麦胚清蛋白抗氧化肽的筛选及对细胞氧化损伤的保护作用

本研究运用超滤与凝胶层析等分离纯化技术逐级分离麦胚清蛋白中性蛋白酶酶解产物,以氧化自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity,ORAC）与2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid),ABTS）阳离子自由基清除率为评价指标,筛选具有较高抗氧化活性的产物组分,并以该组分为研究对象,利用液相色谱-串联质谱结合PeptideRanker数据库活性预测技术筛选出具有高抗氧化活性的小肽,并通过高糖诱导血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）及H2O2诱导HepG2细胞与VSMCs建立细胞氧化应激模型,评价小肽对细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,经超滤与层析筛选出分子质量较小的V组分抗氧化活性最高,液相色谱-串联质谱鉴定出该组分主要由20 个小肽组成,PeptideRanker预测与抗氧化实验验证发现肽序列LNYPPY（765.3 Da）抗氧化活性最高（ORAC 3.01 μmol TE/μmol）、ABTS阳离子自由基清除率95.58%）。肽序列LNYPPY对H2O2诱导的HepG2细胞和VSMCs氧化损伤具有很好的保护作用,但对高糖诱导的VSMCs异常增殖以及活性氧水平上升无明显影响。综上,肽LNYPPY具有良好的体外抗氧化活性,且对H2O2诱导的细胞氧化损伤具有保护作用,研究可为麦胚清蛋白的开发利用提供重要的理论参考。     

植物多酚干预肥胖发生作用机制的研究进展

肥胖及其并发症严重危害公众身体健康,且肥胖发病率逐年上升,给社会和个人带来巨大的经济和心理负担。因此,肥胖的预防及治疗在学术界已成为亟待解决的重要问题。植物多酚是植物体内种类最多的一类次生代谢产物,广泛存在于水果、蔬菜、中草药以及植物源食品中,且多酚被报道具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒和抗癌等多种生物活性。此外,大量研究表明植物多酚具有良好的预防或治疗肥胖及其并发症的效果。本文从调节机体脂质代谢,影响脂肪细胞的增殖、分化与凋亡,刺激机体产热、加速能量消耗,抗炎和促进益生菌增长以调节肠道菌群等方面系统介绍了植物多酚的减肥降脂作用及其相关机理的研究进展,以期为植物多酚的开发与推广应用提供有益参考。     

新型麦胚活性肽对脂多糖诱导RAW264.7细胞的抗炎作用

研究从小麦胚芽蛋白中筛选出具有抗炎作用的活性肽。采用碱溶酸沉法从小麦胚芽中提取麦胚蛋白,采用体外模拟胃肠道消化法,利用胃蛋白酶、胰蛋白酶和 α-糜蛋白酶对麦胚蛋白进行酶解得到酶解产物;采用超滤膜进行分离,得到不同分子量的活性组分：Ⅰ（>3 Ku）、Ⅱ（1～3 Ku）和Ⅲ（<1 Ku）。通过建立脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的RAW 264.7细胞炎症模型筛选出抗炎活性最强的组分为Ⅲ（<1 Ku）。进一步利用液相色谱-串联质谱法鉴定出Ⅲ组分含14条多肽,结合PeptideRanker数据库预测结果,最终筛选出P1（APEPEPAF）、P2（MDTSAPSPF）、P3（IDIPNGR）和P4（VDPAVPPK）四条活性多肽,其中P1可显著抑制LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞NO及IL-6、TNF-α和IL-1β的分泌,促进IL-10的分泌。     

麦胚源活性肽对H2O2诱导的成骨细胞-破骨细胞共育体系中细胞氧化损伤的保护作用

目的：为促进麦胚的高值化利用,建立H2O2诱导的成骨细胞（osteoblast,OB）-破骨细胞（osteoclast,OC）共育体系氧化应激模型,探究麦胚源活性肽ADWGGPLPH对OB和OC活性的影响。方法：利用流式细胞术、噻唑蓝（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide,MTT）增殖实验、异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染等方法,明确麦胚源活性肽对氧化应激环境中OB增殖和凋亡的作用。利用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活力检测、酶联免疫吸附测定以及抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色等方法研究麦胚源活性肽对氧化应激共育体系中OB和OC分化活性的影响。结果：麦胚源活性肽能够有效抑制氧化应激共育体系中OB内活性氧的增加,并通过抑制丙二醛生成,增强谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活力,提高OB免受自由基攻击以及清除自由基的能力。麦胚源活性肽可显著抑制氧化应激共育体系中OB凋亡（FITC/PI双染结果显示OB凋亡率由12.4%下调至5.3%,OB细胞活力由60.4%提高至92.8%（P＜0.01））,改善了OB增殖水平。此外,麦胚源活性肽对OB早期分化活性指标ALP活力、蛋白I型胶原以及晚期分化活性指标骨钙素水平的下降具有良好改善作用,OB矿化率从21.3%提高至84.3%（P＜0.01）,从而使OB发挥良好的分化活性和矿化功能。TRAP染色结果显示麦胚源活性肽也能有效抑制氧化应激造成的OC过度分化（OC相对阳性面积从376.4%减小至128.1%（P＜0.01））。结论：麦胚源活性肽对H2O2诱导的OB-OC共育体系中细胞氧化损伤具有保护作用,从而维持良好的细胞稳态,本实验可为麦胚蛋白的开发利用提供一定的理论参考。     

樱桃花色苷对肥胖小鼠的降糖作用

目的:探讨樱桃花色苷(SWCN)的降糖活性,为樱桃高价值深加工与开发提供理论依据。方法:用高脂喂养雄性C57BL/6J小鼠建立肥胖小鼠模型,测定小鼠血清中葡萄糖、胰岛素含量,采用口服葡萄糖耐量实验(OGTT)和胰岛素耐量实验(ITT),评价膳食SWCN对肥胖引起的葡萄糖不耐受和胰岛素抵抗的改善作用。用实时荧光定量PCR检测SWCN对肝脏中糖代谢相关基因的差异表达水平的影响。结果:膳食SWCN能够减缓肥胖的发生,降低肥胖小鼠的血糖、胰岛素水平,减轻胰岛素抵抗和葡萄糖不耐受性。实时荧光定量PCR实验结果表明,膳食SWCN能够提高肥胖小鼠肝脏胰岛素受体底物2(IRS2)的表达水平,同时下调糖异生途径的关键酶磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6PC)基因的表达水平。结论:膳食樱桃花色苷能够激活肝脏中的胰岛素信号通路,抑制糖异生途径,从而降低肥胖小鼠的空腹血糖及胰岛素含量水平,增强糖耐量和胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗状态。