交泰丸对糖尿病、抑郁和失眠症“异病同治”的网络药理学机制分析

目的：从分子水平探讨交泰丸对糖尿病、抑郁和失眠症“异病同治”的作用机制。方法：运用网络药理学技术,通过数据库检索,以交泰丸的有效成分、作用靶点、治疗疾病种类为网络节点,使用Cytoscape构建相互作用网络,MAS进行生物信息学分析。结果：交泰丸中的20个化合物可作用于92个靶点发挥对3种疾病的治疗作用,HTR2A和HTR2C为交泰丸治疗糖尿病、抑郁和失眠的共同靶点。交泰丸治疗糖尿病的靶点主要富集在抗细胞凋亡生物过程和Toll样受体信号通路,治疗抑郁的靶点主要富集在信号转导生物过程和神经活性配体-受体相互作用通路,治疗失眠的靶点主要富集在5-羟色胺受体,磷脂酶C激活途径生物过程和神经活性配体-受体相互作用通路。结论：交泰丸具有多成分、多靶点、多途径的特点,该研究为交泰丸“异病同治”的作用机制提供参考。     

基于UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1抑制探讨二蒽酮的潜在肝毒性

目的 基于胆红素代谢酶UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1（UGT1A1）靶点评价何首乌中二蒽酮类成分的潜在肝毒性。方法 采用Discovery Studio 2.5软件的From Receptor Cavities模块对UGT1A1酶蛋白空腔进行自动识别，将反式-大黄素-大黄素二蒽酮（trans-EMD）、顺式-大黄素-大黄素二蒽酮（cis-EMD）与UGT1A1酶蛋白进行对接，确定待测单体与酶蛋白的作用方式以及连接的紧密程度；应用大鼠肝微粒体孵育体系，加入底物胆红素对照品溶液，评价trans-EMD、cis-EMD（0.037、0.110、0.330、0.990、2.970 μg·mL^-1）对UGT1A1酶的作用，同时启动Ⅰ、Ⅱ相代谢，以表观抑制常数（K_i）为评价指标；CCK-8法检测trans-EMD、cis-EMD（0.04、0.10、0.30、1.00、3.00 μg·mL^-1）作用24 h对HepaRG细胞的毒性作用；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验检测trans-EMD、cis-EMD（0.04、0.30、3.00 μg·mL^-1）作用24 h对HepaRG细胞UGT1A1 mRNA水平的影响。结果 分子对接实验显示trans-EMD、cis-EMD可与UGT1A1结合于site F，2个化合物10或10''位不同氢键构型可引起化合物空间构型的改变，影响其与UGT1A1的结合强弱；体外酶抑制实验表明trans-EMD、cis-EMD对UGT1A1酶均表现出竞争型抑制作用，抑制作用较强；细胞毒性实验表明trans-EMD（IC₅₀为1.333 μg·mL^-1）和cis-EMD（IC₅₀为1.715 μg·mL^-1）均表现出较明显的HepaRG细胞毒性，IC₅₀值较小；与对照组比较，trans-EMD和cis-EMD 0.30、3.00 μg·mL^-1均可显著下调UGT1A1 mRNA表达水平（P＜0.05），且作用存在浓度相关性。结论 具有大黄素（10→10''）大黄素或大黄素（10→10''）大黄素母核结构的二蒽酮化合物是一类具有潜在肝毒性的化合物，其毒性作用可能与抑制胆红素代谢酶UGT1A1相关。     

基于体外Pig-a基因突变试验的大黄素型蒽醌致突变风险评价

目的 对相同母核结构的8种大黄素型蒽醌类化合物开展体外Pig-a基因突变试验，分析不同大黄素型蒽醌结构与致突变性的关联。方法 L1578Y细胞分别与系列浓度的大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酸、羟基大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷作用4 h（有S9）或24 h（无S9），给药24 h后应用细胞计数板进行计数，计算细胞相对倍增速率（RPD）评价受试物细胞毒性；细胞表达8 d后经APC-anti-CD45和PE-anti-CD90.2标定后，使用流式细胞仪检测突变细胞（CD45^＋CD90^－）发生率。结果 所有受试物在有或无S9代谢活化条件下所设浓度组RPD均大于50%，未见明显细胞毒性作用，可排除试验中假阳性结果。在非S9代谢活化条件下芦荟大黄素25 μg·mL^-1组Pig-a基因突变率与溶媒对照组比较显著升高（P<0.001）； S9代谢活化条件下，与溶剂对照组比较，大黄素50 μg·mL^-1组，羟基大黄素6.25、12.5、25 μg·mL^-1组，大黄酚25、50、100 μg·mL^-1组和大黄酸12.5、25、50 μg·mL^-1组Pig-a基因突变率显著升高（P<0.05、0.01、0.001）。结论 羟基取代基的多寡及所在位点是蒽醌类化合物致突变性强弱的决定性因素，其体内致突变性及致癌性作用仍需进行大量体内研究证实。     

