綠豆中两種小分子胰蛋白酶抑制剂的提取与结晶

胰蛋白酶抑制剂的分布很广,存在于各种莢果植物种子中,如大豆、龙爪豆、豌豆及藊豆等,蔬菜中的馬鈴薯、甘薯以及动物中的胰脏、初生乳汁、血清、鸡蛋白、胎盘和尿等。上述来源的抑制剂不少已提純或获得結晶。它和胰蛋白酶結合后彼此都丧失活性,犹似抗原对抗体的結合,是属于一种蛋白貭相互作用的     

大鵟消化系统蛋白水解酶种类和活性分析

采用蛋白水解酶复性电泳(G-PAGE)技术对大(Buteo hemilasius)消化系统5种器官腺胃、胰脏、十二指肠、空肠、大肠蛋白水解酶的种类和性质进行了研究,以期为研究野生鸟类的分类地位、系统演化提供基础资料,结果表明,①受pH值的影响和制约,大消化系统蛋白水解酶的活性在碱性、中性与酸性条件下递减;②在酸性条件下,45 ku蛋白水解酶存在于除腺胃外的各受检器官;③pH 7.0时,腺胃、胰脏酶谱相似,均含有683、5、342、0 ku的蛋白水解酶;④pH 8.0时,空肠和十二指肠的蛋白水解酶种类最多、活性最强,分别检出8种和7种蛋白水解酶。总之,pH值对蛋白水解酶的活性有明显的制约作用,46、41ku蛋白水解酶随着pH值的增高而失去活性,为酸性蛋白水解酶,250、2064、5 ku蛋白水解酶随着pH值的增高活性逐渐增强,为碱性蛋白水解酶。十二指肠和空肠的蛋白水解酶种类多、活性强,可能为蛋白质消化的主要场所。     

結晶胰島素的全合成

結晶的牛胰島素已經合成,它的生物活力,結晶形状都与天然胰島素的相同,因而标志着世界上第一个蛋白质的人工合成。在人工合成的A及B鏈分別都能和其对应的天然鏈組合成功并都得到半合成結晶胰島素的基础上,人工合成的A及B鏈組合所得的具有1.25—2.5%胰島素活力的氧化产物,經过两次酸性仲丁醇抽提,比活力上升到天然胰島素50%左右,在含有丙酮及鋅离子的pH6.2的檸檬酸緩冲液中、即得人工合成的牛胰島素結晶。除了用小白鼠惊厥法和兎血糖降低法所测定的生物活力以及其結晶形状均与天然胰島素完全一致以外,人工合成的結晶牛胰島素的电泳,层析行为都与天然胰島素相同,酶水解物的电泳层析双向图譜也与天然牛胰島素的一致。人工合成的結晶牛胰島素能和抗天然牛胰島素血清产生沉淀反应,其在琼脂双扩散皿上所产生的沉淀条紋与天然結晶牛胰島素和該抗血清所产生的条紋汇合。它与豚鼠抗天然胰島素血清中和后,生物活力即丧失,这說明在免疫化学性质上也和天然胰島素相同。     

牛羊猪結晶胰蛋白酶一些性质的比較研究

在前文中我們曾报导,从猪胰中提取了两种結晶蛋白酶A、B。經活力鉴定和在CM纤維素柱上层析分离后証实,二者均是胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的混合晶体,仅相对含量有所不同。值得指出的是,經CM纤維素提純后的猪胰凝乳蛋白酶,其水解酯的活力     

C6大白鼠神经胶质瘤细胞HSP68的修饰和降解分析

本文用蛋白水解酶复性电泳、放射自显影和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹等方法分析Ｃ６细胞ＨＳＰ６８在体内、外修饰和降解表明：（１）Ｃ６细胞的中性蛋白水解酶几乎不参与ＨＳＰ６８降解;（２）ＨＳＰ６８降解涉及到胞液ＡＴＰ结合蛋白水解酶和溶酶体酸性蛋白水解酶,其中,ＡＴＰ结合蛋白水解酶在起动ＨＳＰ６８降解和把ＨＳＰ６８降解成多肽大片段方面起重要作用,溶酶体酸性蛋白水解酶主要参与把多肽大片段彻底降解;（３）热休克诱导Ｈ     

组蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用检测

目的:构建组蛋白 H2A、H2B、H3、H4的酵母双杂交诱饵载体,检测其在酵母细胞中的表达和自激活活性,为应用酵母双杂交系统筛选与组蛋白相互作用的蛋白奠定基础.方法:扩增 H2A、H2B、H3、H4蛋白基编码区 cDNA序列,克隆至酵母表达载体 pGBK-T7中,再将其转化至酵母细胞 AH109中,提取酵母总蛋白,检测各种组蛋白的表达,并检测表达的组蛋白在酵母细胞中对报告基有无自激活作用.结果:将 H2A、H2B、H3、H4基的 cDNA 克隆至酵母表达载体 pGBK-T7中,其中组蛋白 H4得到正确表达,且对报告基 LacZ、HIS3、Ade 无激活作用.结论:可以利用酵母双杂交系统筛选与 H4相互作用的蛋白质.     

