^125I标记单克隆抗体4E5的制备及其在小鼠体内的分布

目的：探讨放射性核素^125I标记单克隆抗体4E5的方法,观察标记物在正常小鼠体内的生物学分布。方法：采用Iodogen法进行单克隆抗体4E5的Ⅲ标记,标记产物用SephadexG-50分离纯化,三氯醋酸（TCA）法测定标记率和放化纯,并对标记物的稳定性进行分析。取45只昆明小鼠随机分成9组,每只小鼠从尾静脉注入剂量为148KBq／0．2ml的^125I-4E5,分别于注药后5min、15min、30rain及1h、2h、6h、24h、48h、72h各处死一组小鼠,取主要脏器称重并测量其放射性计数,计算各脏器每g组织百分注射剂量率（％ID／g）。结果：”I标记4E5的标记率为（79．24-2．6）％,放射化学纯度为（97．1±1．1）％,比活度为294．5MBq／mg;^125I－4E5加入到血清及PBS中放置1w后,放化纯度仍〉90％;体内分布显示^125I-4E5在小鼠体内主要分布于肝、脾、肾,在血液中清除较快。结论：Iodogen法^125I标记4E5的标记率和放化纯度高,方法简便,标记物的稳定性好;。I-4E5在小鼠体内主要通过肝和肾代谢,血液中清除较快。     

125I标记抗MIF单克隆抗体制备及其生物学活性的研究

目的:建立125I标记抗巨噬细胞移动抑制因子(MIF)单克隆抗体(mAb)方法,探讨其在体内外生物学活性.方法:①利用Iodogen法,Na125I标记Anti-mMIF mAb,用Sephadex G-25柱凝胶过滤层析法分离纯化,测定其标记率.纸层析法测定放射化学纯度和稳定性.②采用ELISA和改良MMI鉴定其免疫活性及生物学活性.③观察小鼠体内的生物学分布情况.结果:①标记的最佳条件为Iodogen 40～100μg、抗体20～50μg[Iodogen(m):抗体(m)=2:1],加入Na125I15～30 MBq、室温反应10～15 min,标记率为(90.40 4±3.34)%,放射化学纯度为(97.60±1.14)%,比活度为12.2～26.0 MBq/μg;标记物4℃条件下放置3周后放射化学纯度仍为90.36%.②125I-mMIF mAb能与抗原MIF特异性结合,较好地保持其免疫活性及生物学活性.③体内生物学分布,在肺、肝、脾、肾内具有较高的放射性计数.结论:Iodogen法获得高标记率和放射化学纯度的125I-mMIF mAb,具有很好的体外稳定性,其在体内外保持较好的生物学活性.为进一步应用125I-mMIF mAb进行放射免疫显像和靶向治疗奠定了实验基础.     

~(125)Ⅰ标记抗MIF单克隆抗体制备及其生物学活性的研究

目的:建立125Ⅰ标记抗巨噬细胞移动抑制因子(MIF)单克隆抗体(mAb)方法,探讨其在体内外生物学活性。方法:①利用Iodogen法,Na125Ⅰ标记Anti-mMIF mAb,用Sephadex G-25柱凝胶过滤层析法分离纯化,测定其标记率。纸层析法测定放射化学纯度和稳定性。②采用ELISA和改良MMI鉴定其免疫活性及生物学活性。③观察小鼠体内的生物学分布情况。结果:①标记的最佳条件为Iodogen 40~100μg、抗体20~50μg[Iodogen(m)∶抗体(m)=2∶1],加入Na125I15~30 MBq、室温反应10~15 min,标记率为(90.40±3.34)%,放射化学纯度为(97.60±1.14)%,比活度为12.2~26.0 MBq/μg;标记物4℃条件下放置3周后放射化学纯度仍为90.36%。②125Ⅰ-mMIF mAb能与抗原MIF特异性结合,较好地保持其免疫活性及生物学活性。③体内生物学分布,在肺、肝、脾、肾内具有较高的放射性计数。结论:Iodogen法获得高标记率和放射化学纯度的125Ⅰ-mMIF mAb,具有很好的体外稳定性,其在体内外保持较好的生物学活性。为进一步应用125I-mMIF mAb进行放射免疫显像和靶向治疗奠定了实验基础。     

