水产品中耐药大肠埃希菌整合子与耐药基因盒研究

目的:利用水产品中分离到的耐药大肠埃希菌,研究整合子与耐药性的关系。方法:PCR扩增1类和2类整合酶及整合子,将其进行序列分析。结果:85株耐药大肠埃希菌中88%含有1类整合酶基因;其中68%能扩增此基因;1类整合子可变区PCR扩增产物谱型有17种;1类整合子最常见的基因盒有4种。还发现1株大肠埃希菌同时携带1和2两类不同的整合酶和整合子。结论:大肠埃希菌耐药性与整合子有相关性。     

Clonal dissemination of a single Shigella sonnei strain among Iranian children during Fall 2012 in Tehran,I.R. Iran

Shigella species are a common cause of bacterial diarrhea worldwide and the disease is characterized by seasonality. Shigella has been encountered by widespread resistance to commonly used antibiotics which is a serious concern. The aim of this study was to analyze the epidemiological relatedness of Shigella strains isolated from children during one year period by PFGE method and to investigate antimicrobial resistance determinants and cassettes among Shigella species. The occurrence of Shigella spp. in the present study was 1.32% during the study period and the majority of cases (56 (80%)) were occurred during autumn while Shigella sonnei was the most prevalent species identified. Multi-drug resistance phenotype was seen in 98.5% of total isolates with SXT^r/TE^r/TMP^r resistance pattern. Among the 70 Shigella spp. analyzed in this study, 16 isolates were positive for class I integron (int1⁺) with two types of gene cassette arrays (dfrA17/aadA5 and dfrA7).The class 2 integron was more frequently detected among the isolates (85.71%) with dfrA1/sat1/aadA1 (10%) and dfrA1/sat1 (75.71%) gene cassettes. The tetA and tetB determinants were observed in 75.7% and 21.42% of Shigella isolates and tet(A) was the foremost in S. sonnei and Shigella flexneri population. In this study 5 tetracycline resistant isolates had no tetracycline resistance gene (A–D) and no association was recognized between the value of MIC against tetracycline and the tet genes content of isolates. Fifty three of total Shigella isolates (75.7%) showed an identical PFGE patterns. Seven PFGE clusters observed in our study were composed of members with one to three band variations, which is indicative of closely related isolates. The major cluster (cluster C) constituted 75.7% of total isolates, all of which (except eight isolates) consonantly showed identical class 2 integron of 1500 bp which strongly suggests the dissemination of a single S. sonnei clone among the pediatric population in 2012 autumn in Tehran, Iran, in comparison with the equal data from the comparable time period from recent years.     

奇异变形菌中整合子分布及耐药性分析

目的 了解院内奇异变形菌中各类整合子的携带分布情况、阳性菌株可变区基因盒类型以及其与宿主菌耐药表型的相关性,从而为临床治疗和院内感染控制提供参考。方法 采用PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳等方法,将本院2016年1月—2018年12月份从临床标本中分离得到的150株奇异变形菌进行第1、2和3类整合子的筛选,并对整合子阳性菌株可变区进行测序分析以及宿主菌的耐药性进行相关性分析。结果 150株奇异变形菌中携带整合子的菌株共有91株,阳性率为60.7%,其中第1类整合子阳性菌株有30株,占20.0%;第2类整合子阳性菌株22株,占14.7%;同时携带第1和2类菌株39株,占26.0%;未筛出第3类整合子;在91株整合子阳性菌株中,86株可变区出现扩增产物条带,其余5株可变区未见扩增产物;第1类整合子阳性菌株可变区携带的耐药基因盒主要为AadA2、DfrA32,第2类整合子阳性菌株可变区携带耐药基因盒主要为DfrA1;可变区携带AadA2的菌株对庆大霉素和妥布霉素的耐药率显著高于整合子阴性菌株(P<0.01),可变区携带DfrA1或DfrA32的菌株对复方磺胺甲噁唑(即甲氧苄啶/磺胺甲噁唑)的耐药率也明显高于整合子阴性菌株(P<0.01);91株整合子阳性菌株对氨苄西林/舒巴坦、复方磺胺甲噁唑、环丙沙星、庆大霉素、头孢曲松、妥布霉素和左氧氟沙星的耐药率均显著高于整合子阴性菌株(P<0.01)。结论     

