绿豆胰蛋白酶抑制剂┐猪胰蛋白酶复合物的四方晶体结构

本文报道了绿豆胰蛋白酶抑制剂－猪胰蛋白酶（１∶２）复合物的四方晶体的结构测定。晶体属于Ｉ４２２空间群,衍射分辨率为０．２５ｎｍ,共确定了绿豆抑制剂５６个残基的空间位置。与已报道的三方晶体结构相比,其中的抑制剂分子的结构基本相同,并且抑制剂－酶三元复合物在四方晶体中也处于堆积无序状态,即复合物按两种取向进行堆积：Ｔａ∶ＭａＭｂ∶Ｔｂ和Ｔｂ∶ＭｂＭａ∶Ｔａ（Ｔａ,Ｔｂ为胰蛋白酶,Ｍａ为抑制剂结合环Ⅰ,Ｍｂ为抑制剂结合环Ⅱ）。但四方晶体结构比三方晶体结构多测定了一个抑制剂残基Ｐｒｏ１１的位置,同时,四方晶体中的抑制剂不存在膺β－折叠片层结构,其构象与三方晶体中的抑制剂相比有所变化。分析表明抑制剂的两个刚性的结构域之间的连接肽具有一定的柔性,并因此形成不同的晶型。此外,绿豆抑制剂与其他Ｂｏｗｍａｎ－Ｂｉｒｋ抑制剂相比,分子的两个双股的反平行β－折叠片层和抑制活性位点所在的结合环的结构具有很高的保守性     

国产聚酰胺薄膜在生化分析中的应用

聚酰胺薄膜是利用聚酰胺作为涂料固定在载片(涤纶片)上,制成质地均匀含有紧密多孔的薄膜。它是一种新的薄层层析材料。由于它具有分辨力强、灵敏度高、分析速度快、操作方便等优点,今天已广泛应用于各种化合物的分析。国内过去聚酰胺薄膜都由各实验室自己制备,由于受条件限制,质量不能保证,浪费很大,因而无法大量推广。最近,上海生化所与浙江黄岩化学实验厂协作,试制了聚酰胺薄膜,质量较好,能成批生产,从而为此种薄膜在各分析领域中的广泛应用提供了有利条件。前文已报道了聚酰胺薄膜的层析原理及其在蛋白质化学分析中的应用。本文介绍用上述国产聚酰胺薄膜对生化中常用的氨基酸、核     

慈菇中两种结晶的多功能蛋白酶抑制剂的研究

由于蛋白酶抑制剂在生理、生化、病理、药理上都占有很重要的地位,特别是具有多功能的蛋白酶抑制剂被广泛应用于临床,近年来愈来愈受到各方面的重视。本文报道了从慈菇中提取两种结晶的多功能蛋白酶抑制剂,它们都具有两个活力相等的活性中心,这与其他已知的同类型植物蛋白酶抑制剂不同,有它的特殊性。(1)_慈菇蛋白酶抑制剂A、B,除能抑制胰蛋白酶外,还能抑制胰凝乳蛋白酶及猪颌下腺的舒缓激肽释放酶。用酰胺、酯及蛋白等不同底物分别求出抑制剂A、B对胰蛋白酶的当量抑制比值及对胰凝乳蛋白酶的半抑制比值。两者对胰蛋白酶的抑制常数在10~(-9)～10~(-10)的范围内,抑制剂B对胰蛋白酶较之A有更大的结合力,但抑制剂A对胰凝乳蛋白酶及舒缓激肽释放酶较之B却有更明显的抑制活力。(2)_用葡聚糖凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳分别测定抑制剂A、B的分子量均在17000左右。从抑制剂A、B对胰蛋白酶的当量抑制比值求得分子量为8500。这说明每一抑制剂分子中具有两个活力相等的活性中心。(3)_测定了抑制剂A、B的氨基酸组成,二者除碱性氮基酸及天冬氨酸含量略有差异外其余皆相同,各含有两对二硫键,非极性氨基酸含量较高约占60%左右。由氨基酸组成求得最小分子量约16500。(4)_用二硝基氟苯,二甲基氨基萘磺酰氯及氨呔酶M测定抑制剂A、B的N末端,都证实是天冬氨酸。     

