用^32P后标记法分析沥青和非沥青接触者外周血单个核细胞中DNA加成物

本研究用~(32)P后标记法分别对铺柏油路工人、献身员、大学生外周血单个核细胞DNA加成物进行 了分析,结果发现他们分别可分离到1-7、0-7、0-5个加成物斑块,其相对加成物标记量(RAL,加成物个数/10~7个核苷酸)分别为1.34-4.24(2.29±0.88)、0-0.93(0.50±0.48)、0-0.32(0.16±0.18).经统计学处理后,铺柏油路工人组与后2组之间有非常显著性差异(P<0.01).提示:沥青环境中的暴露对人     

用~(32)P-后标记法对菜油挥发物与DNA形成的加成物研究

本文比较了以~(32)P-后标记方法中的一般强化法和正丁醇强化法,检测低温收集的菜油油烟凝聚物与DNA反应所形成的加成物。实验结果显示了该凝聚物,在没有S_9活化系统的条件下,以正丁醇强化法能检测到与小牛胸腺DNA反应所形成的加成物,在薄板上呈现多个点。而未经加热的菜油以及溶剂对照中没有发现相应的点。表明在菜油油烟凝聚物中,存在着不少代谢活化的亲电子物。它能与DNA反应并形成加成物。     

菜油挥发物-DNA加成物的初探

本文以正丁醇强化~(52)P-后标记法探讨了低温收集的菜油油烟凝聚物与DNA反应所形成的加成物。实验结果发现该凝聚物,在没有S_9活化系统的条件下,能与小牛胸腺DNA反应形成加成物,在薄板上呈现x_1,x_2,x_3三个点。未经加热的菜油中也存在着某种物质可直接与DNA反应,在薄板上形     

用^32P后标记法检测固定组织（细胞）及石蜡包埋组织中DNA加成物

大鼠经腹腔注射不同剂量的Ｂ（ａ）Ｐ４８ｈ后，取出肝脏，分为两半分别在新鲜时及经福尔马林固定后；或在新鲜时及经石蜡包埋后，分别用３２Ｐ后标记法检测其ＤＮＡ加成物，结果分别可分离到１个和５个加成物斑块，其相对加成物标记量（ＲＡＬ））有很好的剂量－效应依赖性关系，经统计学处理后，相同剂量点上加成物的量均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。不同浓度Ｂ（ａ）Ｐ处理后的ＦＬ细胞，再经福尔马林－磷酸盐缓冲液固定后，可分离到４个加成物斑块，其ＲＡＬ有良好的剂量－效应依赖性关系。提示；固定组织（细胞）和石蜡包埋组织中ＲＮＡ加成物的定性和定量均无明显的变化；３２Ｐ后标记法亦可运用于固定组织（细胞）和石蜡包埋组织中ＤＮＡ加成物的检测。     

用~32P后标记法分析沥青和非沥青接触者外周血单个核细胞中DNA加成物

本研究用３２Ｐ中后标记法分别对铺柏油路工人、献血员、大学生外周血单个核细胞ＤＮＡ加成物进行了分析，结果发现他们分别可分离到１－７、０－７、０－５个加成物斑块，其相对加成物标记量（ＲＡＬ，加成物个数／１０７个核苷酸）分别为１．３４－４．２４（２．２９±０．８８）、０－０．９３（０．５０土０．４８）、０－０．３２（０．１±０．１８），经统计学处理后，铺柏油路工人组与后２组之间有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）．提示：沥青环境中的暴露对人体有明显的细胞遗传毒效应，对人体外周血单个核细胞ＤＮＡ加成物分析可作为环境对人类迫传负荷评价的指标。     

利用(32)~P后标记法测定体内外由镍诱发生成大的DNA加合物

镍化合物可在DNA中诱导生成各种小的氧化产物。本研究,利用~(32)P后标记法测定镍(Ⅱ)化合物是否可在体内外诱导大的DNA加合物,离体研究中,DNA与NiCl_2和H_2O_2在37℃下培养1h,可检测到2种主要加合物和几种次要加合物。在培养0～24h和NiCl_2浓度为0～800μM范围内时,这2种主要加合物可随时间和浓度增加而增加,加合物产量在经去羟自由     

