饱和脂肪酸对昆明小鼠口腔溃疡愈合影响的研究

目的：研究饱和脂肪酸对昆明小鼠口腔溃疡愈合的影响。方法：3组3～5周龄昆明小鼠,用40％冰醋酸制造口腔溃疡,3组鼠分别喂养含有不同浓度饱和脂肪酸的饲料,观察其对口腔溃疡愈合的影响。结果：实验组动物口腔溃疡愈合时间明显长于对照组,高脂组口腔溃疡愈合时间较对照组延长12 d。结论：饱和脂肪酸对昆明小鼠口腔溃疡有着明显的延缓愈合的作用。     

EGCG对ConA诱导的肝损伤小鼠NF-κB和ICAM-1表达的影响

目的通过观察表没食：于儿茶素没食子酸酯（EGCG）对ConA诱导的急性肝损伤小鼠肝组织中NF-κB及ICAM-1表达的影响,来探讨EGCG对小鼠的肝保护机制。方法C57BL／6小鼠分成4组：对照组、EGCG对照组、ConA模型组．EGCG＋ConA组。EGCG对照组及EGCG＋ConA组小鼠给予EGCGEl服（5mg／kg）10d后,予模型组小鼠静脉注射ConA（15mg／kg）建造肝损伤模型。采血及留取肝组织,HE法检测肝组织病理变化,ELISA法检测NF-KB及ICAM-1的表达。结果ConA模型组小鼠肝损伤明显,NF-κB及ICAM-1的表达明显增多,与对照组比较有显著性差异（P〈0．05）;EGCG治疗组肝损伤减轻且伴NF-KB及ICAM-1的表达下降,与模型组比较差异明显（P〈0．05）。结论EGCG对ConA诱导的免疫性肝损伤小鼠有保护作用．其机制可能与调节NF-κB及ICAM-1的表达有关。     

~(125)I标记重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内分布的实验研究

目的研究重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内的分布情况,明确其是否具有靶向分布特点。方法实验室制备dTMP-GH重组融合蛋白;用放射性125I标记融合蛋白dTMP-GH后,按100μg/kg的标准小鼠尾静脉注射125I-dTMP-GH,分别于给药后5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取心、肝、脾、肾、股骨、甲状腺等进行放射性计数。结果制备得到纯度大于98%的重组融合蛋白dTMP-GH;125I标记率为71.53%,放化纯度为96.53%,比活度为0.22 MBq/μl;尾静脉注射125I标记的dTMPGH后30 min股骨的放射性计数占到注射总量的10%,并随时间推移经肝脏和肾脏代谢。结论融合蛋白dTMP-GH经尾静脉注射后在小鼠体内主要分布于骨髓,具有骨髓组织偏向分布特点。     

PFA-fixed Hsp6Osp-loaded dendritic cells as a vaccine for the control of mouse experimental allergic encephalomyelitis

We have shown that Hsp6Osp-loaded immature dendritic cells （DC/sp） can protect mice from the induction of experimental allergic encephalomyelitis （EAE） by inducing Qa-l-restricted CD8＋ T regulatory （Treg） cells. The binding half-life between Qa-1 and Hsp6Osp is particularly short and leads to an unstable Qa- l/peptide complex that significantly decreases the efficacy of this vaccination. To prevent Qa-l/Hsp6Osp complex dissociation, we utilized paraformaldehyde （PFA） fixation to stabilize the formation of the Qa-l/Hsp6Osp complex and maximize the function of DC/sp as a vaccine to control autoimmune diseases. Compared with the non-fixed DC/sp, the fixed DC/sp （FDC/sp） showed an enhanced ability to activate Qa-l-restricted Hsp6Osp-specific CD8＋T cells in vitro and prevented EAE in vivo. Importantly, the FDC/sp maintained immune activity following cryopreservation for I week or after storage for 72 h at 4 ~C. These results indicate that PFA fixation can sustain or increase the efficacy of DC/sp by improving the stability of the Qa-l/Hsp6Osp complex on the surface of the DC/sp. In addition, PFA fixation creates a time window for DC/sp storage, transport and application. Our d~tn ~u~p__~t ~ nnt~nti~l clinic~l ..~e nf FDCI~n ~ ~ vnccine fnr the nr~v~ntinn and treatment of autnimm.n~_ di_~_~__     

细胞重编程及其在再生医学中的应用前景 ——写在2012年诺贝尔生理学或医学奖颁布之际

2012年10月8日,英国发育生物学家约翰·格登爵士(John B.Gurdon)和日本生物医学家山中伸弥(Shinya Yamanaka)因"发现成熟细胞可以被重编程(reprogrammed)为多能性(pluripotency)"而获奖,这次获奖是在短短五年时间内干细胞领域的第二次获奖,上一次获奖是在2007年,马丁·埃文斯因1981年成功分离出小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)而与另外两名从事"基因打靶"(gene targeting)的科学家马里奥·卡佩基、奥利弗·史密斯共享诺贝尔生理学或医学奖.     