基于彗星实验的大黄素型单蒽酮体内外毒性研究

目的：采用人肝细胞HepaRG构建的2D、3D细胞培养模型和大鼠体内重复给药体系开展彗星实验，探讨不同模型对大黄素型单蒽酮毒性评价结果的影响。方法：2D和3D HepaRG细胞培养模型给予不同浓度的单蒽酮处理24、48、144 h后，采用彗星实验检测DNA损伤程度。25只雄性SD大鼠，按体质量随机分为0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）对照组、阳性对照甲磺酸乙酯（EMS）200 mg·kg-1组及单蒽酮6.5、65、650 mg·kg-1组，每组5只。对照组和单蒽酮各剂量组大鼠连续14 d灌胃给药，给药体积为15 mL·kg-1，阳性对照组大鼠连续3d灌胃给予EMS。末次给药3 h后麻醉取血及肝组织用于彗星实验。结果：单蒽酮质量浓度为10 μg·mL-1及以下时对2D培养的HepaRG细胞无明显损伤作用。而当单蒽酮质量浓度为10 μg·mL-1时，在3D模型中培养的肝细胞尾DNA含量及Olive尾矩（OTM）与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01），且存在一定剂量相关性。体内彗星实验结果表明，单蒽酮650 mg·kg1组大鼠肝细胞尾DNA含量及OTM均显著高于对照组（P<0.01），且各剂量组间存在一定剂量效应趋势；而各组大鼠的外周血有核细胞的尾DNA含量及OTM与对照组比较差异无统计学意义。结论：单蒽酮经3D培养模型代谢后存在肝细胞毒性，对大鼠肝细胞DNA损伤程度强于外周血细胞，推断其毒性与单蒽酮在肝脏中的代谢产物有关。     

雷公藤甲素致L5178Y细胞及小鼠Pig-a基因突变风险评价

目的：评价雷公藤甲素（TPL）的潜在致Pig-a基因突变风险。方法：采用小鼠淋巴瘤L5178Y细胞分别进行非S9（-S9）代谢和S9（+S9）代谢条件下体外实验。-S9代谢条件实验中，L5178Y细胞分为对照组（1%二甲基亚砜）、阳性对照甲基磺酸乙酯（EMS，500 μg·mL-1）组和TPL各质量浓度（6.3、12.5、25.0、50.0、100.0 ng·mL-1）组，受试物处理24 h后细胞计数，更换培养基培养8 d，表达结束后进行流式检测。+S9代谢条件实验中，L5178Y细胞分为对照组（1%二甲基亚砜）、阳性对照苯并芘［B（a）P，5 μg·mL-1］组和TPL各质量浓度（12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 ng·mL-1）组，受试物处理4 h后更换培养基，24 h后计数，培养8 d，表达结束后进行流式检测。体内Pig-a基因突变实验中，KM小鼠按体质量随机分为对照组（0.5%羧甲基纤维素钠）、阳性对照N-乙基-N-亚硝基脲（ENU，100 mg·kg-1）组和TPL各剂量（50、100、200 μg·kg-1）组。ENU组仅于首次给药日给药1次，TPL各剂量组连续给药28 d，分别于给药前和首次给药后14、28、42、56 d于小鼠眼内眦采血，血样经缓冲液洗脱后，进行anti-CD24-PE和anti-CD61-PE标记，采用免疫磁性分离架进行柱前和柱后样品的收集，利用流式细胞仪对样本进行检测计数，对突变率进行统计分析。结果：体外Pig-a基因突变实验结果表明，在-S9和+S9代谢条件下，与对照组比较，TPL各剂量组Pig-a基因突变率差异无统计学意义，且无剂量依赖性。体内Pig-a基因突变实验结果显示，与对照组比较，TPL组小鼠红细胞（RBC）和网织红细胞（RTC）CD24缺失差异无统计学意义，且无剂量依赖性。结论：TPL质量浓度为200 ng·mL-1及200 μg·kg-1以下时不会引起L5178Y细胞及KM小鼠发生Pig-a基因突变。     