DNA甲基化作用及其与致癌作用的关系

绝大多数生物的基因组DNA中均含有修饰碱基.对于脊椎动物而言,5-甲基胞嘧啶(m~5C)是唯一的修饰碱基,它是从SAM经酶促作用将甲基转移给DNA的胞嘧啶(G),真核生物中90%的m~5C发生于5′-CpG 二核苷酸,哺乳类与鸟类约50—70%的CpG 是甲     

~(125)IudR标记靶细胞体外测定细胞介导毒性试验

用γ辐射体同位素5—~(125)碘—2′—脱氧尿嘧啶核苷(~(125)IudR)参入分裂的肿瘤细胞的DNA中,测定这种靶细胞的~(125)IudR释放,是肿瘤免疫检验的一种较好的方法。我们研究了用~(125)IudR标记S—180、HAC、LAC、EAC、Eca109、D—6和Hella细胞的标记条件,并进行了正常和带瘤小鼠的脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞细胞毒试验,试验表明:靶细胞的制备对结果有重要影响,因此必须选择合适的试验条件,如肿瘤细胞的种类和来源,细胞浓度,~(125)IudR用量和标记时间等。本文讨论了这些问题,并介绍了试验方法。     

99例Ⅳa期鼻咽癌的预后分析

[目的]分析Ⅳa期鼻咽癌患者的预后及影响预后的因素。[方法]将99例Ⅳa期鼻咽癌纳入分析。Kaplan-Meier法计算生存数据,并对Ⅳa期鼻咽癌的预后相关因素行单因素和多因素分析。[结果]全组病例3年局部控制率、无远处转移生存率、无进展生存率、疾病相关总生存率分别为87.3%、75.8%、69.3%及77.9%,远处转移是治疗失败主要原因。单因素分析提示N分期较晚患者(N2～3)其生存显著低于N分期较早者(P<0.05)。多因素分析提示N分期较晚影响Ⅳa期病例远处转移发生,但无统计学差异(N0～1vs.N2～3,HR=0.396,95%CI:0.144～1.086,P=0.072)。N2～3的Ⅳa期患者其无远处转移生存和无进展生存率显著低于N0～1的Ⅳa期患者(P=0.023,P=0.011),局部控制率则无显著差异(P=0.432)。[结论]中国鼻咽癌2008分期中Ⅳa期病例预后具有很大的不一致性,主要由颈部淋巴结分期的早晚决定。     

非手术治疗食管癌临床分期的验证

[目的]对中国《非手术治疗食管癌临床分期标准(草案)》进行验证,为该草案进一步修订提供依据。[方法]收集2005~2006年行根治性三维适形放射治疗的食管癌患者236例,颈段25例,胸上段76例,胸中段118例,胸下段17例。放疗中位剂量64Gy(50~74Gy),其中有76例(32.2%)接受了以铂类为主的同期化疗。根据分期草案的标准进行T、N及临床分期,比较不同分期与总生存率的关系。[结果]73例生存患者的中位随访时间为50(10~72)个月,5年总生存率为26.2%。236例患者中,T1、T2、T3和T4的5年生存率分别为100%、35.2%、24.3%、19.8%(P=0.006),生存曲线均无交叉。N0、N1和N2的5年生存率分别为50.7%、16.5%、23.7%(P=0.087),其中N2组与N1组生存曲线存在交叉。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期5年生存率分别为50.7%、0和23.7%(P=0.033),Ⅱ、Ⅲ期生存曲线有交叉。有30例胸段食管癌存在胸廓入口以上食管旁小淋巴结转移(5mm<最长径<10mm),如将这部分患者N分期定义为N1,则N0、N1和N2的5年总生存率分别为34.3%、26.6%和19.4%(P=0.029),各期生存曲线均能很好分开;由此定义的临床分期Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期5年生存率分别为50.7%、31.2%和20.7%(P=0.009),各期生存曲线均能很好分开。[结论]非手术治疗食管癌临床分期草案T分期可以较好地反映预后,N分期标准存在不足。建议将有胸段食管癌胸廓入口以上单纯食管旁小淋巴结转移(最长径<10mm)者定义为N1。     