人IL-10真核表达载体的构建及其在体内外的高效表达

<正>白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)是一种多效细胞因子,在免疫调控中发挥了重要作用,其在病毒持续性感染中的作用也日益受到关注。有研究显示HBeAg阳性患者血清高水平的IL-10和IL-12与早期自发的HBeAg血清转换相关[1],也有研究结果显示IL-10与病毒感染的持续与清除相关[2]。IL-10在     

人源化NOD/SCID小鼠的细胞免疫重建

目的探讨人脐带血CD34+细胞移植于非肥胖性糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠后的免疫重建作用。方法免疫磁珠法分选人脐血CD34+细胞,经外侧尾静脉移植于亚致死量照射的NOD/SCID小鼠。移植后4、6、8、10周流式细胞术动态监测小鼠外周血人源CD45+、CD3+、CD56+细胞的数量;10周后PCR检测小鼠骨髓人ALU基因的表达,免疫组织化学染色检测小鼠脾脏人源CD3+、CD56+细胞的表达。结果 NOD/SCID小鼠经照射后骨髓腔内有核细胞及巨细胞数量均明显减少或消失,达到理想的清髓预处理效果;移植后4、6、8、10周,移植组所有存活小鼠外周血均可检测到人源性CD45+、CD3+、CD56+细胞的表达,人源淋巴细胞的数量随时间的延长而变化,8周时达到高峰,10周仍有较高的比例。10周时移植组所有存活小鼠骨髓细胞均检测到人ALU基因的表达,脾脏均检测到人CD3+、CD56+细胞;未移植组小鼠照射后2周内全部死亡。结论经照射后的NOD/SCID小鼠通过移植人脐血CD34+细胞成功地建立了hu-SRC-NOD/SCID模型,并有效地重建了小鼠细胞免疫系统。     

小鼠神经母细胞瘤N2a细胞脑啡肽酶基因的表达与启动子区甲基化和组蛋白修饰相关

目的研究小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a(N2a)细胞中脑啡肽酶(NEP)基因表达的表观调控机制,探讨DNA甲基化与组蛋白乙酰化之间的相互作用。方法体外培养N2a细胞,以3μmol/L、5μmol/L DNA甲基化酶抑制5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-dc)及(300、500、700)nmol/L组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)分别处理N2a细胞48 h和24 h。采用逆转录PCR(RT-PCR)、Western blot法分别检测NEP的mRNA、蛋白表达;亚硫酸氢盐测序聚合酶链反应(BSP)法检测NEP基因启动子区DNA的甲基化水平;染色质免疫共沉淀(ChIP)法检测NEP基因启动子区组蛋白H3的乙酰化水平。结果 5-Aza-dc和TSA均能剂量依赖地提高NEP基因的表达(P0.01);5-Aza-dc可诱导NEP基因去甲基化(P0.01);TSA可增高NEP组蛋白H3乙酰化水平(P0.05),但不能明显改变NEP基因DNA的甲基化水平(P0.05)。结论在小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中NEP基因的表达受DNA甲基化及组蛋白乙酰化的调控,组蛋白乙酰化水平并不影响DNA甲基化状态。     

小鼠PD-L1胞外段基因的原核表达及活性分析

目的原核表达小鼠程序性死亡分子1配体胞外段(exPD-L1)蛋白基因并在体外初步验证其生物学活性。方法应用小鼠脾脏细胞总RNA,反转录PCR克隆exPD-L1基因序列,将其克隆到pGEX-4T-1载体中构建原核表达载体pGEX-4T-1-exPD-L1,经酶切和测序鉴定正确后,转化到E.coli BL21(D3)中,经IPTG诱导表达后,对包涵体蛋白进行复性和纯化。对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot法检测证明其正确后,采用GST pull-down检测融合蛋白和PD-1的相互作用,鉴定其生物学活性。结果成功构建重组质粒pGEX-4T-1-exPD-L1,并在宿主菌中成功表达相对分子质量(Mr)55 000的重组蛋白,包涵体成功复性和纯化后经Western blot法证明其正确表达,同程序性死亡分子1(PD-1)蛋白的GST pull-down结果表明融合蛋白具有生物学活性。结论成功克隆和表达小鼠exPD-L1蛋白,并证明其具有生物学活性。