过表达microRNA-7对人肺癌95D细胞凋亡的影响

目的探讨过表达micro RNA-7对人肺癌95D细胞体内外凋亡的作用。方法将mi R-7真核表达载体(命名为p-mi R-7)体外瞬时转染人肺癌95D细胞,利用TUNEL法观察95D细胞凋亡的变化;免疫荧光技术检测各组细胞磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白的表达;建立人肺癌裸鼠模型,肿瘤局部注射p-mi R-7后利用TUNEL法检测肿瘤局部细胞凋亡变化,同时,免疫组织化学法检测凋亡相关的磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白的表达变化。结果体外转染p-mi R-7后可导致人肺癌细胞的凋亡(P<0.05)。同时,细胞中磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白水平显著增加(P<0.05);肿瘤局部注射p-mi R-7后,肿瘤局部mi R-7表达水平及细胞凋亡也明显增强(P<0.05),磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白水平也显著增加。结论过表达mi R-7可以导致肿瘤细胞凋亡,这与凋亡相关蛋白Caspase3和Caspase9磷酸化水平增加有关。     

M2型巨噬细胞标志物CD163与肿瘤的研究进展

CD163是清道夫受体超家族重要成员，主要表达于单核细胞和巨噬细胞表面，被认为是一种高特异性的M2型肿瘤相关巨噬细胞标志物。CD163既可作为免疫调节剂抵抗炎症，又作为肿瘤相关巨噬细胞家族成员对肿瘤的增殖、转移等产生重要影响。CD163分子在恶性肿瘤中的表达日益受到关注，已有研究表明CD163与乳腺癌、膀胱癌、肺癌及结直肠癌等恶性肿瘤密切相关。本文对CD163的结构功能及在多种肿瘤的研究进展进行综述。     

结核分枝杆菌Hsp60 影响小鼠巨噬细胞抗原提呈相关分子表达的研究

目的:探讨结核分枝杆菌热休克蛋白60(MTB Hsp60)对小鼠骨髓巨噬细胞MHCⅡ类分子表达的影响。方法:采用50 ng/ml、100 ng/ml的MTB Hsp60刺激小鼠骨髓巨噬细胞,分别在24 h、48 h、72 h收集细胞提取mRNA,采用实时荧光定量PCR检测PⅣ、PⅢ、PⅠ、IL-27、CⅡTA的mRNA表达水平;分别用50 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml的MTB Hsp60刺激小鼠骨髓巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞MHCⅡ/F4/80、CD86/F4/80的百分比。结果:50 ng/ml MTB Hsp60刺激后CⅡTA、PⅣ、IL-27、PⅠ在3个时间点的总体比较差异有统计学意义(P0.05),3个时间点两两比较,CⅡTA在72 h的表达与24 h的表达相比明显降低(0.543±0.034 vs 1.859±0.689,P0.017),PⅣ在48 h的表达与24 h的表达相比明显降低(0.442±0.061 vs 0.834±0.030,P0.017),IL-27在48 h的表达与24 h的表达相比明显降低(1.519±0.041 vs 1.711±0.016,P0.017),72 h的表达与24 h的表达相比明显增高(2.606±0.193 vs 1.711±0.016,P0.017),PⅠ在48 h的表达与24 h的表达相比明显降低(1.221±0.019 vs 1.567±0.037,P0.017);100 ng/ml MTB Hsp60刺激后CⅡTA、IL-27、PⅠ在3个时间点的总体比较差异有统计学意义(P0.05),3个时间点两两比较,IL-27在48 h、72 h的表达与24 h的表达相比明显增高(2.609±0.246/0.867±0.049 vs 0.602±0.096,P0.017),PⅠ在72 h、48 h的表达与24 h的表达相比明显增高(0.811±0.085/1.361±0.199 vs 0.526±0.140,P0.017)。100 ng/ml MTB Hsp60刺激后的PⅢ、PⅠ、CⅡTA的mRNA表达水平相较于50 ng/ml MTB Hsp60刺激后有所下调(P0.05),而PⅣ的mRNA表达水平增高(P0.05)。MHCⅡ/F4/80的表达百分比在3个不同浓度刺激后比较差异具有统计学意义(P0.05):MHCⅡ/F4/80的表达在200 ng/ml MTB Hsp60刺激后相较于50 ng/ml MTB Hsp60的刺激有所下调,而CD86/F4/80的mRNA表达水平增高。结论:MTB Hsp60刺激小鼠骨髓巨噬细胞后CⅡTA、PⅣ、IL-27、PⅠ、PⅢ的mRNA表达有显著变化且受到MTB Hsp60浓度和时间的影响,MHCⅡ类分子随MTB Hsp60刺激浓度的增加而减少,CD86随MTB Hsp60刺激浓度的增加而增加,提示MTB Hsp60抑制小鼠骨髓巨噬细胞MHCⅡ类分子的表达,促进黏附分子的表达,即Hsp60可能抑制巨噬细胞抗原提呈功能从而影响其抗原提呈相关分子的表达,使MTB逃避巨噬细胞的免疫杀伤,进一步导致MTB慢性感染和潜伏感染。     

