大肠埃希菌尿液分离株可移动遗传元件研究

目的调查大肠埃希菌尿液分离株中质粒、转座子和整合子等可移动遗传元件的存在情况。方法收集宁波市第一医院2008年10月～2009年3月患者尿液标本中分离的大肠埃希菌共28株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析10种可移动遗传元件:traA、trbC、tnpA、tnpU、tnp513、tnsA、merA、intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3。结果28株大肠埃希菌共检出3种基因:traA、trbC、intⅠ1,其余7种基因未检出;各种基因阳性率以traA最高25株(89.3%),intⅠ1次之19株(67.9%),trbC8株(28.6%);所有28株(100.0%)至少检出1种基因,各菌株基因阳性数1～3种,5株ECO同时检出3种基因,13株同时检出2种基因,10株仅检出1种基因。结论同时检测10种可移动遗传元件是国内首次报道,traA和intⅠ1基因阳性率较高,而trbC基因阳性率较低;可移动遗传元件介导各种耐药基因使受体菌表现为多药耐药,检出trbC基因为国内首次报道。     

阴沟肠杆菌AmpC酶阳性菌株中整合子参与的多重耐药

目的 筛选阴沟肠杆菌AmpC酶阳性菌株,探寻阳性菌株中整合子参与的耐药机制,指导合理用药,为临床治疗感染提供理论依据.方法 KB法药敏;纸片表型和三维试验筛选AmpC酶阳性菌株;PCR扩增ampC、ampD和整合子保守序列CS;PCRmapping研究阳性菌株中ampC和ampD在整合子中的位置.结果 74株阴沟肠杆菌对多种抗生素耐药.纸片表型筛选的阳性率为35.1%;三维试验为28.4%.PCR扩增定位的阳性率为89.2%;ampD为86.5%,整合子保守序列CS为49%.PCR mapping阳性率为33.3%,片段均小于1000bp.结论 除哑胺培南和丁胺卡那敏感外,74株阴沟肠杆菌对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类及氨基糖甙类抗生素的耐药率都>50%,为多重耐药菌株.纸片表型筛选更方便实用,适于临床常规开展;三维试验最准确可靠,但操作烦琐,难推广普及;PCR方法 操作复杂、试剂昂贵.插入的耐药基因可能位于整合子上游.     

鲍曼不动杆菌在不同感染人群中的耐药谱差异与Ⅰ类整合子特点的研究

目的分析鲍曼不动杆菌在不同人群中的耐药谱,为有效治疗鲍曼不动杆菌感染提供用药指导;调查Ⅰ类整合酶(IntI 1)和Ⅰ类整合子(Int 1)在医院感染鲍曼不动杆菌中的分布及其携带的耐药信息。方法用WalkAway 96SI全自动微生物鉴定/药敏系统对473株鲍曼不动杆菌进行鉴定和药敏;用PCR方法扩增135株菌的IntⅠ1和Int 1,对Int 1扩增产物进行克隆测序,分析其携带的耐药信息。结果笔者医院儿童病区分离株的耐药率除氨曲南为37.6%外,其他抗菌药物的耐药率都在15%以下;儿童病区与成人病区分离株的耐药性有显著性差异(P<0.05)。成人ICU分离株(占55.2%)除头孢哌酮/舒巴坦耐药率稍低(6.7%)外,其他抗菌药物的耐药率均在50%以上。ICU与普通病房分离株对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率无显著性差异(P>0.05),而对其他16种抗菌药物均存在显著性差异(P<0.05)。135株医院感染鲍曼不动杆菌中检出102株携带IntⅠ1基因,54株扩增出Int 1基因。部分扩增产物经克隆测序,共携带有8种耐药基因盒,分别为catB8,arr-3,aacA4,aadA1,aac(6’)-Ib,aac(3)-Ia,qacE和blaIMP-2。结论儿童病区与成人病区分离的鲍曼不动杆菌耐药性差异较大,临床用药不能同等对待;医院感染的鲍曼不动杆菌中IntⅠ1分布广泛,Int 1上主要携带氨基糖苷类耐药基因。     

多药耐药肺炎克雷伯菌9种可移动遗传元件标记研究

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌可移动遗传元件的存在状况。方法收集连云港市第二人民医院2008年11月-2009年10月住院患者标本中分离的多药耐药肺炎克雷伯菌20株,采用PCR法检测接合性质粒遗传标记(traAt、rbC)、转座子遗传标记(tnpUt、np513)、插入序列遗传标记(IS26、ISEcp1)、整合子遗传标记(intⅠ1、intⅠ2i、ntⅠ3)9种可移动遗传元件的遗传标记。结果 20株多药耐药肺炎克雷伯菌9种可移动遗传元件标记检出阳性率traA 10.0%t、rbC 60.0%t、npU 45.0%t、np513 60.0%I、S26 100.0%I、SEcp1 60.0%i、ntⅠ95.0%、intⅡ0i、ntⅢ0。结论该组20株多药耐药肺炎克雷伯菌可移动遗传元件遗传标记的携带率较高,尤其是插入序列26和Ⅰ类整合子;肺炎克雷伯菌多药耐药的表型可能与携带多种可移动遗传元件导致耐药基因高表达相关。     