多药耐药肺炎克雷伯菌尿液分离株检出gyrA基因新亚型

目的了解1株多药耐药肺炎克雷伯菌的遗传学背景。方法采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析1株多药耐药肺炎克雷伯菌可能存在的65种耐药相关基因:包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类耐药相关基因及可移动的遗传元件(整合子、转座子、接合性质粒)遗传标记、抗菌制剂外排泵基因。结果该株多药耐药肺炎克雷伯菌耐β-内酰胺类药物基因检出blaTEM,耐氨基糖苷类药物基因检出aph(3′)-Ⅰ,耐喹诺酮类药物基因检出gyrA,Ⅰ类整合子遗传标记检出intⅠ1,转座子遗传标记检出tnp513,接合性质粒遗传标记检出trbC;抗菌制剂外排泵基因检出qacE△1-sul1,gyrA基因是新亚型(GenBank登录号:JN232083),83位密码子突变方式为TCG→TTC,导致氨基酸从丝氨酸(S)→苯丙氨酸(F);87位密码子突变方式为GAC→GCC,导致氨基酸从天冬氨酸(D)→丙氨酸(A)。结论携带多药耐药基因和抗菌制剂外排泵基因是这株肺炎克雷伯菌呈多药耐药的主要原因,携带多种可移动遗传元件使细菌的耐药性在同种细菌菌株之间,甚至不同种细菌菌株之间得以快速传播。     

关于整合子在鲍氏不动杆菌多药耐药性中的作用

目的研究来源于沈阳地区的多药耐药鲍氏不动杆菌Ⅰ类整合子中耐药基因盒的携带情况。方法采用纸片扩散法筛选50株多药耐药鲍氏不动杆菌,采用PCR方法检测整合子的携带情况并对其进行DNA序列测定。结果50株菌株中有32株检测到Ⅰ类整合子,测序结果显示,共携带2种已知结构基因盒(arr-3、aacA4)。结论整合子在医院鲍氏不动杆菌不同菌株间水平传播的潜在危险性。     

老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子的研究

目的了解老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子遗传标记携带情况。方法采用微量稀释法做耐药菌株的药敏试验,聚合酶链反应(PCR)扩增检测intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3基因,扩增产物纯化后基因测序。结果大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60.0%,对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药率为95.0%,对第三代头孢菌素耐药率为100.0%(均为产ESBLs菌株),且与Ⅰ类整合子的存在密切相关,intⅠ1基因的阳性16株(80.0%),intⅠ2、intⅠ3基因均阴性。结论大肠埃希菌的耐药与耐药基因传递机制-整合子密切相关,Ⅰ类整合子的存在加快了细菌耐药性的传播。     

整合子及其相关基因盒在临床产ESBLs肺炎克雷伯菌的分布

目的检测Ⅰ~Ⅲ类整合子及Ⅰ类整合子相关基因盒在产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株中的分布,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法用K-B纸片扩散法对108株产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株进行药敏试验;采用聚合酶链反应(PCR)分析108株产ESBLs肺炎克雷伯菌株的Ⅰ~Ⅲ类整合子;对Ⅰ类整合子阳性菌进行整合子相关基因盒检测。结果108株菌中有58株(53.70%)含有Ⅰ类整合子,未检测到Ⅱ类整合子及Ⅲ类整合子阳性菌;在Ⅰ类整合子阳性菌中,有52株携带Ⅰ类整合子相关基因盒,占89.66%;分离自同一科室的部分菌株携带大小相同的基因盒;Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率高于整合子阴性的菌株。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。     

