低浓度N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍对HeLa细胞DNA聚合酶及拓扑异构酶Ⅱα mRNA表达水平的影响

利用定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法， 研究了低浓度甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对HeLa细胞DNA聚合酶(Polα,β,δ,ε)及拓扑异构酶Ⅱα(TopⅡα) mRNA表达水平的影响. 发现经0.2 μmol·L^-1 MNNG 处理2.5 h后，HeLa细胞Polβ mRNA水平在6-24 h内升高约1倍，而Polα,δ,ε及TopIIα mRNA水平则无明显改变. 提示Polβ mRNA水平改变可能参与MNNG诱发细胞遗传不稳定的发生.     

培养哺乳类细胞的药物代谢酶及其诱导(综述)

许多化学物要经过生物转化才能显现其遗传毒理作用。化学物的生物转化是一个复杂的多步骤过程,可分为二个相继的时相:第一相反应为通过插进或显露某些功能基因而修饰化学物的结构,这些反应包括氧化、还原、水解等;第二相反应为结合反应。在体内,许多组织都具有一定的生物转化能力,但肝脏为化学物代谢的最主要器官。在亚细胞水平,化学物的代谢定位于许多细胞器,但以内质网最为重要,后者含有丰富的     

大蒜素对甲基磺酸甲酯和环磷酰胺诱发果蝇伴性隐性致死的影响

用果蝇伴性隐性致死试验进行大蒜素的抗诱变性研究。大蒜素与甲基磺酸甲酯(MMS)同时喂饲果蝇,未能抑制MMS诱导的伴性隐性致死效应。而在先给MMS 24h后再给大蒜素则有抑制效应。大蒜素与环磷酰胺(Cy)同时给药有一定的抑制作用。提示大蒜素有一定抗诱变作用。     

ADPRT-MEDIATED DECREASE OF CELLULAR NAD CONTENT AND THE DETECTION OF CHEMICALLY INDUCED DNA DAMAGE DEVELOPMENT OF A NEW SHORT-TERM SCREENING TEST FOR MUTAGENS

It was found that the DNA-damaging agents N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG),methyl-methanesulphonate(MMS)and 4-nitroquinoline-N-oxide(4NQO)could stimulate ADP-ribosyl transferase(ADPRT)activity and reduce the cellular NAD content in a dose-dependent way.The reduction of NAD after DNA damage could be partially or completelyprevented by ADPRT inhibitors,3-aminobenzamide or nicotinamide,which showed noinfluence on reduction of NAD induced by metabolic blocking agents.Therefore,a simpleand specific method to detect DNA-damaging mutagens by measuring ADPRT-mediateddecrease of cellular NAD content was explored.Using β-naphthofiavone,a mixed functionoxygenase inducer,together with induced or uninduced human amnion FL cells,it was foundthat aflatoxin B_1,benzo(a)pyrene,2-acetylaminofluorene,9,10-dimethylanthracene andethylcarbamate could induce the ADPRT-mediated decrease of cellular NAD content,while4-acetylaminofluorene,anthracene,isopropyl-N-(3-chlorophenyl)-carbamate,β-propiolactone,γ-butyrolactone,cyclophosphamide and safrol could not.The results indicate that this isa cheap and specific method to detect DNA damage caused by chemical carcinogens/mutagenswith a spccificity approaching that of the unscheduled DNA synthesis assay.     

真核生物水稻的苯丙氨酸氨解酶基因在原核生物大肠杆菌BL21DE3中的表达

目的：研究真核生物水稻的苯丙氨氨氨解酶基因在原核生物大肠杆菌中表达及其规律，为酶替代疗法治疗苯丙酮尿症及某些肿瘤治疗奠定基础。方法：根据水稻苯丙氨酸氨解酶基因序列，在ＡＴＧ下游１３１－１１２碱基处设计引物：５’ＴＧＧＡＴＣＴＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＴ３’，对质粒ｐＵＣ１９－ｒＰＡＬ－１－ｃＤＮＡ（日本国立农业生物研究所Ｅｉ－ｉｃｈｉＭｉｎａｍｉ惠赠）中的ｒＰＡＬ－１－ｃＤＮＡ进行反向测序，根据ｃＤＮＡ测序结果及质粒ｐＥＴ－２８系列中阅读框架结构选定ｐＥＴ－２８ｃ作为载体，用ＥｃｏＲＩ酶将其从多克…     

甲基硝基亚硝基胍诱发的遗传不稳定细胞DNA聚合酶βmRNA？…

目的和方法：本曾报道，低浓度０．２μｍｏｌ／Ｌ烷化剂甲基硝基亚硝基胍（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｎ‘－ｎｉｔｒｏ－Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ，ＭＮＮＧ）可以诱导哺乳灰细胞遗传不稳定状态。为明确其发生机制，本文利用定量ＲＴ－ＰＣＲ方法，研究了该低浓芳，ＨｅＬａ细胞ｐｏｌ βｍＲＮＡ水平在６－２４ｈ内升高约１倍；而ｖｅｒｏ细胞ｐｌ βｍＲＮＡ水平在１２－３０ｈ内亦升高１倍左右。     

甲基硝基亚硝胍激活细胞表面受体及MAPK信号转导通路

目的 :应用本实验室建立的短寿ＤＮＡ损伤剂Ｎ -甲基 -Ｎ′-硝基 -Ｎ -亚硝基胍 (ＭＮＮＧ)引起非洲绿猴肾Ｖｅｒｏ细胞基因组ＤＮＡ不稳定的应激体系模型 ,以诱导细胞发生非定标性突变的同样条件观察细胞表面受体和细胞内丝裂原激活的蛋白激酶 (ＭＡＰＫ)的激活状况 ,以探索导致非定标性突变形成的细胞信号发源。方法 :常规培养的ｖｅｒｏ细胞以 0 2 μｍｏｌ/ＬＭＮＮＧ处理不同时间 ,以二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ)为ＭＮ ＮＧ的溶剂对照。采用间接免疫荧光法标记细胞表面表皮生长因子受体 (ＥＧＦＲ)、肿瘤坏死因子受体 (ＴＮ ＦＲ)以及白介…     

用双向凝胶电泳分析低浓度烷化剂N-甲基-N′-硝基-N-亚硝胍引起的人羊膜FL细胞蛋白质的表达差异

目的　为了研究哺乳类细胞受到低浓度烷化剂攻击后蛋白表达谱的变化。方法　用双向凝胶电泳结合相应的 2 DE分析软件比较烷化剂N 甲基 N′ 硝基 N 亚硝基胍 (MNNG)处理组和二甲基亚砜对照组的FL细胞的蛋白质组的表达差异。结果MNNG处理后的FL细胞中检测到 10个新出现的蛋白点 ,同时有 5个蛋白点在MNNG处理后消失 ;有30个点在表达量上有显著变化 ,其中 16个点在MNNG处理后表达升高 ,另 14个点则表达量降低。结论　在低浓度烷化剂攻击的FL细胞中有一系列蛋白质表达水平的改变 ,提示这些发生改变的蛋白质可能参与了哺乳类细胞非定标性突变的发生。     

(ADPR)_n与真核细胞的DNA修复

多聚ADP-核糖[(ADPR)_n]是六十年代新发现的普遍存在于真核细胞核内的一类核酸大分子。它由一种特异的核内酶——多聚ADP-核糖聚合酶或称ADP-核糖基转移酶(AD PRT)以尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)为底物催化生成。近二十年来,各国学者对(ADPR)_n的结构,功能进行了广