基于化学计量学分析方法黄芪药材质量评价体系的建立

目的采用化学计量学分析方法,建立黄芪Astragalus membranaceus药材质量评价体系。方法收集20批不同产地不同品种黄芪药材,建立皂苷、黄酮类成分特征图谱。运用主成分分析、聚类分析方法深入研究不同黄芪药材中化学成分量的变化趋势及规律。结果 17个特征成分中,黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷ⅣV、芒柄花素和2个未知皂苷成分的差异显著,可作为区分不同产地或不同品种黄芪的关键性指标成分。结论通过化学计量学分析方法,建立的黄芪药材中皂苷、黄酮类成分评价体系专属性强、准确性高,可有效控制和评价黄芪药材质量。     

以MRP2/MRP3转运体为作用靶点的何首乌中肝毒性成分筛选

目的 建立以胆红素外排转运体多药耐药相关蛋白2（MRP2）、MRP3为靶点的何首乌中潜在肝毒性成分的快速筛选方法,并评价相关化合物的肝毒性大小。方法 采用计算机分子对接方法对何首乌中的主要单体成分进行高通量筛选,以MRP2、MRP3转运体底物胆红素为参考对象,将48个目标单体与MRP2、MRP3蛋白进行分子对接,实现虚拟筛选;采用CCK-8细胞计数试剂盒法考察目标单体对肝细胞HepaRG的毒性作用;应用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）测定目标单体对HepaRG细胞外排转运体MRP2、MRP3 mRNA相对表达量的影响。结果 MRP2对接结果显示,大黄素-6-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-（6?-O-乙酰基）-葡萄糖苷、反式二苯乙烯苷高于底物胆红素与MRP2对接打分值的80%;MRP3对接结果显示,大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-6-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-（6?-O-乙酰基）-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷及芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷高于底物胆红素与MRP3对接打分值的80%,因此上述单体可被初步推测为潜在肝毒性成分。体外细胞毒性实验结果表明,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷［半数抑制浓度（IC₅₀）为21.37 μg·mL^–1］和芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷（IC₅₀为6.96 μg·mL^–1）表现出较明显的肝细胞毒性,并可显著影响外排转运体MRP2、MRP3 mRNA表达水平（P<0.05）。结论 建立的以MRP2、MRP3为靶点的分子对接法初步筛选得到了何首乌中潜在的肝毒性成分,并对其毒性大小进行了评价,为何首乌的临床安全用药提供了参考。     

三明治肝细胞培养模型及其在中药肝毒性评价中的应用

随着中药的广泛使用,安全性逐渐成为影响其临床应用的关键因素之一。肝脏作为机体主要的代谢场所,是药物毒性反应主要的靶器官之一,而使用高效、简便且可靠的体外模型对中药肝毒性进行评价和预警是当前毒理学研究的热点。三明治肝细胞培养模型能表达肝细胞血窦侧与胆管侧的转运体,形成功能性胆小管网络,并具有代谢能力,是研究药物肝胆转运和胆汁淤积的重要工具。对三明治肝细胞培养模型的特点、构建、影响因素及其在中药肝毒性评价中的应用进行综述,为中药肝毒性的评价方法研究提供参考。     

经尺骨鹰嘴V形截骨治疗肱骨髁间骨折

目的探讨经尺骨鹰嘴V形截骨入路治疗肱骨髁间骨折的手术方法和疗效。方法采用经尺骨鹰嘴V形截骨内固定治疗肱骨髁间骨折25例,对手术入路方法及内固定方式等进行分析。结果术后随访8个月～18个月,平均15个月,肘关节功能评分参照Cassebaum标准,本组优19例,良3例,可2例,差1例,优良率为88%。结论经尺骨鹰嘴V形截骨是治疗肱骨间骨折较好的入路,具有暴露关节充分、减少软组织损伤、骨折易于复位、术后肘关节功能恢复良好及并发症低的特点。     

基于国家药品评价抽检探讨雷公藤多苷片的质量现状

雷公藤多苷片在临床上广泛用于治疗类风湿性关节炎、红斑狼疮、肾病综合征等自身免疫性疾病,疗效确切。2019年,国家药品抽验项目对市场上流通的172批雷公藤多苷片进行了质量评价,发现该品种质量状况较差,存在不同企业制剂化学成分、疗效和毒性差异大,同企业制剂批次间质量不稳定以及残留溶剂超过《中华人民共和国药典》 2015年版限度等问题,产生原因主要与药材质量参差不齐、生产工艺差异大及质量标准不完善等有关。为提高雷公藤多苷片质量,建议统一生产工艺、完善药材和制剂质量标准,同时开展一致性评价研究。