~(125)Ⅰ标记眼镜蛇毒组份Ⅲ在小白鼠体内的组织分布

目的 观察中华眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒组份III在小鼠体内的分布情况,探讨组份III在动物体内的分布特点。方法 用氯胺-T法对眼镜蛇毒组份III进行碘化标记,用放射性核素示踪动力法检测血液中的药物浓度,以放射性参与量(脏器与血液放射比)的比值作为组份III在组织中分布的依据。结果 小鼠尾静脉注射125I-组份III后,2h及4h放射性参与量大于1的器官为肝脏、肾脏、肺脏、心脏和肌肉,其中以肾脏分布最高,且4h放射性参与量高于2h。结论 小鼠静注组份III后2h,以肾脏分布最高,肝脏与肺脏的放射性参与量也较高,尿中含量很高。     

IGF-IA~（99）Tc~m标记及其在正常裸鼠体内放射性分布

目的：建立99Tcm标记胰岛素样生长因子I类似物（IGF-IA）的方法,观察其在正常裸鼠体内的生物学分布。方法：SnCl2.2H2O浓度0.75g～4g/L,IGF-IA的用量（20～100）μg,Tween80的用量从（0～10）μl,淋洗液的体积从（20～200）μl,在0.25h～6h不同时间点测定标记率及其在体外的稳定性。将标记物经正常裸鼠尾静脉注射,于5min、30min、1h、2h、4h取血液及主要脏器测量其放射性计数率值。结果：99Tcm标记IGF-IA的最佳标记方法为：浓盐酸溶解SnCl2.2H2O后用葡萄糖酸钠溶液配成3g/L,吸取100μl后加入40μlIGF-IA（2g/L）;300μlNa3PO4和2μl0.1%Tween80混匀后加入50μl99TcmO4-新鲜淋洗液;在IGF-IA体系中加入淋洗液体系,混匀,室温下反应0.5h;加入500μlNaH2PO4将pH值调节到7左右,99Tcm-IGF-IA最高标记率为（94.43±0.75）%,室温下放置6h标记率为（85.57±2.81）%。99Tcm-IGF-IA在正常裸鼠体内主要分布于肾脏和肝脏。结论：预锡化法进行99Tcm标记IGF-IA方法简捷且具有较高标记率和良好稳定性。99Tcm-IGF-IA在正常裸鼠体内主要被肾脏和肝脏摄取,血液清除快。     

软骨链蛋白在小鼠体内分布和代谢的示踪研究

目的 研究软骨链蛋白125I的标记和在小鼠体内的分布与代谢，为该蛋白质在肿瘤、软骨、结缔组织疾病以及地方病等领域的基础研究提供方法学指导和代谢参数.方法 氯胺-T法标记软骨链蛋白，亲和凝胶层析法分离标记物进行体内示踪研究.结果 软骨链蛋白标记率为89.90%，放射化学纯度为92.77%,样品比活度为8.13×109Dpm/μg，该蛋白与透明质酸的最大结合率为89.23%.平均血浆半减期为1.84小时,血浆清除率为1.75ml/h,排除速率为10.03ml/h,稳态双库代谢模型为：Ct=2.4986e-0.5635t+3.24e-0.2833t.结论 为临床相关疾病的研究提供实验指导和代谢参数.     

131I-c(RGD)2的药代动力学及急性毒性研究

目的 用131I标记二硫键成环的RGD肽二聚体c(RGD)2,探讨其在裸鼠体内的药代动力学参数、急性毒性反应和死亡情况,评价其应用的安全性.方法 选取5只裸鼠为实验对象,每只经尾静脉注射131I-c(RGD)2(7.4 MBq/200μL),分别于注射后3、6、10、15、30、45、60、120、180及360min断尾取血5μL,测量血液的放射性计数,采用PKSolver软件进行药代动力学分析.另取裸鼠10只随机分为实验组及对照组,实验组每只经尾静脉注射131I-c(RGD)2(7.4 MB/60μL);对照组经尾静脉注射生理盐水60μL,观察注射后72 h内裸鼠的不良反应和死亡情况.结果 血液药-时曲线符合权重系数为1/CC的开放性二房室分布模型,其中分布相半衰期(t1/2α)为15.364 min,消除相半衰期(t1/2β)为123.125 min.注射131I-c(RGD)2后72 h内,裸鼠无不良反应与死亡.结论 c(RGD)2具有理想的药代动力学特点,且无明显毒性作用,这些均有利于其作为新药应用于临床.     

