| 红色红曲菌组蛋白去乙酰化酶MrSir2的原核表达及活性分析 |
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| 引用本文： | 郭美月,张静,颜青青,邵彦春.红色红曲菌组蛋白去乙酰化酶MrSir2的原核表达及活性分析[J].现代食品科技,2020,36(5):163-169. |
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| 作者姓名： | 郭美月 张静 颜青青 邵彦春 |
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| 作者单位： | 华中农业大学食品科技学院,湖北武汉430070,华中农业大学食品科技学院,湖北武汉430070,华中农业大学食品科技学院,湖北武汉430070,华中农业大学食品科技学院,湖北武汉430070 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目（31671835）；中央高校基本科研业务费专项资金资助项目（2662018PY090） |
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| 摘 要： | 根据基因组序列信息,利用cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)得到了红色红曲菌中组蛋白去乙酰化酶mrsir2基因的完整cDNA序列,其编码序列(coding sequence,CDS)为1539 bp,编码512个氨基酸,含有一个SIR2蛋白保守结构域。根据大肠杆菌的密码子的偏好性对mrsir2序列进行优化,优化后的序列与p ET-28b载体连接后转入宿主菌E.coli BL21中进行IPTG诱导表达,并优化表达条件。实验结果表明:在16℃条件下用终浓度为0.25 mM的IPTG诱导培养16 h后,目的蛋白Mr Sir2可溶性表达效果良好。Ni2+柱亲和层析纯化后的Mr Sir2重组蛋白在SDS-PAGE上显示为一条约75 ku大小的条带,蛋白定量浓度达1.97 mg/mL,经Western blot鉴定为目的蛋白,测定酶活为78.5(OD/min/mg),780μM的二氢香豆素(dihydrocoumarin,DHC)对Mr Sir2蛋白的酶活抑制率为47%。Mr Sir2蛋白的可溶性表达为全面了解其酶学特征提供了材料,也为体外分析蛋白相互作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 红色红曲菌 组蛋白去乙酰化酶MrSir2 原核表达 酶活分析 |
| 收稿时间： | 2019/10/1 0:00:00 |
Prokaryotic Expression and Enzyme Activity Analysis of Histone Deacetylase MrSir2 from Monascus ruber |
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| GUO Mei-yue,ZHANG Jing,YAN Qing-qing,SHAO Yan-chun.Prokaryotic Expression and Enzyme Activity Analysis of Histone Deacetylase MrSir2 from Monascus ruber[J].Modern Food Science & Technology,2020,36(5):163-169. |
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| Authors: | GUO Mei-yue ZHANG Jing YAN Qing-qing SHAO Yan-chun |
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| Affiliation: | (College of Food Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Monascus ruber histone deacetylase MrSir2 prokaryotic expression enzyme activity analysis |
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