一起O139群霍乱弧菌引起的食物中毒菌株的耐药性分析

目的：探讨多重耐药0139群霍乱弧菌形成的可能分子机制。方法：对杭州一起暴发的65株0139群霍乱菌株进行药敏试验，取其中20株多重耐药菌株进行结合性转座子样SXT元件标志基因int SXT和Ⅰ类整合子的PCR检测，并对Ⅰ类整合子基因盒区扩增产物应用限制性酶切和DNA测序分析携带的基因盒。结果：65株0139群霍乱菌株中，56株(86．2％)均呈同一耐药谱，对11种抗生素多重耐药，仅对诺氟沙星、环丙沙星及丁胺卡那敏感。20株多重耐药菌株中，SXT元件标志基因int SXT均阳性，Ⅰ类整合子5’保守区、基因盒区和3’保守区也均阳性。其携带基因盒为氨基糖苷腺苷酰基转移酶基因nndA2。结论：此次暴发的多重耐药的0139群菌株均携带有SXT元件，Ⅰ类整合子在多重耐药菌株的形成中起了一定的作用。     

DNA fingerprinting and antimicrobial susceptibility pattern of clinical and environmental Acinetobacter baumannii isolates: a multicentre study

Background and aim: The aims of this study were to establish antibiotic profile and the molecular epidemiology of Acinetobacter baumannii isolates, with considering the effectiveness of control infection measures across three hospitals in the Kurdistan, west part of Iran.

Methods: Fifty-four A. baumannii isolates were collected from patients and environmental specimens. Antibiotic susceptibility patterns (Antibio-type) were evaluated for 17 different antibiotics and MIC for imipenem was done. Isolates were assessed for the presence of metallo-beta-lactamases (MBLs), class 1 and 2 integrons, and integrated gene cassettes and bla_{OXA-likefamilies} genes. Repetitive-sequence-based PCR (REP-PCR) was done for analysing clonality and relativeness of isolates (REP-type).

Results: Antibiotic susceptibility patterns distinguished 11 distinct Antibio-types and REP-PCR showed three clusters with 20 subclusters, mostly belonged to two clonal subgroups, A1 and B1. bla_OXA-51 and bla_OXA-23 were detected in 100% (54/54) and 52% (28/54), respectively, while bla_OXA-24-like and bla_OXA-58 were not present in isolates. MBLs were not detected, but, however, high rate of imipenem resistance was observed (52%). MIC₉₀ of imipenem was 16 mg/ml. Class 1 integrons were detected in 11% (6/54) of isolates followed by 24% (13/54) of class 2. Both classes of integron genes were detected in 15% (8/54) of isolates. Integrated gene cassettes were in low level (11% of class 1 harboring isolates). Two arrays of gene cassettes were revealed, dfrA5-like and dfrA17-aadA5.

Conclusion: Infection control surveillance should be considered as a serious manner, even the superficial eradication of hospital acquired pathogens. MBL genes were not induced carbapenem resistance in studied hospital settings, but bla_{OXA-51 & 23} contributed in imipenem resistant. Integrons had a little share in resistance of A. baumannii isolates.     

整合子相关的铜绿假单胞菌耐药性分析

目的研究多重耐药铜绿假单胞菌中1、2类整合酶基因及1类整合子标志基因的携带情况。方法用纸片扩散法做耐药菌株的药敏试验。聚合酶链反应(PCR)扩增检测intI1、intI2整合酶基因,1类整合子标志基因su l 1和qacEΔ1,扩增产物纯化后基因测序分析。结果铜绿假单胞菌对3类或3类以上抗生素耐药,大多对阿莫西林-克拉维酸、庆大霉素、环丙沙星和哌拉西林耐药,且与1类整合子的存在密切相关。intI1整合酶基因阳性率为97.5%(78/80),而intI2整合酶基因的阳性率为6.25%(5/80);1类整合子的su l 1和qacEΔ1的阳性率分别为92.5%(74/80)和81.2%(65/80)。结论铜绿假单胞菌的耐药与耐药基因传递的新机制———整合子系统密切相关。     