中华眼镜蛇毒组份Ⅲ的药代动力学及组织分布研究

目的:观察中华眼镜蛇(Najanajaatra)蛇毒组份Ⅲ在兔体内的药代动力学过程和在小鼠体内的分布状况。方法:用氯胺-T法对眼镜蛇毒组份Ⅲ进行碘化标记,用放射性核素示踪动力法检测血液中的药物浓度,以放射性参与量(脏器与血液放射比)的比值作为组份Ⅲ在组织中分布的依据。结果:兔静脉注射眼镜蛇毒组份Ⅲ75、150和300μg／kg3个剂量后,快分布相半衰期T_1/2α为39.6-42.5min,慢分布相半衰期T_1/2β为16.8-17.3h,消除相半衰期T_1/2γ为21.7-22.1h。小鼠尾静脉注射[¹²⁵Ⅰ]-组份Ⅲ后,2h及4h放射性参与量大于1的器官为肝脏、肾脏、肺脏、心脏和肌肉,其中以肾脏分布最高,且4h放射性参与量高于2h。结论:兔静脉注射组份Ⅲ3个剂量后,血药-时间曲线经3P87药动学程序拟合符合三房室模型特征,3个时相的半衰期各剂量组之间无显著差异,曲线下面积(AUC)与剂量成正比,表明药物在兔体内的分布和消除为一级线性动力学过程。小鼠静注组份Ⅲ后2h,以肾脏分布最高,肝脏与肺脏的放射性参与量也较高,尿中含量很高。     

软骨链蛋白在小鼠体内分布和代谢的示踪研究

目的　研究软骨链蛋白125I的标记和在小鼠体内的分布与代谢，为该蛋白质在肿瘤、软骨、结缔组织疾病以及地方病等领域的基础研究提供方法学指导和代谢参数.方法　氯胺-T法标记软骨链蛋白，亲和凝胶层析法分离标记物进行体内示踪研究.结果　软骨链蛋白标记率为89.90%，放射化学纯度为92.77%,样品比活度为8.13×10     

~（99m）Tc标记DTPA-生物素和hIgG在正常小鼠体内分布实验

目的：探讨DTPA-生物素和hIgG的99mTc标记方法,并观察标记物在体内、外的稳定性及其在正常小鼠体内分布。方法：99mTc标记DTPA-生物素采用直接标记法,99mTc标记hIgG采用2-巯基乙醇还原法,标记率及放化纯测定采用纸层析法,并分别观察99mTc-生物素和99mTc-IgG在生理盐水（NS）中的稳定性;取24只正常小鼠,分为两组,分别经尾静脉注入99mTc-生物素和99mTc-hIgG,注入剂量为7.4MBq/100μl,于注入后1h、3h、6h、12h行SPECT显像并处死小鼠分离各脏器,测量放射性计数,计算各脏器每g组织百分注射剂量（%ID/g）。结果：99mTc标记DTPA-生物素的标记率〉80%,99mTc标记hIgG的标记率〉70%,99mTc-hIgG的放化纯〉90%;在NS中温育12h未观察到99mTc-生物素和hIgG放化纯度明显降低;体内生物分布显示99mTc-生物素肾内摄取高,主要经泌尿系统排泄;99mTc-hIgG在体内主要分布于肝、脾、肾,且在血液中存留时间较长。结论：99mTc标记DTPA-生物素和hIgG具有良好的标记率及体外稳定性,小鼠体内分布实验表明,99mTc-生物素和99mTc-hIgG体内分布的明显不同,为下一步基于亲和素-生物素系统预定位技术各组分的应用提供实验依据。     

抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备高特异性和高亲和力的抗人肝细胞肝癌（HCC）的单克隆抗体（MAb）,为肝癌的靶向诊断及治疗提供依据.方法 用人肝细胞肝癌细胞株HepG-2经＂尾静脉.脾脏联合方法＂免疫BALB/c小鼠.取其脾脏细胞与同源小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14融合,经ABC免疫组化初筛抗体、有限稀释法亚克隆化、染色体分析、免疫组化鉴定抗体特异性、共聚焦显微镜扫描技术（LSCM）进行组织定位、ELISA分析鉴定抗体的亚型及荷人肝癌裸鼠牛物分布等进一步鉴定其生物学特性.结果 （1）获得一株分泌抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的杂交瘤;该抗体与肝癌组织结合的特异性高达98.5%（67/68）;（2）注射131I-MAb后瘤部位放射性分布有逐渐增加的趋势,血液、肝脏、肾脏和肺脏放射性有逐渐减低的趋势,72 h肿瘤/血液和肿瘤,肝脏比值分别为15.76±3.28和7.23±1.70.结论 成功制备抗人肝细胞肝癌的单克隆抗体,具有较好的肝癌特异性、靶向性,对原发性肝癌有潜在的诊断及治疗作用.     

