应用长臂光敏生物素核酸探针检测医学真菌的研究

[目的]建立PCR结合长臂光敏生物素核酸探针杂交检测医学真菌的方法。[方法]首先合成医学真菌通用引物，用PCR扩增白色念珠菌18S rRNA基因，用长臂光敏生物素标记纯化的扩增产物作为核酸探针，然后用此探针对PCR后的基因扩增产物进行Southern杂交检测医学真菌。通过用白色念珠菌感染人鼠，建立念珠菌病的实验动物模型，验证血培养法、PCR法和PCR扩增及Southern杂交检测医学重要真菌的敏感性。[结果]通用引物可以扩增白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等9种医学常见真菌的18S rRNA基因，扩增片段长度为621-687bp。此引物只扩增真菌DNA，不扩增临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA。利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增及长臂光敏生物素核酸探针Southern杂交法检测真菌血症的灵敏度，实验证明后者的敏感性最高。[结论]本方法快速、敏感、不需放射性同位素，有较好的临床应用前景。     

2.5Gy中子辐射对小鼠肾功能损害的实验研究

目的 :用 2 .5 Gy 90 %的中子射线照射 BALB/ C小鼠 ,研究小鼠血清中反映肾功能损害程度的血清尿素氮 ( BUN)和尿酸 ( UA)的变化情况 ,以确定 2 .5 Gy中子辐射对小鼠肾功能损害的情况。方法 :采用二级 BAL B/ C雄性小鼠作为实验动物 ,共计 78只。实验期间统一饲养。将上述小鼠分为对照组和实验组两组。采用北京清华大学的中子源分别对各动物组进行 90 %中子照射 ,照射剂量为 2 .5 Gy( 66只 ) ,对照组 1 2只。分别在照射动物之后的6h、1 2 h、1 d、3d、5 d、7d、1 0 d、1 4d、2 1 d、2 8d和 41 d采取静脉血 ,进行 BUN和 UA的浓度测定。结果 :2 .5 Gy中子照射后 6h、1 0 d、1 4d血清 BUN浓度有显著增高 ,照射后 2 1 d血清 BUN浓度逐渐下降 ,照射后第 2 8d恢复至正常水平。血清 UA浓度于照射后 7～ 1 0 d显著增高 ,与对照组比较有显著差别 ,于照射 1 4d之后逐渐恢复至正常水平。结论 :2 .5 Gy中子辐射可以引起肾功能损害 ,进而引起血清 BUN和 UA浓度不同程度的升高。     

PCR-RFLP方法检测医学重要真菌的临床应用研究

目的：建立并应用PCR-RFLP技术区分临床重要真菌的方法，进行实验研究和临床应用。方法：首先根据医学真菌的18SrRNA基因合成了白色念珠菌、热带念珠菌、假热带念珠菌、近平滑念珠菌、解脂念珠菌、新型隐球菌、烟曲霉菌等9种真菌的通用引物；建立鉴定医学真菌的PCR-RFLP方法。通过用白色念珠菌感染大鼠，建立了白色念珠菌感染的实验动物模型。将建立的方法用于临床，并与血培养法和协同凝集试验法进行了比较。结果：PCR-RFLP法的灵敏度高于协同凝集试验和血培养法。经过一年多的临床应用，我们分别用PCR结合限制性内切酶鉴定技术、协同凝集试验法和血培养法检测了118例血液病、肿瘤和其他发热患者的血液标本。应用协同凝集试验（CoA）法检出真菌血症19例，阳性率为16.1%。应用PCR和限制性内切酶技术共有40例检出真菌血症，阳性率为33.9%；其中白色念珠菌血症占真菌血症的65.0%，热带念珠菌感染占17.5%，假热带念珠菌感染占10%，光滑念珠菌感染占5.0%，近平滑念珠菌感染占2.5%，为临床不明原因发热患者寻找病因、进行抗真菌治疗提供了参考依据。结论：该技术具有快速、敏感、不需放射性同位素等优点，而且准确性极高，有着较好的临床应用前景。此技术应用于临床将为血液病、肿瘤和免疫抑制患者的诊断和救治工作起到积极的作用。     