重组hIL-10抗家兔皮肤移植反应中CC、IL-8/CXCL8趋化因子的变化

目的:检测家兔皮肤移植经rhIL-10作用后,血清中CC、IL-8/CXCL8趋化因子的变化,探讨CC、IL-8/CXCL8趋化因子在rhIL-10抗免疫排斥机制中的作用。方法:皮肤移植家兔分6组:①rhIL-10低剂量,②rhIL-10高剂量,③CsA低剂量,④CsA高剂量,⑤rhIL-10+CsA低剂量联合和⑥生理盐水组;每只家兔均于术前1天开始肌注给药,连续注射10天;各组分别于术前1天、术后1、4、7、14、21、28天取外周血,分离血清,以ELISA法检测移植家兔血清CC、IL-8/CXCL8趋化因子水平。结果:(1)术后各组IL-8水平均升高,术后4天、7天⑥组IL-8水平高于各组(P<0.05)。(2)术后各组MCP-1水平明显升高,术后1天、4天,⑥组MCP-1水高于各组(P<0.05),术后7天⑥组MCP-1水平高于①组、⑤组(P<0.05);术后7天、14天CsA抑制组高于联合组(P<0.05)。(3)术后各组MIP-1α明显升高,术后4天⑥组MIP-1α水平高于①、③、⑤组,术后7天⑥组MIP-1α水平高于各组(P<0.05);(4)术后各组MIP-1β水平升高,但同时间段组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CC、IL-8/CXCL8趋化因子在皮肤移植后明显升高,表明在急性排斥反应中发挥了重要作用,随排斥反应加重而进一步增高,皮片排斥后下降,可作为观察和诊断移植排斥的合适标志物。     

重组人白细胞介素10抗家兔同种异体皮肤移植排斥模型的建立

背景:研究表明,白细胞介素10在移植排斥反应的预防和治疗中具有一定的应用前景,有望成为一种新的临床用免疫抑制剂.动物移植模型是研究免疫抑制剂常用的实验平台,最常用的皮肤移植模型动物是小鼠,但小鼠属于小动物模型,移植技术要求较高.目的:建立家兔同种异体皮肤移植模型,观察重组人白细胞介素10抗家兔皮肤移植排斥反应的效果.方法:取家兔背部皮肤修剪成含真皮层的全厚皮片、中厚皮片和不含真皮层的薄层皮片进行家兔自体皮肤移植,随机分为固定组和非固定组,固定组用自制脖套对家兔头颈部活动进行一定限制;药物抗家兔同种异体移植排斥设重组人白细胞介素10组、环孢素A阳性对照组和生理盐水阴性对照组.采用混合淋巴细胞反应法观察家兔混合淋巴细胞反应增殖指数.在30 d内连续观察移植皮肤出现排斥的时间和移植皮片平均存活时间.结果与结论:供、受体混合淋巴细胞培养呈增殖反应,表明家兔同种异体主要组织相容性复合体不同,相互皮肤移植可发生排斥反应.移植皮片厚度以含真皮的中厚皮片为最佳;自制脖套固定可有效限制家兔脖头颈部活动,有利于移植创面的保护.实验成功建立了重组人白细胞介素10抗家兔同种异体皮肤移植排斥模型,重组人白细胞介素10具有抗移植排斥的作用.     

HLA—DRB1、DQB1基因多态性与流行性出血热的相关性

目的从基因水平探讨HLA—DRB1、DQB1等位基因多态性与流行性出血热的相关性，以阐述其免疫遗传学特征。方法应用序列特异性引物聚合酶链反应技术检测流行性出血热患者和正常对照组各50例的HLA—DRB1、DQB1等位基因。结果流行性出血热患者与正常对照组比较，HLA—DRB1＊16等位基因分布频率明显增高（Pc=0．0106），两组间其余HLA-DRB1、-DQB1等位基因分布频率差异无统计学意义（Pc〉0．05）。结论HLA-DRB1＊16等位基因与流行性出血热呈正相关，可能为流行性出血热易感基因之一。     

