红色红曲菌组蛋白去乙酰化酶MrSir2的原核表达及活性分析

根据基因组序列信息,利用cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)得到了红色红曲菌中组蛋白去乙酰化酶mrsir2基因的完整cDNA序列,其编码序列(coding sequence,CDS)为1539 bp,编码512个氨基酸,含有一个SIR2蛋白保守结构域。根据大肠杆菌的密码子的偏好性对mrsir2序列进行优化,优化后的序列与p ET-28b载体连接后转入宿主菌E.coli BL21中进行IPTG诱导表达,并优化表达条件。实验结果表明:在16℃条件下用终浓度为0.25 mM的IPTG诱导培养16 h后,目的蛋白Mr Sir2可溶性表达效果良好。Ni2+柱亲和层析纯化后的Mr Sir2重组蛋白在SDS-PAGE上显示为一条约75 ku大小的条带,蛋白定量浓度达1.97 mg/mL,经Western blot鉴定为目的蛋白,测定酶活为78.5(OD/min/mg),780μM的二氢香豆素(dihydrocoumarin,DHC)对Mr Sir2蛋白的酶活抑制率为47%。Mr Sir2蛋白的可溶性表达为全面了解其酶学特征提供了材料,也为体外分析蛋白相互作用奠定了基础。     

食品发酵实验教学改革的思考

食品发酵是食品科学专业中的核心课程之一,因此国内高校中食品科学相关专业需要开设相关实验课程为食品工业培养人才队伍。然而,食品发酵实验课程本身综合性较强,并且教学时间有限,若以传统的教学方式进行教学,难以获得良好的教学效果。笔者根据自身的教学实践,从教学模式、教学内容、教学方法与考评模式四个方面进行了教学改革。通过这些教学改革实践,学生的学习热情与学习效率得到显著提高。     

红色红曲菌M805自溶过程的初步研究

本实验以突变的红色红曲菌M805为出发菌株,以亲本菌株M-7为对照,初步研究了其在土豆液态发酵过程中不同生长阶段生物量变化、碳源消耗、蛋白酶活力以及DNA完整性等与自溶相关的生理生化特征.结果表明,M805在生长进程、碳源同化以及蛋白酶分泌的能力方面与亲本菌株M-7存在明显的不同.在10d的测定中,M805未见规律的生长曲线进程,而亲本菌株M-7在旺盛生长期、稳定期和衰亡期的特征明显;在整个的发酵过程中,突变株805产生蛋白酶的量要明显高于亲本M-7,其中M805第7d蛋白酶活最大,达7.512μg/mL,而其亲本第6d达最高,为5.25μg/mL.这些结果为进一步阐明红曲菌自溶特征及其可能的发生机制奠定了基础.     

辐照对红曲米中桔霉素及Monacolin K含量的影响

利用1~20 kGy 6种不同~(60)Co辐照剂量处理红曲米及其提取液,采用高效液相色谱法(HPLC)检测样品中桔霉素(Citrinin)和Monacolin K含量,比较不同辐照剂量下固体红曲米及其提取物的差异。试验结果表明:经辐照强度为20 kGy辐照处理后,固体红曲米中桔霉素的含量减少了43%,Monacolin K及其类似物总含量减少了5%。在辐照强度超过5 kGy时红曲米提取液中桔霉素全部降解;辐照强度超过10 kGy提取液中的Monacolin K及其类似物完全降解。在辐照条件下Monacolin K的稳定性好于桔霉素,因此辐照处理可以在Monacolin K较少降解的条件下有效除去红曲米中的桔霉素。     

以合成桔霉素的关键基因为靶标的PCR检测方法与UPLC法检测红曲中桔霉素含量的一致性分析

为了解菌株中桔霉素生物合成基因与其发酵产品红曲中桔霉素含量的相关性,本实验以25株不同来源的红曲菌为研究对象,以桔霉素合成的关键基因为标靶,设计6对引物进行PCR扩增;同时采用传统生产工艺制备红曲,采用免疫亲和柱纯化与UPLC结合的方法测定红曲中桔霉素的含量。对比PCR扩增结果与UPLC检测结果表明,PCR方法得到的结果与UPLC检测结果具有高度一致性,即PCR扩增桔霉素合成关键基因为阳性的菌株,其发酵制备的红曲中桔霉素含量超过了QB/T 2847-2007功能性红曲米(粉)的桔霉素限量标准50 μg/kg,而PCR结果中桔霉素合成关键基因为阴性的,桔霉素含量均低于仪器检测限15.92 μg/kg,远低于QB/T 2847-2007功能性红曲米(粉)的桔霉素限量标准。结果表明,本研究采用的PCR方法可以作为判断传统工艺条件下生产的红曲产品中桔霉素是否超标的依据,也为了解菌株分泌桔霉素的能力提供了基本信息。     

红曲产品相关标准的分析研究

红曲是将红曲菌（Monascus spp.）接种于大米等淀粉类原料并经发酵的传统发酵产品。我国是红曲的发源国，也是全球最大的生产国。红曲产品按其用途可分为色曲、功能曲和酿造曲等，在食品、药品和化妆品中广泛应用，经济价值较高。标准具有确保产品工艺和质量的属性，是保障消费和贸易安全的文件。我国自1985年实施首个红曲标准以来，目前已发布了32个相关标准，对促进红曲产业发展起到了重要作用。该文在梳理了中国红曲标准发展历程的基础上，重点解析了色曲、功能曲和酿造曲的产品标准以及红曲特有评价参数的方法标准，并分析了其发展趋势，可为我国红曲相关标准的修制订工作提供借鉴和参考。     

ISSR标记技术辅助形态学的红曲菌株分类鉴定

以市售红曲产品中分离的17株红曲菌株和8株标准菌株为主要材料,根据它们的菌落形态和显微形态特征进行分类,25株菌株归为6类。同时,运用内部简单重复序列（ISSR）标记分类法进行聚类分析,在相似性水平为0.9时,25株菌株聚为5类。综合形态学分类鉴定法和ISSR标记分类法结果,25株红曲菌株被聚为3大类,分别是红色红曲菌（Monascus ruber）、紫色红曲菌（Monascus purpureus）和血红红曲菌（Monascus sanguineus）。结果表明,传统形态学分类方法结合ISSR标记分类法能为红曲菌株的分类鉴定提供综合参考信息。也可为了解市售红曲相关发酵产品生产菌株的分类与特征、进一步发掘和保护红曲菌株资源提供参考。     

细菌右旋糖酐蔗糖酶研究进展

从右旋糖苷蔗糖酶的分类、酶学性质、分离纯化、基因结构及蛋白质组成等方面综述了右旋糖苷蔗糖酶的研究动态.