牛羊猪結晶胰蛋白酶一些性质的比較研究

在前文中我們曾报导,从猪胰中提取了两种結晶蛋白酶A、B。經活力鉴定和在CM纤維素柱上层析分离后証实,二者均是胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的混合晶体,仅相对含量有所不同。值得指出的是,經CM纤維素提純后的猪胰凝乳蛋白酶,其水解酯的活力     

綠豆胰蛋白酶抑制剂的研究——Ⅵ.抑制剂、胰蛋白酶及其两种絡合物的免疫学特性

酶具有明显的专一活力。有的已被提純或結晶,有的一級結构已經闡明,因而在免疫化学中利用酶作为抗原,不仅有利于对抗原,抗体間作用机制深入了解,同时也为酶活性与抗原免疫活性間的关系以及酶,抗酶,底物三元体系相互作用的研究提供了新的課題。     

猪羊胰脏中若干蛋白酶的提取、结晶与鉴定

自1935年以来Kunitz,Northrop,Laskowski,Anson,Folk等人陆續从牛胰脏中提取各种蛋白水解酶:胰凝乳蛋白酶A、B,胰蛋白酶,羧肽酶A、B及它們相应的酶原,并且对其大多数都获得結晶。能否用类似的簡便方法自其他哺乳类动物的胰脏中提取和結晶这些蛋白水解酶,不仅在比較生化方面是一很有兴趣的課題,并在酶制剂的生产上具     

丝氨酸蛋白酶抑制剂的结构与功能

本文介绍了三种丝氨酸蛋白酶抑制剂。绿豆胰蛋白酶抑制剂与慈菇蛋白酶抑制剂均为双头抑制剂,分别由72与141个氨基酸残基所组成。绿豆抑制剂能被胃蛋白酶降解为活性中心分别为Lys及Arg的两个活性碎片,其抑制剂本身及Lys碎片的晶体结构已阐明。慈菇抑制剂有A、B两个主要组份,两者对不同蛋白酶有不同抑制活性,是一种新类型的抑制剂。天花粉胰蛋白酶抑制剂是迄今已知的最小多肽抑制剂,共含27个氨基酸残基,用2D-NMR研究了它的构象。讨论了上述三种抑制剂的异同。     

猪胰脏中胰岛素拮抗肽的分离纯化及其性质的初步研究

从猪胰脏的酸醇提取液中纯化了一个新的活性多肽——胰岛素拮抗肽,它在整体和细胞水平上对胰岛素都有明显的拮抗作用。猪胰脏的酸醇提取液经CM-52、BioGel P-6、DEAE-52及RP-HPLC纯化后,可得到纯的胰岛素拮抗肽。它能剂量相关地抑制胰岛素在离体大鼠脂肪细胞中的促脂合成活性,抑制50％胰岛素活性时所需的胰岛素拮抗肽为2.0×10~(-10)mol/L与被拮抗的胰岛素剂量在同一水平上。该肽含有较多的碱性氨基酸,分子量的3 000,其N-末端是封闭的。胰岛素拮抗肽的上述理化特征及其对胰岛素的拮抗活性均不同于目前已知的胰脏活性多肽。它对脂肪细胞中胰岛素的拮抗作用可能具有重要的生理意义。     

蝮蛇(Agkistrodon halys Palls)蛇毒类凝血酶的研究——Ⅱ.类凝血酶对纤维蛋白原的作用方式

许多蝮亚科蛇毒中含有类凝血酶。它们和蛇伤引起的毒理作用有密切关系。由于它对纤维蛋白原的作用特点,在临床上已被用作抗凝剂治疗血管阻塞性疾病。此外,它也被用来研究纤维蛋白的聚合机制。