局部湿热联合微波消融对小鼠乳腺癌动物模型中T淋巴细胞的比例和功能的影响

目的：研究局部湿热联合微波消融对乳腺癌荷瘤小鼠脾细胞中T淋巴细胞的比例和功能的影响,并探讨其意义。方法：建立小鼠乳腺癌实验动物模型;用FACS检测局部湿热联合微波消融处理后荷瘤小鼠脾细胞中T细胞及其CD4亚群和CD8亚群的比例变化;体外增殖实验观察脾细胞中T淋巴细胞增殖功能;FACS检测T淋巴细胞IFN-γ的表达水平。结果：局部湿热联合微波消融处理组荷瘤小鼠脾细胞中T淋巴细胞的比例明显增高（P〈0.05）,其中CD4＋T细胞比例变化最显著,并且T淋巴细胞的增殖能力和IFN-γ的表达也明显增加（P〈0.05）。结论：局部湿热联合微波消融术可以较单一热疗方法更有效的抑制肿瘤生长。     

重组人白细胞介素10抗家兔皮肤移植排斥反应中Toll样受体的变化

背景:现已认识到Toll样受体的活化与器官移植后排斥反应的关系十分密切,Toll样受体与移植免疫也逐渐成为研究的热点问题。目的:观察重组人白细胞介素10抗皮肤移植排斥反应中受体兔血清Toll样受体的变化。方法:制备兔背部缺损模型,将受体家兔分为6组,重组人白细胞介素10低、高剂量组、环孢素A低、高剂量组、联合用药组和生理盐水组,分别于移植前1d开始肌肉注射5,10μg/(kgd)重组人白细胞介素10,5,10mg/(kgd)环孢素A,5μg重组人白细胞介素10+5mg环孢素A,1mL/d生理盐水,连续用药10d。结果与结论:各组移植后Toll样受体4,7,8,9水平均较移植前升高,移植后14d达到高峰。移植后4,7d生理盐水组Toll样受体4水平高于联合用药组(P<0.05)。移植后7d生理盐水组Toll样受体7高于其他各组(P<0.05),Toll样受体8高于环孢素A高剂量组(P<0.05)。各组移植不同时间点Toll样受体9水平差异无显著性意义(P>0.05)。提示重组人白细胞介素10抗家兔皮肤移植反应中,Toll样受体4,7,8,9水平在皮肤移植后明显升高,当皮片排斥后达到高峰,之后逐渐下降,表明Toll样受体参与排斥反应过程。     

空肠弯曲菌DNA疫苗构建及其疫苗免疫程序研究

目的:构建空肠弯曲菌peb1A基因真核表达载体,探讨DNA疫苗不同免疫程序的免疫效果。方法:以重组pET28a(+)-peb1A质粒为模板,将空肠弯曲菌peb1A基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转染COS-7细胞中表达,Western blot鉴定表达蛋白;昆明小鼠随机分组:设空白对照组、空载体对照组、pcDNA3.1(-)-peb1A实验组,用ELISA法检测免疫后的昆明小鼠血清IgG和IgM抗体水平。结果:重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A经双酶切和PCR鉴定,构建正确。peb1A基因测序结果与GenBank中peb1A基因序列一致。重组质粒成功转染COS-7细胞,并能正确表达重组蛋白。裸DNA组IgG水平均高于两对照组,有显著性差异(P<0.05)。同一剂量短时间(0、10、20天)免疫程序优于长时间(0、15、25、35天)免疫程序(P<0.05)。结论:成功构建空肠弯曲菌真核表达重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A,其经肌肉注射免疫小鼠,具有较好的免疫原性,短时间免疫程序免疫效果好。     

Eales病与人类白细胞抗原-A/B、-DRB/DQB的相关性研究

目的 26例临床确诊为Eales病的遵义市汉族患者作为研究组,选取与研究组患者年龄、性别、民族等因素无差异的100名健康人为对照组。抽取外周静脉血,提取DNA,采用聚合酶链式反应特异序列引物法（PCR-SSP）检测HLA-A/B,HLA-DRB/DQB等位基因频率分布,计算两组优势比（OR）。结果 Eales病患者HLA-A*01 （P=0.041,OR=20.5）A*02（P=0.00;OR=54.667;OR95%CI为11.837-252.473）、B*55（P=0.047;OR=4.524;OR95%CI为1.200-17.047）,HLA-DRB*01（P=0.048;OR=5.879;OR95%CI为1.227-28.169）,DQB*05（P=0.021,OR=2.769,OR95%CI为1.145-6.692）其分布频率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),HLA-A*11（P=0.031,OR=0.383,OR95%CI为0.158-0.930）明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 Eales病可能存在遗传易感性,HLA-A*01,-A*02,-B*55,-DRB*01,-DQB*05可能是遵义市汉族Eales病患者的遗传易感基因,而HLA-A*11可能是该病的保护基因。     

伤寒患者血清C3、C4及IFN—γ的检测

目的 探讨血清C3、C4及γ干扰素（IFN－γ）在伤寒发病中的变化及其意义。方法 应用免疫透射比浊法、双抗体夹心ELISA法分别检测30例伤寒患者及20例健康正常人血清中的C3、C4和IFN－γ水平。结果 伤寒患者急性期血清中的C3、C4及IFN－γ水平均明显高于正常对照（P＜0．01）。结论 初步研究表明血清C3、C4及IFN－γ水平在伤寒患者急性期升高,是参与伤寒发生、发展的重要免疫调节分子。     

