钾对烟草根际氮细菌、氮古菌群落及氮代谢的影响

为提高烟草栽培品质,采用高通量测序技术和分光光度法探讨了不同施钾水平对根际氮细菌、氮古菌和氮代谢的影响。结果表明:旺长期,烟草根际反硝化作用菌和硝酸还原菌与施钾水平呈负相关,且当N:K₂O=1:2.1时,氮素有效性较高,相比对照提高了20.9%,利于烟草生长。晚成熟的上部叶总氮、烟碱含量升高,糖含量降低,烟叶质量受到影响,但在N:K₂O=1:3.5~4.2时总氮含量显著降低,此时根际脲酶活性同样显著降低。揭示出施钾水平不仅会直接影响烟草根际氮细菌、氮古菌的群落结构,还会影响土壤氮素有效性、土壤酶活,进而影响氮营养的供应和烟草品质。建议前期适量施肥,并在打顶后追施钾肥,改变根际钾环境,提高烟草品质。      

麦胚清蛋白抗氧化肽的筛选及对细胞氧化损伤的保护作用

本研究运用超滤与凝胶层析等分离纯化技术逐级分离麦胚清蛋白中性蛋白酶酶解产物,以氧化自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity,ORAC）与2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid),ABTS）阳离子自由基清除率为评价指标,筛选具有较高抗氧化活性的产物组分,并以该组分为研究对象,利用液相色谱-串联质谱结合PeptideRanker数据库活性预测技术筛选出具有高抗氧化活性的小肽,并通过高糖诱导血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）及H2O2诱导HepG2细胞与VSMCs建立细胞氧化应激模型,评价小肽对细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,经超滤与层析筛选出分子质量较小的V组分抗氧化活性最高,液相色谱-串联质谱鉴定出该组分主要由20 个小肽组成,PeptideRanker预测与抗氧化实验验证发现肽序列LNYPPY（765.3 Da）抗氧化活性最高（ORAC 3.01 μmol TE/μmol）、ABTS阳离子自由基清除率95.58%）。肽序列LNYPPY对H2O2诱导的HepG2细胞和VSMCs氧化损伤具有很好的保护作用,但对高糖诱导的VSMCs异常增殖以及活性氧水平上升无明显影响。综上,肽LNYPPY具有良好的体外抗氧化活性,且对H2O2诱导的细胞氧化损伤具有保护作用,研究可为麦胚清蛋白的开发利用提供重要的理论参考。     

麦胚源活性肽对H2O2诱导的成骨细胞-破骨细胞共育体系中细胞氧化损伤的保护作用

目的：为促进麦胚的高值化利用,建立H2O2诱导的成骨细胞（osteoblast,OB）-破骨细胞（osteoclast,OC）共育体系氧化应激模型,探究麦胚源活性肽ADWGGPLPH对OB和OC活性的影响。方法：利用流式细胞术、噻唑蓝（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide,MTT）增殖实验、异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染等方法,明确麦胚源活性肽对氧化应激环境中OB增殖和凋亡的作用。利用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活力检测、酶联免疫吸附测定以及抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色等方法研究麦胚源活性肽对氧化应激共育体系中OB和OC分化活性的影响。结果：麦胚源活性肽能够有效抑制氧化应激共育体系中OB内活性氧的增加,并通过抑制丙二醛生成,增强谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活力,提高OB免受自由基攻击以及清除自由基的能力。麦胚源活性肽可显著抑制氧化应激共育体系中OB凋亡（FITC/PI双染结果显示OB凋亡率由12.4%下调至5.3%,OB细胞活力由60.4%提高至92.8%（P＜0.01））,改善了OB增殖水平。此外,麦胚源活性肽对OB早期分化活性指标ALP活力、蛋白I型胶原以及晚期分化活性指标骨钙素水平的下降具有良好改善作用,OB矿化率从21.3%提高至84.3%（P＜0.01）,从而使OB发挥良好的分化活性和矿化功能。TRAP染色结果显示麦胚源活性肽也能有效抑制氧化应激造成的OC过度分化（OC相对阳性面积从376.4%减小至128.1%（P＜0.01））。结论：麦胚源活性肽对H2O2诱导的OB-OC共育体系中细胞氧化损伤具有保护作用,从而维持良好的细胞稳态,本实验可为麦胚蛋白的开发利用提供一定的理论参考。     

辣木叶多糖的分离纯化及其体外降糖活性研究

目的研究辣木叶多糖的制备、单糖组成以及体外降糖活性。方法采用水提醇沉、Sevage法、大孔树脂-阴阳离子交换树脂联用技术得到较高纯度辣木叶粗多糖,再进一步通过二乙氨基乙基纤维素和葡聚糖凝胶柱层析分离得到2个主要多糖组分(MOs-2-a、MOs-2-b),并通过水解衍生化对其单糖组成进行分析。此外,采用HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型,以细胞葡萄糖消耗量为指标,考察辣木叶多糖的降糖作用。结果本文采用的制备工艺可以得到较高纯度的辣木叶粗多糖(纯度为73.10%),辣木叶多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖及半乳糖组成,其中各单糖摩尔比为0.49:3.65:0.63:1.27。与模型组相比,辣木叶多糖组分MOs-2-a、MOs-2-b均能显著增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量(P0.05)。结论辣木叶多糖MOs-2-a、MOs-2-b具有良好的降糖效果,本文可以为辣木叶多糖作为功能食品发展的提供科学依据。