重组9型腺相关病毒介导细胞周期蛋白A2基因转染小鼠心肌的研究

目的探讨重组9型腺相关病毒介导细胞周期蛋白A2基因经尾静脉注射后转染小鼠心肌的可行性及安全性。方法雄性C57BL／]~鼠随机分为病毒基因转染组和单纯生理盐水组。两组小鼠分别通过尾静脉注射病毒稀释液或等体积的生理盐水,分别于注射2周及4周后处死小鼠。Western印迹检测小鼠心脏、肝脏、肺脏和肾脏中细胞周期蛋白A2的表达,以评价腺相关病毒介导目的基因转染的靶向性。免疫组织化学检测细胞周期蛋白A2在心肌细胞中的表达及定位。检测增殖相关蛋白在各器官中的表达,明确转染后是否引起其他器官过度增殖,以评价其安全性。结果细胞周期蛋白A2转染2周后在小鼠心脏开始出现表达,第4周呈稳定表达,而对照组细胞周期蛋白A2的表达则相对较少（2周：0．13％±0．01％比25．97％±2．24％,4周：0．14％±0．02％比73．70％±3．10％）,两组比较差异均有统计学意义（均为P〈0．05）。而两组小鼠肝脏、肺脏、肾脏中细胞周期蛋白A2的表达差异无统计学意义（均为P〉0．05）。细胞周期蛋白A2转染心肌后主要定位于心肌细胞胞质中,胞核中较少表达。转染心肌组织后,增殖细胞核抗原（PCNA）表达增加（2周：13．10％±0．54％比65．80％±3．44％,4周：12．90％±0．34％比71．20％±1．58％）,两组比较差异均有统计学意义（均为P〈0．05）。而有丝分裂特异性蛋白磷酸化组蛋白H3（H3P）在两组中的表达差异无统计学意义（均为P〉0．05）。PCNA在肝脏、肾脏、肺脏中的表达差异无统计学意义（均为P〉0．05）。结论重组9型腺相关病毒介导细胞周期蛋白A2基因可靶向转染小鼠心肌,并能重新启动心肌细胞的细胞周期进程,且转染后不会引起其他器官的过度增殖,具有安全性及可行性。     

重组脂联素在肥胖和2型糖尿病小鼠体内分布研究

研究脂联素球形结构域重组蛋白(gAcrp)在饮食诱导肥胖(DIO)小鼠、2型糖尿病(T2DM)dx鼠和正常小鼠体内组织分布.用125Ⅰ-gAcrp示踪方法测定静脉注射后0.5h和2h时标记物在各组小鼠体内组织分布.结果表明,与0.5h相比,2h时125Ⅰ-gAcrp在T2DM小鼠肝脏和DIO小鼠颌下腺中的分布明显提高,在DIO小鼠肝脏中 明显减少,并在DIO小鼠睾丸、胃、肠和T2DM小鼠子宫中的分布有所增加.除文献报道的肝脏、骨骼肌外,颌下腺、睾丸、子宫也可能是脂联素在肥胖和T2DM个体中发挥作用的重要器官.     

重组腺病毒AdEGFP/hVEGF165快速构建及在骨髓移植小鼠体内的分布和表达效率

目的　研究增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)标记的人血管内皮细胞生长因子 16 5(hVEGF16 5 )重组腺病毒载体的快速构建及在骨髓移植后小鼠体内的分布和表达效率。方法　利用细菌内质粒间同源重组法快速构建EGFP标记的重组腺病毒Ad EGFP hVEGF16 5 ;通过体外试验观察病毒的形态、滴度和安全性 ;经尾静脉注射 3× 10 8PFU的重组腺病毒给同基因骨髓移植BALB c小鼠 ,在不同时间检测重组腺病毒在小鼠体内分布和hVEGF16 5的表达。结果　通过细菌内质粒间同源重组法在短期内成功构建了复制缺陷型重组腺病毒载体Ad EGFP hVEGF16 5 ;纯化的病毒颗粒在电镜下成分均一 ,滴度可达 10 1 0 ～ 10 1 1 PFU ml。Hela细胞感染病毒后经多次传代未见细胞病变。借助于荧光显微镜在不同时期观测到小鼠心、肺、肝、脾、肾、小肠组织EGFP ;RT PCR分析和免疫组化染色显示脏器内有显著VEGF表达。各脏器未见明显毒性反应。ELISA法检测小鼠血浆中VEGF水平升高可达(86 6 6 7± 97 13)pg ml。结论　本研究结果证实细菌内同源重组法构建腺病毒载体具有高效、省时、省力的特点 ,并成功介导了hVEGF16 5基因在骨髓移植小鼠体内的安全、稳定表达 ,为今后在骨髓移植过程中开展基因治疗奠定了基础。     

Biodistribution and pharmacokinetics of recombinant, human 125I-interleukin-2 in mice

