实验结果直接显示了纳胞色素Ｐ４５０调节剂对肿瘤发生影响的作用水平。亦为药物对致癌物代谢影响的研究提供了一种方法．     

单克隆抗体在体内肿瘤定位中的应用

三十多年前,Pressman等就己提出用放射性核素(radionuclides)标记抗体作体内肿瘤定位的概念,并开创了这一领域的研究.但发展缓慢.只是近七年来,由于γ-闪烁照相术(gamma scintigraphy)的发展和一些抗肿瘤高纯度抗体的制备,才促进了这类研究的较快发展.特别是单克隆抗     

几种促癌剂对NIH／3T3细胞经缝隙连结细胞间通信的影响

利用抓扒负荷法将荧光染料引入细胞内,观察细胞间荧光染料的扩散以判断经缝隙连结的细胞间通信。分析了促癌剂TPA、MZR和PB对细胞通信的影响。三者均能抑制细胞通信,在蛋白激酶C抑制剂PMC或STS存在下,TPA和MZR对细胞间通信的抑制作用被拈抗,而PB的作用不受影响。提示前两者对细胞间通信的抑制作用可能通过蛋白激酶C的中介,而PB可能通过其它途径起作用     

DNA聚合酶β可能参与了更广泛的细胞反应并引起遗传不稳定

近年来有关真核细胞中ＤＮＡ聚合酶的研究迅速增多。 1985年前 ,确认的ＤＮＡ聚合酶只有 3种 :聚合酶α、β以及线粒体聚合酶γ。时至今日已至少发现了 14种ＤＮＡ聚合酶 ,包括聚合酶α、β、γ、δ、ε、ζ、η、θ、ι、κ、λ、μ、ＲＥＶ1及ＭＵＳ30 8,在真核细胞ＤＮＡ的复制、修复、跨损伤合成、ＤＮＡ重组以及细胞周期调控等多种重要的生物代谢过程中发挥重要作用[1] 。在一定程度上 ,细胞内的各种聚合酶均有其独特的功能和作用领域。如具有引物酶活性的聚合酶α的作用是启动ＤＮＡ复制并合成ＲＮＡ -ＤＮＡ引物 ;聚合酶δ和ε是主要…     

人细胞色素P450 前mRNA的可变剪接研究进展

Human genes typically contain multiple introns, and in many cases the exons can be joined more than one way to generate multiple rnRNAs, encoding distinct protein isoforms. This process is called alternative splicing. The article summarized the human cytochrome P450 pre-mRNA alternative splicing and their regulatory mechanism and impacts on biological functions.     

细胞色素P450 1A1cDNA表达质粒的构建及转基因细胞系的建立

将ＣｙｔＰ４５０１Ａ１ｃＤＮＡ片段亚克隆至哺乳动物细胞高表达型穿梭载体中，酶切图谱显示片段被正向克隆于多克隆位点中。运用电穿孔法将重组质粒转入人羊膜ＦＬ细胞中国仓鼠ＣＨＬ及Ｖ７９细胞中，经Ｇ４１８筛选３周后获得抗性细胞克隆，并扩大成系。     

高通量实时荧光定量RT-PCR方法验证FL细胞对苯并(a)芘7,8-二氢二醇9,10-环氧化物处理的差异表达基因

目的验证由寡核苷酸微阵列检出的FL细胞对苯并(a)芘7,8-二氢二醇9,10-环氧化物(BPDE)处理的差异表达基因。方法FL细胞分别经0.1%二甲亚砜(DMSO)和0.5μmol.L-1BPDE处理,以高通量实时荧光定量RT-PCR方法(TaqMan(低密度芯片)平行检测185个目标基因的相对表达水平。结果BPDE处理组相对DMSO对照组,51个基因表达有差异,12个基因表达上调,39个基因表达下调,(n=3,P<0.05),涉及细胞增殖,分化,凋亡调控基因,转录调节基因和代谢酶基因等。结论高通量实时荧光定量RT-PCR可迅速对微阵列数据进行验证,差异表达谱有助于研究BPDE的毒理机制和细胞的应答反应。     

致癌物引起猴贤细胞的遗传不稳定

致癌物引起猴贤细胞的遗传不稳定张小山，余应年（浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室杭州３１００３１）本实验室应用穿梭质粒ｐＺ１８９确认环境致突变物／致癌物可以在哺乳类细胞引起非定标性突变的发生，这提示致突变物／致癌物诱发的突变除了通过对...