羧肽酶B活力及稳定性研究

研究在不同pH,温度条件下,从猪胰脏中提取的羧肽酶B的稳定性,其活力最佳pH范围在7.5-8.5,最佳温度为55℃。     

短乳杆菌DM9218肌苷水解酶基因的异源表达及活性检测

目的探讨短乳杆菌DM9218肌苷水解酶基因A0008的异源表达及其对肌苷的分解活性检测。方法克隆来源于短乳杆菌DM9218基因组的肌苷水解酶基因A0008,构建原核表达载体,转入大肠埃希菌BL21诱导重组蛋白表达并纯化,进行体外酶活检测。结果成功构建了肌苷水解酶A0008-pET28a原核表达载体,表达并纯化出重组蛋白,酶活结果显示该重组蛋白具有水解肌苷的能力。结论短乳杆菌DM9218基因A0008可能编码肌苷水解酶并参与DM9218对肌苷的分解。     

不同來源的原肌球朊化學結構的比較研究 Ⅰ.氨基酸組成與氨基末端結構

在前此的工作中,我們研究了各種不同動物中横紋肌、平滑肌或心肌原肌球朊的抽提、淨化、結晶及與核酸絡合的情况;並比較了幾種原肌球朊的若干物理化學性質。這些工作顯示了從不同種屬動物或不同功能結構的肌肉製備的原肌球朊,在分子大小、溶解度、結晶形狀與核酸絡合的量、聚合能力等多種物理化學性質上,有着細微或顯著的差異。雖然目前還沒找到原肌球朊有任何酶的活力,以與其他肌肉蛋白區分,但就可逆聚合、結晶能力、高度不對稱性、對有機溶劑的穩定性等性質上看,作為一類的蛋白質,原肌球朊是有其特徵的。為了更進一步比較它們在結構上微觀的異同,並深入了解     

正常与脑缺血大鼠的脑皮质蛋白质差异分析鉴定

Wistar大鼠随机分为正常组和模型组,采用改进的线栓法制备模型,在规定的时间点快速断头取脑,分离脑皮质组织,提取蛋白质后双向电泳展示,以ImageMaster 2D Elite v301软件对2_DE图谱进行差异表达分析,目标蛋白点用基质辅助激光解析电离质谱测定肽质量指纹图进行鉴定。线粒体应激70蛋白前体、血小板活化因子乙酰基水解酶Ibβ亚单位、ADP核糖基化因子蛋白3、电压依赖性阴离子选择通道蛋白1、泛素C末端水解酶同工酶L1、突触结合蛋白等11个蛋白在模型6h组表达上调,谷胱甘肽S-转移酶omega 1、 谷胱甘肽S-转移酶P、Cu-Zn超氧化物歧化酶、 ATP合酶D链、G蛋白β亚单位1、微管蛋白β链15、苹果酸脱氢酶等15个蛋白在模型6h组表达上调。胆绿素还原酶B、细胞因子A4前体为模型组新出现点,腺苷酸激酶同工酶1在模型组消失,Thiore doxin peroxidase 1在模型组分为2个点。以双向电泳技术得到分辨率较好的电泳图谱,并初步鉴定脑缺血后差异表达蛋白,为深入研究缺血性脑损伤病理机制奠定了基础。     

昆虫胰蛋白酶及其基因表达

胰蛋白酶是脊椎动物消化道中一种主要的蛋白水解酶,由胰脏产生。以无活性的前体──酶原形式释放,一经进人肠腔,由肠激酶活化自其N端水解掉一段6肽（活化肽）而生成有活性的胰蛋白酶。它可以有力迅速地激活其它蛋白酶原（糜蛋白酶原、羧肽酶原、弹性蛋白酶原）而行使消化功能[1]。昆虫胰蛋白酶由中肠肠壁细胞产生分泌进入中肠。过去研究认为：昆虫胰蛋白酶与脊椎动物不同,它不是以无活性的前体释放的,因此就没有相当于脊椎动物的胰蛋白酶原[1]。但最近研究确认,在昆虫消化道中同样存在着类似于脊椎动物的胰蛋白酶原,并对昆虫胰蛋白…     

