免疫学技术教学改革初探

当前,《免疫学技术》已成为高等医学院校研究生课程的必修课或选修课,其教学目的是使研究生了解本学科的新技术、新方法,掌握基本的技术和操作技能,并培养学生的实际能力     

伤寒Ty21a-CpG佐剂减毒活疫苗诱导抗体应答的研究

目的探讨人工合成的CpG-ODN 作为佐剂对伤寒Ty21a减毒活疫苗诱导小鼠产生抗体的影响.方法将不同剂量的人工合成的含CpG ODN的硫代磷酸寡核苷酸作为佐剂与伤寒Ty21a减毒活疫苗混合,以小鼠作为免疫动物进行免疫接种,采用试管凝集法检测免疫小鼠的血清特异性抗体滴度.结果 CpG-ODN 30μg佐剂组与不用佐剂的Ty21a减毒活疫苗相比较,应用CpG-ODN 组小鼠产生更强的抗体应答,抗体几何均数滴度相比有明显的差异.结论 CpG-ODN作为佐剂可促进伤寒Ty21a减毒活疫苗诱导昆明小鼠产生特异性免疫应答.     

伤寒患者血清可溶性白细胞介素2受体的检测

伤寒是一种由伤寒沙门氏菌引起的消化道传染疾病，其主要致病因素为内毒素（ＬＰＳ），ＬＰＳ能促进Ｔ、Ｂ细胞成熟，激活ＮＫ细胞、单核细胞和巨噬细胞，释放淋巴因子。淋巴细胞活化时，白细胞介素２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）不仅表达于细胞膜上，而且可以游离状态存在，即称...     

病原菌影响巨噬细胞极化的研究进展

巨噬细胞作为固有免疫系统中的重要一员,具有吞噬、抗原呈递、杀伤病原体等功能,在早期控制病原菌感染中发挥重要作用。病原菌可诱导巨噬细胞发生M1/M2型极化而参与机体对病原菌感染的免疫应答。病原菌运用不同的策略诱导巨噬细胞极化,对感染性疾病转归产生重要的影响。     

Toll样受体信号介导细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡在病毒、细菌等感染的过程中和肿瘤等疾病的发生发展中起至关重要的作用。Toll样受体(TLR)存在于巨噬细胞、肿瘤细胞等细胞表面,能直接识别并结合病原微生物和宿主细胞表面的病原相关分子模式,然后通过髓样分化因子88/Fas相关死亡结构域/caspase-8、TIR结构域接头蛋白/蛋白激酶/干扰素调节因子和核因子κB路径等信号途径对巨噬细胞、肿瘤细胞等细胞的凋亡起调节作用。随着对TLR介导的细胞凋亡中Fas相关死亡结构域、TIR结构域接头蛋白等多种信号分子的深入研究,有助于了解它们在细胞凋亡中的作用,并为感染和肿瘤等疾病的分子靶向治疗提供新的目标。     

过表达microRNA-7通过下调CGG结合蛋白1的表达抑制人肺癌细胞生长

目的探讨过表达microRNA-7(miR-7)对人肺癌细胞体内外生长的作用和可能机制。方法利用真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(p-miR-7),体外瞬时转染95D人肺癌细胞,MTT法和克隆形成实验检测95D细胞的增殖变化;免疫荧光技术检测95D细胞Ki-67和CGG结合蛋白(CGGBP1)的表达;建立人肺癌裸鼠肿瘤模型,肿瘤局部注射p-miR-7真核表达载体,测量肿瘤大小并观察小鼠生存时间;实时PCR检测肿瘤组织中miR-7表达水平;免疫组织化学技术检测组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达。结果过表达miR-7可明显抑制肺癌细胞的体外增殖(P0.05),Ki-67和CGGBP1的表达显著减少(P0.05);体内实验结果显示,局部注射p-miR-7组中miR-7表达水平明显增加,同时荷瘤裸鼠的肿瘤生长缓慢,生存时间明显延长(P0.05)。肿瘤组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达量均显著减少(P0.05)。结论过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体内外生长,可能与其下调肿瘤生长相关蛋白CGGBP1的表达有关。     