阴沟肠杆菌Ⅰ类整合酶基因及质粒AmpC酶基因检测

目的明确我院临床分离的阴沟肠杆菌中Ⅰ类整合酶基因(intⅠ1)、qacE△1-sulⅠ基因和质粒Am鄄pC酶基因(AmpCMIR、AmpCDHA)存在状况。方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对20种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测耐药基因。结果该20株菌呈现多重耐药,对亚胺培南和美罗培南均敏感,对阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩和头孢西丁完全耐药,头孢吡肟和复方新诺明的耐药率分别为25.0%和85.0%,对氨基糖苷类抗生素的耐药率在60.0%～90.0%之间,其余的耐药率在80.0%～95.0%之间。intⅠ1、qacE△1-sulⅠ、MIR和DHA基因的阳性株数(%)分别为19株(95.0%)、17株(85.0%)、17株(85.0%)、1株(5.0%)。结论我院临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重,intⅠ1、qacE△1-sulⅠ和MIR基因携带率很高。在阴沟肠杆菌中检出intⅠ1、qacE△1-sulⅠ以及质粒型AmpCMIR基因在我国大陆均属首次报道。     

鲍曼不动杆菌携带Ⅰ型整合子与耐消毒剂基因研究

目的 研究鲍曼不动杆菌所携带的Ⅰ型整合子与耐消毒剂基因.方法 琼脂扩散法检测菌株对7种抗菌药物的药敏结果;用聚合酶链反应(PCR)方法检测Int-1、qacA/B、qacE△1-sul1、qacG、smr、ArmA、Isaba1和tnp513共8种基因.结果 24株菌对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、四环素、头孢哌酮/舒巴坦、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、阿米卡星等抗生素敏感率分别为12.5％、4.2％、4.2％、0.0％、12.5％、8.3％和8.3％;PCR结果显示,24株菌qacA/B、qacG、tnp513和smr4种基因检测结果为阴性,携带qacE△1-sul1、ArmA、Isaba1、dfrA17和Int-1基因,且dfrA17位于Ⅰ型整合子基因盒内.结论 本组鲍曼不动杆菌对广谱抗生素耐药严重,并携带了Ⅰ型整合子和消毒剂耐药基因.应规范此类抗生素的使用并采取相应的消毒措施防止多重耐药菌株在院内传播.     

老年人亚胺培南耐药铜绿假单胞菌耐药性研究

目的 明确我院老年病人临床分离铜绿假单胞菌的耐药性、同源性及耐碳青霉烯菌株的基因型。方法 收集我院2006年5月-2009年5月自临床老年病人分离的262株铜绿假单胞菌,纸片扩散法测定其对16种抗菌药物的耐药性;琼脂稀释法和E test法测定耐碳青霉烯菌株对14种抗菌药物的MIC值,PCR扩增及克隆测序分析金属酶基因型。脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析携带金属酶基因型菌株的同源性。结果 262株铜绿假单胞菌中筛选到104株耐碳青霉烯。104株耐碳青霉烯铜绿假单胞菌对氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦两个含舒巴坦制剂药物耐药率分别为78.9％和35.9％,对多黏菌素E耐药率最低为6.0％,对米诺环素耐药率58.3％,其余抗菌药物耐药率均大于70.0％;104株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中12株携带金属酶基因,10株检测到有携带VIM-2基因的1类整合子。PFGE分型中12株菌株属于5个克隆株。结论 在我院流行的亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中,金属酶基因不是最主要的基因型,金属β-内酰胺酶均为VIM-2型金属酶,耐药基因盒分布于不同的1类整合子中,整合子播散是最主要的流行方式。     