肺炎克雷伯菌的耐药性与整合子基因相关性分析

目的研究肺炎克雷伯菌的整合子流行现状,探讨其与耐药性的相关性。方法常规方法收集肺炎克雷伯菌,用K-B法测定其对13种常用抗菌药物的耐药性;采用PCR扩增肺炎克雷伯菌整合子基因,产物用琼脂糖凝胶电泳法检测,判断整合子基因与敏感耐药之间的关系。结果 115株肺炎克雷伯菌检出整合子49株,检出率42.6%;整合子阳性的菌株耐药性较高,特别是对阿米卡星、头孢他啶、头孢噻肟、头孢呋辛、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶及左氧氟沙星等8种抗菌药物的耐药较为明显。结论肺炎克雷伯菌的耐药性与整合子基因密切相关,整合子对细菌的耐药起着重要作用。     

Integrons and beta-lactamases--a novel perspective on resistance

The understanding of microbial resistance to the β-lactam class of antibiotics in the form of β-lactamases has come a long way since the early discoveries of narrow-spectrum penicillinases. Integron-borne β-lactamases co-occurring with a wide array of non-β-lactam resistance genes, particularly pose an increasing threat to the nosocomial environment, giving rise to multi-drug resistant microbes with complex resistance patterns. Selection of potent β-lactamases through the use of non-β-lactam agents may be possible through integron-mediated resistance. It has become imperative that we should continuously strive to understand these complex mechanisms of antimicrobial resistance, not only to overcome them, but to avoid them from evolving further.     

鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药分子机制的研究

目的了解鲍曼不动杆菌对亚胺培南产生耐药的分子机制。方法收集对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌(imipenem resistant Acinetobacter baumannii，IRAB)无重复株共9株，采用琼脂稀释法进行药敏检测，协同抑制试验、质粒接合试验、Southern杂交、等电聚焦电泳、PCR扩增blavIM、blaIMP、baooxA-23、blaoA-24相关基因及整合子编码序列及其分子克隆和测序，以阐述其分子耐药机制。结果本组IRAB具有多重耐药性；耐药基因分子克隆、测序并结合等电聚焦分析证实均产OXA-23型碳青霉烯酶，质粒接合试验、Southern杂交显示其编码基因定位在染色体上。9株细菌均检测出Ⅰ型整合子基因结构(大小约1．2～4kb)；3株菌检测出Ⅱ型整合子基因结构(1．8～2kb)，均携带了多种耐药基因。结论产OXA-23型p内酰胺酶是本组鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素产生耐药性的重要原因；IRAB整合子基因携带的多种耐药基因与其多重耐药性相关。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子及其与ESBLs基因关系的研究

目的研究产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌整合子分布及其在ESBLs基因水平转移中的作用。方法采用PCR方法检测230株产ESBLs和197株非产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合酶基因intⅠ,分析Ⅰ类整合子与细菌耐药性的关系,与blaSHV、blaCTX和blaTEM编码基因的关联及经质粒转移的情况。结果产ESBLs和非产ESBLs菌株中Ⅰ类整合酶扩增阳性例数分别是137例(59.6%)和48例(24.4%),两组整合子阳性率差异有统计学意义(P<0.01);整合子阳性株对喹喏酮类、氨基糖苷类以及二者同时耐药的比率较高,依次为82.5%、81.8%和71.5%;产ESBLs菌株中blaSHV、blaCTX和blaTEM基因与整合子经质粒共同转移的频率分别是59.5%、95.5%和69.5%。结论Ⅰ类整合子在产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的分布明显高于非产ESBLs菌株,并参与产ESBLs菌株多重耐药性的形成;整合子与blaCTX经质粒共同转移的频率高于其他两类基因,提示CTX型酶具有更强的扩散优势。     

铜绿假单胞菌Ⅰ类整合酶基因在生物被膜的表达

目的 研究携带Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌在浮游状态和生物被膜状态Ⅰ类整合酶基因(intI1) mRNA的表达水平,探讨生物被膜中整合子相关的基因转移的分子机制.方法 采用竞争RT-PCR方法定量检测intI1在两株临床分离的铜绿假单胞菌(PA10和PA39)生物被膜菌和浮游菌中mRNA的表达水平.首先用PCR方法从Ⅰ类整合子阳性铜绿假单胞菌全基因组DNA中扩增竞争体DNA (cDNA),再以cDNA为模板体外转录合成竞争体RNA (cRNA);再将不同稀释度的cRNA分别与铜绿假单胞菌的浮游菌和生物被膜菌的总RNA提取物进行竞争RT-PCR,产物经电泳分析,以已知cRNA的量确定待测样本中intI1 mRNA的表达量.结果 两株铜绿假单胞菌在其浮游状态和生物被膜状态都有intI1 mRNA表达;两菌的浮游菌和生物被膜菌intI1 mRNA表达量分别近似相等;但两菌生物被膜菌intI1 mRNA的表达量都较其浮游菌高(约15倍).结论 铜绿假单胞菌在生物被膜状态下Ⅰ类整合子intI1 mRNA的表达上调是耐药性广泛传递和多重耐药性形成的可能原因之一.     

不动杆菌整合子基因及其耐药性关系的研究

目的：研究整合子系统在不动杆菌中的分布情况,探讨其与该菌耐药性之间的关系。方法：收集深圳市第二人民医院2005～2006年临床标本中分离的不动杆菌122株,采用VITEK-32全自动细菌分析仪测定细菌耐药表型;多重PCR方法检测整合子基因及类型。结果：43.4%（53/122）的不动杆菌检测出1类整合子,未检出2、3类整合子;携带与不携带1类整合子的菌株在耐药性上存在显著性差异（P〈0.05）。整合子阳性菌株更多的表现出多重耐药。结论：不动杆菌中只检出1类整合子,整合子与不动杆菌多重耐药关系密切。