长臂光敏生物素和光敏地高辛核酸探针检测医学真菌灵敏度的比较研究

建立应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针杂交。检测真菌的方法，并比较二者检测临床常见医学真菌的敏感性。设计并合成医学真菌通用引物，用PCR扩增白色念珠菌标准株的核糖体RNA基因，用长臂光敏生物素或光敏地高辛标记其纯化的扩增产物制备成相应的核酸探针，然后用上述两种探针对标本中的PCR扩增产物进行Southern杂交，检测医学真菌。通过用白色念珠菌感染大鼠，建立念珠菌病的实验动物模型，验证血培养法、PCR法和PCR扩增结合Southern杂交，检测真菌的敏感性。结果表明，这两种核酸探针可分别与白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等9种真菌杂交呈阳性结果：与临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA杂交结果为阴性。利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增结合长臂光敏生物素核酸探针Southern杂交法检测真菌血症的灵敏度，实验证明后者的敏感性最高。总之，应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针与标本PCR扩增物杂交，检测上述真菌既特异和敏感，又不需放射性同位素。光敏地高辛核酸探针检测医学真菌的灵敏度略高于长臂光敏生物素核酸探针。     

肝癌患者循环肿瘤细胞的检测及其临床应用研究进展

原发性肝癌发病率和死亡率均较高,其术后转移与复发已经成为影响患者预后的重要因素,临床上迫切需要能够有效预测和防治肝癌转移的检测手段。循环肿瘤细胞（circulating tumor cell,CTC）,作为近些年来新出现的肿瘤检测指标,因其能够实时、无创地监测肿瘤患者的病情状态,在早期诊断、早期治疗,判断预后和制定个体化治疗方案等方面具有重要意义而备受关注。CTC在乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、肺癌等疾病的应用已初步得到临床认可。最新的研究表明,肝癌患者病情状态与血液中CTC的数量也显示出极强的相关性。目前各种CTC检测体系主要包括富集纯化和鉴定两方面;但由于检测方法繁多,不同方法的敏感性、特异性不同限制了其临床应用。近年来,新的CTC检测方法层见叠出,涌现出了很多新技术用于肝癌CTC的临床研究。本文就其相关研究进展做一综述。     

乳腺癌患者血液HER-2浓度与组织HER-2表达水平的一致性研究

目的探讨复发转移乳腺癌患者血清HER-2浓度与组织HER-2表达水平的一致性。方法应用ELISA法测定血清HER-2浓度;应用免疫组化(IHC)法检测乳腺癌组织HER-2表达水平;对检测结果进行统计分析。结果组织HER-2阳性的复发转移乳腺癌患者中有62例血清HER-2阳性,阳性符合率为74.7%,组织HER-2阴性的患者有96例血清HER-2为阴性,阴性符合率为82.1%。血清HER-2水平与组织HER-2表达状态呈正相关(kappa=0.653,P<0.01)。结论复发转移乳腺癌患者血清HER-2浓度与组织HER-2表达水平无显著差别,两种检测方法具有较好的一致性,血清HER-2浓度可作为临床个体化治疗的参考依据。     

硝酸羟胺对大鼠血液系统毒性作用的实验研究

目的：机体可通过多种途径吸收HAN引起中毒，目前对HAN中毒引起的血液学损伤特点和规律研究较少。本文拟研究硝酸羟胺对大鼠血液系统的毒性作用。方法：经腹腔分别给雄性Wistar大鼠注射75、100及125mg／kgHAN，并于染毒后6h，1、3、7、14、28d，2m和3m采集静脉血，采用血细胞分析仪等仪器测试血细胞参数、红细胞渗透脆性试验、变性珠蛋白小体和Howell—Jolly小体等项目。结果：HAN注射后6h-7d红细胞细胞膜脆性、Hzinz小体和Howell—Jolly小体形成增加；RBC数、HCT及Hh浓度明显下降；而MCV、MCH、MCHC、RDW等明显增加，并存在明显剂量效应关系。结论：腹腔注射75～125mg／kgHAN可引起大鼠血细胞尤其是红细胞数量、结构和功能及血红蛋白含量发生明显改变，且具有速发性、持续性及可恢复性特点，并存在明显剂量效应关系。表明，HAN腹腔注射对血液系统有明显影响。     

集落刺激因子的分子生物学基础及其对血细胞分析的影响

集落刺激因子(Colony Stimulating Factor，CSF)是能刺激骨髓多能造血干细胞向粒单系祖细胞集落分化，并使其发育为成熟粒细胞和巨噬细胞的细胞因子，主要有粒细胞单核巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte—Macrophage Colonv Stimulating Factor，GM—CSF)、粒细胞集落刺激因子(Granulocyte Colony Stimulating Factor，G—CSF)和单核巨噬细胞集落刺     

神经生化标志物S100蛋白的分子生物学基础及临床应用

本文综述了近年来对S100蛋白家族的分子生物学研究及其临床应用新进展，包括S100蛋白家族的化学本质，基因定位和组织细胞分布，及其作用的靶蛋白，功能和相关疾病，在临床上用于脑组织损伤和黑素瘤的诊断，治疗和疗效判断等研究进展。