第1类整合子中aadA2基因翻译起始位点的确定

目的 确定第1类整合子中aadA2基因能否从上游无核糖体结合位点的密码子ATG起始翻译并合成有功能的蛋白.方法 定点突变含有不同翻译起始密码子的aadA2基因盒,并连同上游的可变区启动子分别克隆入质粒pACYC184中,转化大肠埃希菌JM109,免疫印迹检测含有不同翻译起始密码子的aadA2基因的翻译产物,用微量肉汤稀释法检测链霉素对含有不同翻译起始密码子aadA2基因的大肠埃希菌JM109的最小抑菌浓度.结果 aadA2基因可从上游无核糖体结合位点的密码子ATG及上游具有核糖体结合位点的密码子GTG起始翻译,同时在GTG密码子下游还存在着起始翻译密码子,其翻译产物在免疫印迹中均可与抗氨基糖苷-3″-腺苷酰基转移酶多克隆抗体产生特异性杂交条带,并赋予宿主细菌对链霉素不同水平的耐药.结论 当位于第1类整合子第1位基因盒中,aadA2基因可从上游无核糖体结合位点的密码子ATG起始翻译并合成有功能的蛋白,这一结构特点使得整合入第1类整合子的基因盒,不需带有核糖体结合位点即可起始基因盒中相应读码框的翻译,从而有利于第1类整合子表达从外界环境中捕获的基因.     

下呼吸道标本多药耐药鲍氏不动杆菌整合子的检测

目的研究临床下呼吸道标本分离多药耐药鲍氏不动杆菌中整合子的分布与分型,分析整合子在细菌多药耐药中的作用。方法标准纸片扩散法(K-B)检测耐药性,PCR方法扩增整合酶基因,经电泳后检测扩增产物,2χ检验进行统计学分析。结果在分离出的408株细菌中,共有76株检出整合子,总体检出率为18.6%,其中Ⅰ类整合子检出率为16.9%,Ⅱ类整合子检出率为1.7%;整合子阳性株对多种抗菌药物的耐药率明显高于整合子阴性株,亚胺培南、美罗培南对所有菌株敏感。结论整合子对细菌多药耐药性的产生和传播起着重要作用,应加强临床细菌基因水平的耐药监测,采取有效措施防止耐药性的传播。     

常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子标志物检测

目的了解浙江省湖州解放军第98医院从临床分离的常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子存在状况。方法从临床分离鲍曼不动杆菌60株、铜绿假单胞菌30株、阴沟肠杆菌20株、嗜麦芽窄食单胞菌19株和黄杆菌属15株(脑膜败血性黄杆菌12株、产吲哚金黄杆菌3株),采用聚合酶链反应及序列分析的方法检测Ⅰ类整合子标志物 int Ⅰ 1及qacE△1 基因。结果鲍曼不动杆菌、铜绿似单胞菌、阴沟肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌和黄杆菌属中 int Ⅰ 1基因阳性率分别为58.3%、0、95.0%、0和0,qacE△1基因阳性率分别为83.3%、83.3%、85.0%、10.5%和0。合计144株中 int Ⅰ 1和 qacE△1阳性株数(%)分别为54株(37.5%)、94株(65.3%),Ⅰ类整合子标志物总阳性率为68.1%(98/144)。结论解放军第98医院从临床分离的常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子携带率相当高。     

整合子阳性不动杆菌属细菌同源性研究

目的:探讨深圳市第二人民医院临床分离的整合子阳性不动杆菌属同源性及分布情况。方法:采用肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)方法对53株整合子阳性不动杆菌菌株进行同源性分析。结果:53株整合子阳性不动杆菌菌株可分为22种不同的基因型,其中以e型(10/53)、s型(18/53)两种基因型为主,占整合子阳性菌株的52.8%;含arr3-aacA4基因盒的整合子分布于11种不同基因型的克隆株,仅在s型菌株中检测到含aacC1-orfP-orfQ-aadA1a基因盒;e型不动杆菌菌株只分布在神经外科和创伤外科病房;s型不动杆菌菌株主要分布在ICU病房和普外科病房。结论:ERIC-PCR同源性分析很难区分基因盒在菌株之间的传播,而其与暴发流行却有明确的关联。