ERCC2/XPD基因缺失对苯并[a]芘所致DNA损伤修复的影响

目的： 探讨核苷酸切除修复交叉互补基因2 (excision repair cross complementation group 2/Xeroderma pigmentosum D,ERCC2/XPD)在苯并[a]芘所诱导的细胞DNA损伤与修复过程中的作用。方法：应用中国仓鼠卵巢细胞系CHO野生型AA8和ERCC2表达缺失型UV5作为细胞对照模型,MTT法比较两种细胞经苯并[a]芘处理后细胞抑制率的差别;彗星试验和Rad51免疫荧光试验检测不同浓度苯并[a]芘处理及修复24 h后细胞DNA损伤修复的情况。结果：与野生型AA8细胞相比,UV5细胞对苯并[a]芘所致损伤更加敏感,细胞存活率降低 (P<0.05)。彗星试验和Rad51免疫荧光试验结果显示,UV5细胞由于缺失ERCC2/XPD基因,修复苯并[a]芘所致DNA损伤能力降低 (P<0.05)。 结论：ERCC2/XPD蛋白在核苷酸切除修复中发挥解旋作用,对苯并[a]芘所致DNA损伤修复至关重要。     

胃癌细胞BrdUrd标记指数及DNA含量与生物学行为关系的研究

用[3H]标记法检测肿瘤细胞增殖活性已被遗弃,我们将BrdUrd掺入胃癌细胞DNA中,应用双参数流式细胞术(Flow cytometry,FCM)同时检测一组胃癌细胞BrdUrd掺入量和DNA含量,研究胃癌细胞增殖活性与其生物学行为的关系,以指导临床治疗.     

鼻咽癌患者循环DNA检测的临床价值

[目的]探讨鼻咽癌患者循环DNA含量与临床分期、疗效、预后之间的关系.[方法]对296例经病理证实的鼻咽癌患者治疗前抽取外周血,采用紫外分光光度计进行DNA含量的测定.其中103例于治疗结束后又进行了DNA含量测定.并以健康体检者77例作为对照组.[结果]鼻咽癌患者循环DNA含量(3746±401)μg/ml明显高于健康体检者(3348±394)μg/ml,P＜0.05,治疗结束后循环DNA含量(3579±504)μg/ml明显下降,P＜0.05.N3期含量(3898±384)μg/ml显著高于N0期(3684±349)μg/ml含量,P＜0.05.循环DNA含量随着临床分期以及N分期增加而呈逐渐增高趋势,与T分期无关联.[结论]鼻咽癌患者循环DNA的定量分析有助于鼻咽癌的早期诊断、疗效判定、预后预测和复发的监控.     

DNA聚合酶β表达对食管癌放疗敏感性及预后的影响

[目的]探讨DNA聚合酶β表达对食管癌放疗敏感性的影响及预后评估。[方法]收集85例食管癌患者,根据DNA聚合酶β(DNA polβ)的表达水平随机分为高表达常规分割组、高表达超分割组、低表达常规分割组和低表达超分割四组。常规分割:2Gy/f,总量56~64Gy/28~32次,超分割:1.3 Gy/f,2f/d,总量56~62Gy/43~48次。治疗中及治疗后随访,观察急性反应、晚期反应以及近期疗效、局控率及1、3年生存率。[结果]四组之间放疗晚期反应肺纤维化及食管狭窄差别无统计学意义(P=0.887、0.711);近期疗效差异无统计学意义(P=0.862);急性反应放射性气管炎、放射性食管炎差异有意义(P=0.049、0.031),超分割两组显著高于常规分割组;1、3年局部控制率及生存率两组差异明显(P=0.028、0.036、0.040、0.014)。[结论]超分割放疗加重急性反应,DNA polβ表达不同对放疗敏感性有影响,低表达组超分割放疗预后相对较好。     

Aroclorl254预先染毒增强苯并[a]芘对Hep G2细胞DNA的损伤

目的 :探讨Hep G2细胞经Aroclor1254预处理后对苯并[a]芘诱发的DNA损伤的影响。 方法 :运用单细胞凝胶电泳技术检测了HepG2细胞经Aroclor1254(23、46、92和184μmol/L)单独染毒24h和将其预处理24h后再用苯并[a]芘染毒1h对DNA损伤的影响。 结果 :苯并[a]芘诱发的DNA损伤随着Aroclor1254预处理的浓度增大而升高 ,呈明显的剂量效应关系。当Aroclor1254预处理的浓度分别为46、92和184μmol/L时 ,苯并[a]芘诱发的DNA损伤与苯并[a]芘单独作用相比分别升高了8 %、16 %和160 %。184μmol/L的Aroclor1254预处理后 ,苯并[a]芘诱发的DNA损伤与苯并[a]芘单独作用相比有极显著性差异(P<0.01)。 结论 :Aroclor1254可显著地增强苯并[a]芘在HepG2细胞中诱导的DNA损伤 ,这种损伤的增强可能和Aro clor1254对Hep G2细胞CYP1A1的诱导有关。     