家蝇幼虫抗菌物质提取方法的比较

为了探索家蝇幼虫抗菌物质的提取方法,本文采用醋酸提取蝇蛆的抗菌物质,通过加热去除其中不稳定的蛋白成分,再通过切向流超滤和直接冻干法获得复合抗菌物质,测定其中可溶蛋白的含量、抗菌组分的抗菌活性及组成的差异。结果表明,和冻干法相比,利用切向流超滤法可以显著提高抗菌复合物质中可溶蛋白的含量。利用切向流超滤浓缩制备的抗菌物质和直接冻干制备的抗菌物质经过凝胶过滤层析及抗菌活性分析表明,非蛋白组分(A20-A21和B6-B12)比蛋白组分(A1-A2、A10-A13、B1-B2)抗菌谱广。电泳分析蛋白组分表明,其抗菌蛋白组分处在6 k Da-35 k Da的某些蛋白组分中。     

金鱼不同组织器官及胚胎发育不同时期蛋白水解酶的种类和活性变化

采用复性电泳方法研究了金鱼组织器官蛋白水解酶及个体发生过程中蛋白水解酶的种类和活性变化,主要结果表明：⑴金鱼各组织器官蛋白水解酶种类差异不大,大多数组织器官都具有１１３、６９、２０、１６ｋＤ四条带,但不同组织器官常具有其特异性蛋白水解酶;肠道蛋白水解酶种类最多、活性最强。⑵蛋白水解酶的活性受ｐＨ值影响和制约,大多数组织器官蛋白水解酶活性最适ｐＨ值为８．５。⑶在金鱼胚胎发育早期（从卵裂到心跳期）多数     

五种黄精属植物的蛋白水解酶谱研究

用蛋白水解酶复性电泳方法 (G- PAGE)分析了 5种黄精属植物根状茎和叶的蛋白水解酶的种类和活性。结果表明 :(1)它们的根状茎均含有 85k D和 55k D的蛋白水解酶 ;叶均含有 82 k D的蛋白水解酶 ;(2 )根状茎和叶的蛋白水解酶种类和活性有很大差异 ,叶的蛋白水解酶活性为根状茎的 10倍 ,它们的活性均受 p H影响 ,其最适 p H为 7;(3)每种植物都含有自己特有蛋白水解酶 ;(4 )蛋白水解酶在植物鉴定中有参考价值     

离子束介导玉米DNA影响水稻幼苗根系蛋白水解酶的表达

利用离子束介导法把玉米DNA导入水稻豫粳6号种子胚中,通过复性电泳技术,分析水稻幼苗根系中蛋白水解酶在pH4.5、pH7.0和pH8.5的表达情况.结果表明:(1)在不同pH条件下处理,各蛋白水解酶种类与活性存在差异,酸性、中性、碱性条件下,检到的蛋白水解酶酶带依次增多,酸性条件下酶活性较弱,中性和碱性条件下酶活性较强;(2)在3种pH条件下,离子束辐照处理均有部分蛋白水解酶带缺失,同时,在中性和碱性条件下检出50kD新酶带,说明离子束辐照可影响水稻蛋白水解酶表达;(3)离子束介导玉米DNA水稻幼苗根系中,pH4.5时无新蛋白水解酶酶带检出,pH7.0和pH8.5时均检到多条新酶带且活性较强.说明离子束介导玉米DNA引起水稻幼根蛋白水解酶表达发生变化.     

大鲵（Andrias davidianus）4种生殖器官的蛋白水解酶种类和活性分析

用蛋白水解酶活性电泳方法（G-PAGE）分析了大鲵卵巢,输卵管,精巢,输精管的蛋白水解酶种类和活性,结果表明：1）精巢和输精管的蛋白水解酶种类（分子量）相似,活性有差异。主要的蛋白水解酶分子量为240,85,73,61,51,42,37和23kD;2）输精管的蛋白水解酶在碱性条件下活性最强,在中性条件下活性次之,在酸性条件下活性最弱。精巢的蛋白水解酶在中性和碱性条件下活性相似,在酸性条件下活性很弱,推测精巢蛋白水解酶活性的最适pH为中性,输精管蛋白水解酶活性的最适pH为碱性;3）卵巢和输卵管的蛋白水解酶种类（分子量）相似,主要的蛋白水解酶分子量为73、61、51和37kD,它们在酸性条件下活性最强,在中性条件下几乎无活性,推测它们活性的最适pH为酸性;4）与卵巢和输卵管相比,精巢和输精管的蛋白水解酶种类多,活性强,活性的最适pH高,推测这种差别可能有利于受精和发育中所需的蛋白水解酶快速灭活或活化。     