The pharmacokinetics and biodistribution of radioiodinated recombinant interleukin-2 (125I-IL-2) was studied after either intravenous (i.v.) or intraperitoneal (i.p.) injection into C57BL/6 mice. Beta-lactoglobulin radiolabeled with 131I served as a control protein. After i.v. injection, 125I-IL-2 preferentially accumulated in the liver and spleen. Liver accumulation was fast, peaking at 5 min, and was followed by rapid clearance. Spleen accumulation was slightly slower, peaking at 15 min. Blood values 1 min after i.v. injection were 22-34% of the injected doses (I.D.)/gram. These values declined quickly over the next hour. In contrast, after i.p. administration no organ showed specific uptake of 125I-IL-2. Blood values after i.p. injection were essentially constant over 3 h and were greater and more sustained than after i.v. administration. Kidney values for both 125I-IL-2 and 131I-beta-lactoglobulin, after either i.v. or i.p. injection, indicated that the major route of clearance for both compounds was rapid loss through the kidneys.     

CT引导下125I粒子植入治疗肾上腺转移癌

目的:探讨CT引导下125I粒子植入治疗肾上腺转移癌的疗效.方法:对2008年12月至2010年7月收治的8例行CT引导下125I粒子植入治疗的肾上腺转移癌患者资料行回顾性分析.术前制定治疗计划系统(TPS).单个粒子的放射性活度为29.6 MBq,粒子间距0.5～1.0 cm,中位MPD为102.9 Gy(95.8～113.4 Gy).在CT引导下将125I放射性粒子植入肾上腺肿瘤内.治疗后1～10月对病灶影像变化情况进行评价.结果:8例患者125I粒子植入治疗后CT影像复查示:完全缓解(CR)3例,部分缓解(PR)4例,稳定(NC)1例,有效率87.5%(7/8).所有患者均未出现严重不良反应,主要的并发症为疼痛(3例)、少量出血(1例)、发热(2例).结论:CT引导下125I粒子植入治疗肾上腺转移癌疗效确切,是一种安全、有效的治疗方法.     

Pseudomonas aeruginosa Exotoxin in Mice: Localization and Effect on Protein Synthesis

We studied the fate of (125)I-labeled Pseudomonas aeruginosa (PA 103) exotoxin injected intravenously into mice and the effect of the exotoxin on the protein synthesis of various organs. After 2 h, only 5% of the injected label remained in the blood, in comparison with 30% of the injected control, consisting of [(125)I]bovine serum albumin. The highest concentration of radioactivity was consistently observed in the kidneys of toxin-treated mice. Lesser amounts of the label were found in the liver and the spleen. The heart, pancreas, lung, and brain showed very little uptake. Approximately 30% of the label (non-trichloroacetic acid precipitable) was recovered from the urine within 2 h after the injection. The behavior of [(125)I]toxoid was similar to that of the [(125)I]toxin. In contrast, in [(125)I]bovine serum albumin-treated mice, the label was uniformly distributed among the organs examined, and the concentration was low. After intravenous administration of the exotoxin, a 50% inhibition of protein synthesis was observed in the liver within 4 h, and virtually complete inhibition was observed shortly before the time of death. Kidney and spleen displayed slight reduction of protein synthesis at 2 to 4 h and approximately 50% reduction during the terminal stage. It appeared that the highest concentration of the toxin occurred in the kidney, where it was degraded, but its greatest toxic effect took place in the liver.     

人甘露糖结合凝集素在小鼠肝脏细胞内表达

目的：在小鼠肝脏组织中表达人甘露糖结合凝集素（mannose-binding lectin，MBL）。方法：采用PCR方法从pGEMT-MBL质粒中扩增人MBLcDNA序列，克隆人pUC19载体中，限制性酶切鉴定及测序正确后，将MBLcDNA克隆人真核表达载体pcDNA3质粒中，构建成pcDNA3-MBL质粒，经尾静脉大容量快速注射pcDNA3-MBL质粒20μg，8h后处死小鼠，Western Blot方法检测小鼠肝脏组织和血清中人MBL，免疫组织化学方法检测小鼠肝脏组织中人MBL的表达情况。结果：成功扩增出人MBLcDNA序列并构建克隆载体pUC19-MBL，测序结果正确，成功构建pcDNA3-MBL真核表达载体。小鼠尾静脉注射pcDNA3-MBL质粒后8h，免疫组化检测证实肝细胞中有人MBL表达，Western blot方法检测发现血清和肝脏组织中出现人MBL蛋白。结论：真核表达载体pcDNA3-MBL裸质粒DNA静脉注射可以在小鼠肝脏中大量表达人MBL，并分泌人血，为临床纠正先天性低MBL患者的易感染状态提供了新的思路。