重组hIL-31抗体制备及其拮抗皮肤炎症的研究

目的:高效表达重组hIL-31制备IL-31抗体,探讨IL-31抗体拮抗皮肤炎症的作用,为研发IL-31抗体治疗性新药奠定基础.方法:①培养工程苗、IPTG诱导、菌体、超声破碎,用镍NTA柱纯化重组蛋白.②重组hIL-31蛋白溶液加佐剂免疫家兔,制备兔抗IL-31多克隆抗体.③将IL-31抗体分为3个剂量,经皮下注射和皮肤直接涂抹的途径,对已经致皮肤炎症的BALB/c小鼠治疗7d,治疗后3d取治疗部位皮肤作石蜡切片进行HE染色观察组织学变化,并检测血清中IL-6、IL-8、L选择素和MIP-3β等细胞因子的变化.结果:①SDS-PAGE电泳证实获得了高纯度的纯化人IL-31蛋白.②用重组hIL-31蛋白疫苗免疫家兔,在免疫后4周抗体滴度达到高峰,经ELISA法测血清抗体滴度为1:15 000～1:20 000,双扩滴度为1:16.Western blot结果重组IL-31蛋白能与抗IL-31抗体特异性结合.③小鼠皮肤组织切片HE染色显示,治疗组皮下和皮内均有炎症细胞浸润,呈现剂量依赖性趋势.④血清中炎性因子ELISA检测,涂抹组和注射组小鼠血清中IL-6、IL-8、MIP-3β均明显低于阴性对照组(P＜0.05).结论:①获得稳定表达的重组人IL-31蛋白,以此作为免疫原免疫家兔,诱导分泌高滴度的IL-31抗体.②IL-31抗体使皮肤炎症中炎性细胞减少,血清中炎症相关细胞因子明显降低.     

结核性胸膜炎患者胸水记忆性T细胞亚型的研究

目的:通过检测结核性胸膜炎患者胸水和外周血CD4+和CD8+记忆性T细胞亚型的表达,探讨记忆性T细胞亚型在结核性胸膜炎免疫发病中的作用.方法:用流式细胞术检测结核性胸膜炎患者胸水及外周血CD4+和CD8+记忆性T细胞亚型的表达.结果:结核性胸膜炎组胸水CD4+效应型记忆性T细胞(TEM)及中央型记忆性T细胞(TCM)和CD8+ TCM的表达均明显低于外周血(P＜0.05),CD8+ TEM高于结核性胸膜炎患者外周血(P＜0.05),结核性胸膜炎组CD4+和CD8+记忆性T细胞(TEM和TCM)与对照组比较差异均无显著性(P＞0.05).结核性胸膜炎患者胸水中CD4+ TEM\TCM、CD8+ TEM\TCM均两两相关(P＜0.05).结核性胸膜炎组胸水CD4+ TCM、CD8+TCM治疗前后差异有显著性(P＜0.05).结论:结核性胸膜炎患者胸水与外周血记忆性T细胞差异有显著性,可望作为临床诊断的辅助依据.胸水CD4+ TCM、CD8+ TCM的表达可望用于了解结核性胸膜炎的治疗效果.胸水记忆性T细胞各亚型的表达尚不能用于鉴别胸水的性质.     

特异性转移因子的研究现状和临床应用

特异性转移因子是一种具有免疫调节功能的生物制剂,既可以增强机体特异性、非特异性免疫应答,提高免疫系统清除异物的能力,也可以降低机体免疫应答的强度,减轻由于超敏反应而造成的组织病理损伤,对于多种疾病的免疫治疗有较好的应用前景.此文就其研究现状和临床应用作一综述.     

小鼠CD25分子胞外段的真核表达载体的构建

目的构建小鼠CD25分子胞外段的真核表达载体,并在CHO细胞中进行表达。方法从前期构建的原核表达载体PET-32a-CD25胞外段上酶切下CD25胞外段;将其亚克隆入真核表达载体peDNA3．1,并进行酶切及测序鉴定;用Lipofeetamine2000将pcDNA3．1-CD25胞外段转染中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary,crio）进行表达,并用ELISA法对表达产物进行测定。结果酶切、测序验证成功构建真核表达载体pcDNA3．1-CD25e,并在CHO细胞中有效表达CD25e蛋白。结论成功构建小鼠CD25胞外段的真核表达载体,可在CH10细胞中表达,并具有良好的免疫反应性,为后续实验提供了前期基础。     

特异性转移因子免疫活性检测

目的检测及探讨特异性转移因子的免疫活性。方法免疫保护性试验检测甲型副伤寒特异性茎移昱量对甲型副伤寒沙门菌、伤寒沙门菌、福氏志贺菌、金黄色葡萄球菌攻击小鼠的不同保护作用,计算存活率。结果 甲型副伤寒特异性转移因子对甲型副伤寒沙门菌攻击的小鼠的保护作用明显高于其它细菌攻击的小鼠,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论特异性转移因子的免疫活性既具有区别于非特异性转移因子的相对特异性,又具有针对特定抗原的绝对特异性。