遵义市汉族居民Eales病人类白细胞抗原基因多态性和结核感染的相关性研究

目的 探讨遵义市汉族Eales病与人类白细胞抗原(HLA)-A/B、HLA-DRB/DQB基因多态性和结核感染的相关性.方法 采用聚合酶链反应序列特异引物法(PCR-SSP)检测Eales病组、肺结核组、正常对照组HLA-A/B、HLA-DRB/DQB共59个等位基因分布频率,计算各组间优势比(OR)及95%可信区间(CI);对Eales病组与肺结核组的HLA-A*02基因分布频率做相关分析.Eales病组为临床确诊的Eales病患者47例;肺结核组为痰结核菌培养确诊肺结核并排除眼部疾病的患者36例;正常对照组为与研究组患者年龄、性别、民族等因素无差异的100名健康人.Easle病组中,资料完整的39例Eales病患者根据病史及纯结核菌素试验(PPD)检查结果分为4组,a组为既往或现在患肺结核患者,12例;b组为无结核感染患者,27例;c组为PPD检查阳性者,27例;d组为PPD阴性者,12例.结果 Eales病组HLA-A*02(OR=9.719,OR 95%CI为4.377～21.580,P=0.000)、HLA-B*07(OR=11.605,OR 95%CI为2.397～56.191,P=0.001)基因分布频率高于正常对照组,差异有统计学意义,HLA-A*11基因分布频率低于正常对照组,差异有统计学意义(OR=0.495,OR 95%CI为0.245～1.000,P=0.048).肺结核组HLA-DRB*16(OR=5.215,P=0.049)、HLA-A*02(OR=18.87,P=0.000)基因分布频率高于正常对照组,差异有统计学意义,HLA-A*24基因分布频率低于正常对照组,差异有统计学意义(OR=5.690,P=0.015).a组与b组,c组与d组比较:HLA-A*02、HLA-A*11、HLA-B*07基因分布频率差异无统计学意义.在Eales病组、肺结核组、正常对照组间,HLA-A*02、HLA-A*24、HLA-B*07、HLA-DRB*16基因总体分布频率比较,差异均有统计学意义,进一步行x2分割法在Eales病组、肺结核组间两两比较,肺结核组HLA-A*24基因分布频率低于Eales病组,差异有统计学意义(x2=7.289,P=0.007),而HLA-A*02基因分布频率无统计学意义(OR=0.515,P=0.202).Eales病组与肺结核组HLA-A*02基因相关性比较,差异无统计学意义(列联系数0.412,P=0.064).结论 Eales病可能存在遗传易感性,HLA-A*02和HLA-B*07可能是遵义市汉族Eales病患者的遗传易感基因,而HLA-A*11可能是保护基因;HLA-DRB*16和HLA-A*02可能是遵义市汉族肺结核病的易感基因,而HLA-A*24可能是保护基因.HLA-A*02可能是遵义市汉族人群中Eales病和肺结核病共同的易感基因.