空肠弯曲菌PEB1重组蛋白的表达及单克隆抗体的制备

目的表达CJPEB1重组蛋白，制备并鉴定CJ PEB1蛋白的单克隆抗体。方法诱导培养工程菌E．co-liBL21（DE3）表达CJPEB1重组蛋白，以PEB1蛋白溶液与等体积的佐剂完全乳化作为免疫原常规免疫BALB／C小鼠，制备单克隆抗体。无菌取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0进行融合，建立杂交瘤细胞株。将建株的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔诱生腹水制备抗体，应用间接ELISA法和双向琼脂扩散试验检测腹水中抗体的效价，应用Western-blot和玻片凝集试验检测抗体的特异性。结果得到高纯度的CJPEB1重组蛋白，蛋白质分子量大小与预计的理论值相符。获得两株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。两株杂交瘤细胞诱生的腹水，经间接ELISA法检测，腹水中的抗体效价分别为8×10^4和5×10^4，经双向琼脂扩散试验检测效价均为1：16。通过Westem-blot鉴定，两株杂交瘤细胞分泌的抗体均与PEB1蛋白特异性地结合；其诱生的腹水与CJ菌液混合出现凝集现象，而与大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌等菌液混合均未出现凝集现象。结论成功建立了两株稳定分泌抗CJPEB1重组蛋白抗体的杂交瘤细胞株并制备了抗CJPEB1蛋白的单克隆抗体，为今后研究多种检测CJ的方法创造了条件。     

Eales病与人类白细胞抗原-A/B、-DRB/DQB的相关性研究

目的 26例临床确诊为Eales病的遵义市汉族患者作为研究组，选取与研究组患者年龄、性别、民族等因素无差异的100名健康人为对照组。抽取外周静脉血，提取DNA，采用聚合酶链式反应特异序列引物法（PCR-SSP）检测HLA-A/B，HLA-DRB/DQB等位基因频率分布，计算两组优势比（OR）。结果 Eales病患者HLA-A*01 （P=0.041，OR=20.5）A*02（P=0.00；OR=54.667；OR95%CI为11.837-252.473）、B*55（P=0.047；OR=4.524；OR95%CI为1.200-17.047），HLA-DRB*01（P=0.048；OR=5.879；OR95%CI为1.227-28.169）,DQB*05（P=0.021，OR=2.769，OR95%CI为1.145-6.692）其分布频率明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，HLA-A*11（P=0.031，OR=0.383，OR95%CI为0.158-0.930）明显低于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 Eales病可能存在遗传易感性，HLA-A*01，-A*02，-B*55，-DRB*01，-DQB*05可能是遵义市汉族Eales病患者的遗传易感基因，而HLA-A*11可能是该病的保护基因。     

卓越医师班人体结构学课程体系中系统解剖学授课初探

卓越医师培养的核心任务是改革医学人才培养体制,包括人才培养观念、培养模式、课程体系建设、教学内容更新、教学方法改革及考核评价体系等各个方面。就遵义医学院基础医学院开设的人体结构学新课程体系中系统解剖学知识的讲授方式,即将互助式、讨论式、案例式等多种教学模式融入教学当中并取得的成绩作一阐述,以期能够为其他学科提供借鉴。     

HLA—DR／DQ，HLA—A／B与肺结核相关性研究

目的研究组织相容性白细胞抗原-DR／DQ、A／B（histocompatibility leukocyte antigen，HLA—DR／DQ，A／B）与肺结核之间的联系，探讨遵义市部分汉族人肺结核发病与HLA—DR／DQ，HLA—A／B基因相关性。方法选取36名已确诊肺结核的患者作为研究组，选取与研究组患者年龄、性别无统计学差异的100名健康人作为对照组，抽取外周血提取DNA。使用新型PCR—SSP方法对DNA进行HLA—DQ／DR，HLA—A／B等位基因位点的检测，结果进行SPSS10．0软件统计学处理，比较正常对照组和肺结核患者组间各等位基因频率分布，计算两组优势比（oddsratio，OR）。结果（1）共检测到HLA—DR位点上的13种等位基因，HLA—DQ位点上的7种等位基因，HLA—A位点上的10种等位基因，HLA—B位点上的20种等位基因。（2）HLA—DRB1＊16在患者组和正常对照组中的基因频率分别为6．9％和1．5％（OR=5．215，P=0．049）；HLA—A＊2在患者组和正常对照组中的基因频率分别为40．2％和9％（OR=18．87，P=0．000）；HLA—A＊24在患者组和正常对照组中的基因频率分别为8．3％和19．5％（OR=5．690，P=0．015）。结论HLA—DR＊16、HLA—A＊2基因表达与肺结核呈正相关，提示HLA-DR＊16、HLA-A＊2可能是肺结核的易感基因，HLA-A＊24基因在正常对照组中的表达明显高于结核患者组，其可能是肺结核患者发病的拮抗基因。