Calretinin、CEA标记在胸腹腔积液细胞学诊断中的应用

目的：探讨calretinin、CEA免疫细胞化学标记对浆膜腔积液中正常、反应性间皮细胞与转移性癌细胞的鉴别诊断价值。方法：59例胸腹腔积液标本，采用常规：HE染色、CEA及calretinin免疫细胞化学标记。最后诊断通过活检、随访等确立。结果：最后诊断转移癌17例、良性者37例、未确定5例。Calretinin对间皮细胞标记的阳性率为94．6％(35／37)[86.5％(32／37)，强阳性]，转移癌细胞23．5％(4／17)阳性[5．9％(1／17)强阳性]；CEA对转移癌细胞标记的阳性率为88．4％(15／17)[52．9％(9／17)强阳性]，良性间皮细胞43．2％(16／37)阳性[13．5％(5／17)强阳性]。17例转移癌中，11例calretinin、CEA两项标记支持转移癌诊断；良性组中，CEA标记有较多假阳性。结论：CEA的特异性相对较差，calretinin对间皮细胞标记的特异性、敏感性较高。结果判定时，强阳性结果较弱阳性结果有意义，calretinin结果较CEA更有价值。认真细致的形态学观察，辅以calretinin及CEA标记，可有效地避免假阳性诊断。     

人胚纤维母细胞体外诱导恶性转化过程中某些生物学标记的改变

经致癌物N-甲基-N′-硝基-亚硝基胍(MNNG)多次处理体外培养的人胚纤维母细胞诱发了恶性转化,其表现包括形态改变、转化灶形成、生长特性改变、寿命明显延长、染色体非整倍体明显增加和细胞内血卟啉衍生物(H.P.D)掺入量增高,后两种现象出现早且持续于整个观察过程,可能是人类细胞恶性转化过程中较早期出现的生物学标记。     

术前化疗对进展期胃癌细胞凋亡的影响

[目的]研究术前化疗对进展期胃癌细胞凋亡的影响。[方法]21例胃癌患者术前静脉滴注5氟尿嘧啶150mg/kg·d,术中取胃癌组织标本,应用3′OH末端标记法(TUNEL)检测细胞的凋亡率(AI),与非化疗组比较。[结果]术前应用5-Fu组总的TUNEL指数为(8.6±3.8)％,对照组总的标记指数为(5.4±2.6)％,差异有显著性(P<0.05);5-Fu诱导作用与细胞分化有关。5-     

应用核酸杂交技术检测宫颈组织中HPV16DNA序列

应用[α—~(32)P]—HPV16 DNA探针和Southern blo核酸杂交技术检测了154份宫颈活检组织标本。在低限制性条件和高限制性条件下;宫颈癌组织HPV16 DNA杂交的阳性率分别为50.86％(59/116)和37.07％(43/116),且鳞癌与腺癌之间无显著性差异(P>0.90);正常宫颈组织的阳性率则分别为5.56％(2/36)和0.00%(0/36)。宫颈癌组织HPV16 DNA杂交的阳性率均显著地高于正常宫颈组织(P<0.001)。另外,在2例宫颈间变组织中检出1例HPV16 DNA阳性杂交结果。上述给果提示:HPV16及其相关型感染与宫颈癌之间可能存在病因学联系。     

DNA氧化损伤生物标志物8-OH-dG的检测及其在医学中的应用

8-羟基-2'脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-dG)是活性氧自由基氧化损伤细胞核DNA或线粒体DNA后形成的产物.作为内源性及外源性因素对DNA氧化损伤作用的生物标志物,8-OH-dG是一个极有前途的指标.8-OH-dG的分离检测方法主要有高效液相色谱-电化学(HPLC-EC)、+32P后标记-薄层色谱(+32P Postlabel-TLC)、免疫化学分析、荧光后标记、[+3H]标记-HPLC、高效毛细管电泳(HPCE)及气相色谱-质谱(GC-MS).这些方法在抗衰老医学、肿瘤病因学、分子流行病学等领域有着广泛的应用前景.