Abstract：

Objective To analyze the relationship of human leukocyte antigen alleles (HLA-A/B,HLA-DRB/DQB) polymorphism and Eales disease, tuberculosis infection in a Han population in Zunyi city of China. Methods The subjects were analyzed by case-control study, which consisted of three groups including Eales disease group (47 patients), pulmonary tuberculosis group (36 patients) and normal control group (100 healthy people). Thirty-nine patients in Eales disease group who had complete history were divided into 4 subgroups according to the history and tuberculin PPD test. Twelve patients with past or present pulmonary tuberculosis were in group A, 27 patients without pulmonary tuberculosis were in group B, 27 patients with positive PPD test were in group C, and 12 patients with negative PPD test were in group D. Fifty-nine alleles of HLA-A/B and HLA-DRB/DQB were analyzed by polymerase chain reaction with sequence-specific primers (PCR-SSP) in all subjects. Odds ratios between each group (OR) and 95%confidence interval (CI) were calculated; Frequency distribution of HLA-A * 02 gene were analyzed for the group A and the TB group. Results The frequency distribution of HLA-A* 02 (OR=9. 719, OR 95% CI:4. 377-21. 580, P=0. 000) and HLA-B* 07 (OR= 11. 605, OR 95% CI: 2. 397-56. 191, P=0. 001) alleles in Eales disease group were obviously higher than that in normal control group, but frequency distribution of HLA-A * 11 (OR = 0. 495, OR 95% CI: 0. 245-1. 000, P= 0. 048) in Eales disease group was obviously lower than that in normal control group. There was no significant difference in frequency distribution of HLA-A * 02, HLA-A * 11 and HLA-B* 07 alleles between groups A and B, and between groups C and D (P＞0. 05). The distribution frequency of HLA-A * 02, HLA-A * 24, HLA-B * 07 and HLA-DRB * 16alleles among Eales disease group, pulmonary tuberculosis group and control group was statistically different (P＜0. 05). The frequency distribution of HLA-A * 24 alleles in pulmonary tuberculosis group was lower than that in Eales disease group (x2 = 7. 289, P = 0. 007), but the frequency distribution of HLA-A * 02 alleles had no significant difference (OR=0. 515, P=0. 202) between two groups. Conclusions The alleles of HLA-A * 02 and HLA-B * 07 may be genetic predisposing genes of Eales disease, but HLA-A * 11 alleles may be protective gene in population of Han nationality from Zunyi city. The alleles of HLA-DRB * 16 and HLA-A * 02 may be genetic predisposing genes of pulmonay tuberculosis. The alleles of HLA-A * 02 may be a common susceptible gene for Eales disease and pulmonary tuberculosis. HLA-A * 11 and HLA-A * 24 alleles were protective genes of Eales disease and pulmonary tuberculosis respectively.     

重组人白细胞介素10抗家兔皮肤移植排斥反应中Toll样受体的变

背景：现已认识到Toll样受体的活化与器官移植后排斥反应的关系十分密切,Toll样受体与移植免疫也逐渐成为研究的热点问题。 目的：观察重组人白细胞介素10抗皮肤移植排斥反应中受体兔血清Toll样受体的变化。 方法：制备兔背部缺损模型,将受体家兔分为6组,重组人白细胞介素10低、高剂量组、环孢素A低、高剂量组、联合用药组和生理盐水组,分别于移植前1 d开始肌肉注射5,10 μg/(kg•d)重组人白细胞介素10,5,10 mg/(kg•d)环孢素A,5 μg重组人白细胞介素10+5 mg环孢素A,1 mL/d生理盐水,连续用药10 d。 结果与结论：各组移植后Toll样受体4,7,8,9水平均较移植前升高,移植后14 d达到高峰。移植后4,7 d生理盐水组Toll样受体4水平高于联合用药组(P < 0.05)。移植后7 d生理盐水组Toll样受体7高于其他各组(P < 0.05),Toll样受体8高于环孢素A高剂量组(P < 0.05)。各组移植不同时间点Toll样受体9水平差异无显著性意义(P > 0.05)。提示重组人白细胞介素10抗家兔皮肤移植反应中,Toll样受体4,7,8,9水平在皮肤移植后明显升高,当皮片排斥后达到高峰,之后逐渐下降,表明Toll样受体参与排斥反应过程。     

CpG基序增强DNA疫苗免疫原性研究进展

DNA疫苗广泛用于细菌、病毒性疾病以及肿瘤等的预防和治疗研究,但已报道的临床实验研究表明并未取得良好的免疫效果.未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)具有较强的免疫佐剂特性.近年来有不少学者作了关于CpG-ODN增强DNA疫苗免疫原性的研究,本文就有关研究进展作一综述.     

热休克蛋白16.3多克隆抗体的制备

目的大肠杆菌表达Hsp16.3,制备其多克隆抗体。方法设计引物,从H37Rv基因组中扩增出目的片段Hsp16.3,pET28a-Hsp16.3质粒的构建、克隆和表达。对His-Hsp16.3进行诱导、表达和纯化。用纯化好的蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,用ELISA检测抗血清中多抗的效价,用Western blot法检测多克隆抗体的生物活性。结果重组质粒pET28aHsp16.3在E.coli BL21(DE3)中成功表达,SDS-PAGE结果显示在His-Hsp16.3的相对分子质量(Mr)约为20 000。制备的多克隆抗体效价为1∶800,且特异性较好。结论成功的克隆、表达、纯化出His-Hsp16.3,并且成功制备了抗Hsp16.3多克隆抗体。