植物根际芽胞杆菌菌种资源采集及其具有过水解催化活性水解酶基因的克隆

[背景]芽胞杆菌源枯草杆菌蛋白酶(subtilisin carlsberg)、乙酰基木聚糖酯酶(acetyl xylan esterase)和头孢菌素乙酰水解酶(cephalosporin acetyl hydrolase)具有较高的过水解催化活性,有商业开发价值。[目的]挖掘芽胞杆菌菌株中具有过水解酶催化活性的水解酶蛋白基因,为后续制备过水解酶及酶法合成过氧乙酸奠定基础。[方法]利用定向筛选培养基,从植物根际及纳豆产品中筛选产蛋白酶芽胞杆菌候选菌株,并利用RFLP及16S rRNA基因对其进行鉴定。从蛋白酶高产芽胞杆菌菌株中克隆枯草杆菌蛋白酶、乙酰木聚糖醋酶和头孢菌素乙酰水解酶的全长基因。[结果]从植物根际土壤及纳豆产品中共分离到85个候选菌株,RFLP及16S rRNA基因鉴定结果表明候选菌株均为芽胞杆菌,分别属于Bacillus subtilis、Bacillus cereus、Bacillus pumilus和Bacillus megaterium四个类群。从B.subtilis NSYT-3克隆的枯草杆菌蛋白酶基因编码的多肽链全长381个氨基酸,从B.pumilus OSLJ-3克隆得到的乙酰基木聚糖酯酶基因编码的多肽链全长320个氨基酸,从B.subtilis NSYT-3克隆的头孢菌素乙酰水解酶基因编码的多肽链全长318个氨基酸,3D结构模拟表明这3个酶蛋白均具有α/β水解酶折叠家族蛋白结构特点。[结论]芽胞杆菌源具过水解催化活性水解酶基因的克隆,为后续开发酶法合成过氧乙酸工艺奠定了基础。     

体内外因素对大鼠肝脏加工ADAMs的影响研究

ADAMs是近年发现的一个新的具有多个结构域和多种功能的蛋白质家族。本文多方面比较了大鼠实质肝细胞和非实质肝细胞的ADAMs与再生肝的ADAMs异同。检测多种因子对ADAMs体外加工的影响发现,活性的最适pH为3.5-4的酸性蛋白水解酶在细胞ADAMs降解加工中起关键作用;活性的最适pH为7.5-8.5的偏碱性蛋白酶在基质ADAMs降解加工中起重要作用;外源的胶原酶能高效降解75kDADAMs和140kDMDC15,可见,体内胶原酶样的蛋白水解酶是ADAMs降解加工的重要酶类;Fe^3 和Zn^2 等可在体外活化ADAMs的降解,看来,体内降解加工ADAMs的酶属依赖于Fe^3 或Zn^2 的蛋白水解酶。根据研究结果推测,体内许多不同性能的蛋白水解酶,如丝氨酸蛋白水解酶,半胱氨酸蛋白水解酶,天冬氨酸蛋白水解酶和金属蛋白水解酶等参与ADAMs的降解加工。     

台湾省九二年度大学暨独立学院入学考试——生物试题

第一部分 多重选择题: 1、下列人体消化器官中,何者的分泌物与脂质消化生理有关? A 胃 B.胰脏 C.肝脏 D.十二指肠E.火肠 2、下列哪些动物无特化呼吸器官,嵌靠细胞直接与外界交换气体? A.变形虫 B.海绵 C.水螅 D.蜗牛 E.蚯蚓 3、下列有关心搏的叙述,何者正确? A.心搏快慢主要是由分布于心脏的神经所控制     

利用自裂解肽T2A共表达猴B病毒糖蛋白gB和gD

目的:探讨自裂解肽T2A对猴B病毒g D和g B蛋白共表达的可行性。方法:利用一点褐翅蛾病毒(Ta V)的2A元件(T2A)连接猴B病毒膜蛋白g D和g B基因,构建多顺反子表达质粒,制备CHO-S工程细胞,采用Western印迹和ELISA检测蛋白表达及重组蛋白的免疫学特性。结果:g D和g B蛋白实现了共表达且保持了独立和完整的分子结构,但g B的表达水平明显低于g D;ELISA结果显示,单独表达的g D和g B以及共表达产物都能与B病毒阳性血清反应,但共表达产物的反应强度高于单独表达的g D和g B;重组蛋白经变性处理后,g B蛋白的吸光度值降幅最大。结论:自裂解肽T2A能够实现不同分子共表达且保持独立和完整的分子结构;共表达猴B病毒g D和g B分子有利于提高抗体检测的敏感性。