肠道杆菌耐药性及其耐药相关Ⅰ类整合子可变区结构与进化

目的：了解大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌临床菌株耐药性,及其Ⅰ类整合子分布、可变区耐药基因盒与分子进化关系。 方法：采用K-B法检测大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌对12种药物的敏感性。采用PCR及其产物测序检测上述菌株中Ⅰ类整合子携带率及可变区耐药基因盒。采用Clustal X和MEGA软件分析Ⅰ类整合子基因盒中耐药基因分子进化关系。 结果：鲍曼不动杆菌对临床常用青霉素类和头孢菌素类抗生素耐药率为54.2%～100%,大肠埃希菌和阴沟肠杆菌对菌素类抗生素耐药率也高达41.6%～62.5%。62.5%（15/24）大肠埃希菌、67.9%（19/28）阴沟肠杆菌、83.3%（20/24）鲍曼不动杆菌检出Ⅰ类整合子,81.5%（44/54）Ⅰ类整合子呈现为4种单条带谱型,其余为3种双条带谱型。Ⅰ类整合子可变区耐药基因盒中存在aac(6′)、sad(3″)、aad(2″)、cat(4′)和dfr（7、A13和15）耐药基因,可分别介导细菌对氨基糖苷类、氯霉素和磺胺类抗生素耐药。根据二氢叶酸还原酶基因序列差异,上述菌株携带的Ⅰ类整合子可分成4个分子进化组。 结论：上述肠道杆菌耐药情况严重并携带高含多种耐药基因盒的Ⅰ类整合子,Ⅰ类整合子有4条不同的进化途径。     

I类整合子与铜绿假单胞菌耐药的相关性研究

目的 研究I类整合子在铜绿假单胞菌临床分离株中的分布及耐药性情况。方法 PCR法检测铜绿假单胞菌中 I 类整合子基因,对整合酶阳性菌株与铜绿假单胞菌PU21行转移接合实验,采用琼脂对倍稀释法分析整合酶阳性菌株及接合转移成功菌株的药敏情况。结果 57 株铜绿假单胞菌经PCR法检测30株含有 I 类整合酶,药敏结果显示 I 类整合子阳性菌株较阴性菌株耐药率明显升高（P<0.05）,I 类整合子阳性菌株21株转接成功,转移接合子与 I 类整合子阳性菌株比较,对亚胺培南、复方新诺明和环丙沙星的耐药性有所降低。结论 铜绿假单胞菌中有 I 类整合子的分布,I 类整合子阳性菌株及转移接合子较阴性菌株对多种抗生素更易产生耐药。     

25株耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药机制研究

目的:了解临床分离的耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药谱特征、同源性及碳青霉烯酶的产生状况。方法:采用PHOENIX100自动化细菌鉴定药敏系统及纸片扩散法进行药敏试验;基因外重复回文序列PCR(REP-PCR)法分析其基因同源性;聚合酶链反应(PCR)检测β内酰胺酶基因,并对扩增出的碳青霉烯酶基因进行序列分析;对整合子基因进行PCR检测。等电聚焦电泳测定β内酰胺酶的等电点。碱裂解法提取质粒。结果:2003年1月～2005年12月我院共分离到30株碳青霉烯类中介或耐药的鲍曼不动杆菌,其中儿科ICU病房9株,外科ICU病房12株。菌株表现为多重耐药,但儿科ICU与其他病房分离株的耐药谱有差异。对存活的非重复的25株菌进行检测,REP-PCR图谱分为A、B、C、D4个基因型,A型7株集中在儿科ICU,16株属于B型,C型和D型各1株。PCR检出10株菌携带OXA-23基因,其中包括7株儿科ICU的碳青霉烯类耐药菌,而外科ICU分离的耐药菌株不具有OXA-23基因。所有菌株均未能检出OXA-24、IMP及VIM基因。有20株携带PER-1型酶基因。22株细菌检测出Ⅰ型整合子基因结构(大小约180～3500bp)。结论:本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致,儿科ICU分离的菌株对碳青霉烯类耐药的主要机制为产生OXA-23型酶,外科ICU分离的菌株对碳青霉烯类耐药的主要机制则可能为膜通透性降低的原因。