慢性丙型肝炎患者α干扰素和α干扰素受体1的检测

目的建立检测外周血单个核细胞α干扰素受体1(IFNAR1)及检测诱导表达α干扰素(IFN-α)的方法,评价慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)细胞免疫功能与α干扰素治疗的关系。方法Poly IC体外刺激正常对照组和慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染组患者PBMC,利用病毒保护试验研究干扰素治疗前后患者PBMC表达的干扰素抗病毒生物学活性差异;IFN-α治疗前后,RT-PCR检测慢性丙型肝炎患者不同干扰素应答组患者PBMC IFNAR1表达的变化。结果对照组PBMC分泌的干扰素活性显著高于慢性丙型肝炎患者应答组患者(P<0.001);干扰素应答组患者PBMC分泌的干扰素活性随治疗时间延长而增加,治疗1个月后显著高于无应答组患者PBMC分泌的干扰素活性(P<0.01),后者始终处于低下水平;IFN-α治疗期间干扰素应答组患者PBMC IFNAR1水平从治疗前的高表达而逐渐减少,正常对照和干扰素无应答组患者PBMC IFNAR1的表达始终较低。结论慢性HCV感染患者的细胞免疫功能受损,不能正常表达IFN-α,但应答组患者经干扰素治疗后IFN-α表达能力逐渐恢复;干扰素无应答组患者PBMC IFNAR1表达受到严重抑制;慢性丙型肝炎患者PBMCIFN-α活性检测及IFNAR1检测结果也许可以作为干扰素治疗预后的判断指标。     

抑制α／β干扰素受体α亚基表达的pSUPER—H1 RNAi系统构建及功能初步鉴定

干扰素是目前公认的一种有效抗病毒药物，其作用机制是与其受体结合，使信号转导通路中的蛋白质分子磷酸化，进而激活转录并产生各种抗病毒蛋白。α／β干扰素共用Ⅰ型受体，该受体有α、β两个亚单位，分别称为IFNAR1和IFNAR2。本研究构建抑制α／β干扰素受体α亚基表达的pSUPER—H1 RNAi系统，并对其生物学功能进行初步探讨。     

危重症与TNF—α、IL—6、IL—8和IL—10

严重感染、多发性创伤、大手术、大出血、重症胰腺炎等因素，可直接引起机体神经体液反射调节。1985年Deitch提出严重创伤、烧伤、严重感染、大手术、脓毒性休克、肠道细菌易位、失血后再灌注以及大量输血输液等均可对机体构成第一次打击，使机体免疫细胞处于激活状态；如再出现第二次打击，即使程度并不严重，也可导致患者体内大量细胞因子释放，引起失控的过度炎症反应，造成各种损害。危重患者体内血清细胞因子如肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6、IL-8和IL-10浓度变化及     

Statistical analysis on 2213 inpatients with traffic injuries from January 2003 to September 2005 in Ningbo city

Objective: To analyze the epidemiological conditions and characteristics of inpatients with traffic trauma in order to provide objective data for basic research and clinical application of traffic trauma. Methods: The data of 2213 inpatients with traffic trauma admitted to Lihuili Hospital, Ningbo Medical Centre, Ningbo, China, from January 2003 to September 2005 were studied retrospectively. According to the transportation ways, the patients were divided into four groups; pedestrians, bicyclists, motorcyclists, and automobilists. And the data of injured regions, combined injuries and causes of death were analyzed statistically. Results: Among the 2213 patients, there were 550 pedestrians (23. 5%), 521 bicyclists (24.9%), 738 motorcyclists (33.3%), and 404 automobilists (18.3%). Male patients were more than female ones, with the ratio of male to female of 2.8:1. Single region injury was found in 1663 patients (75.15%) and multiple injuries in 550 patients (24.85%). In total, 2849 regions were injured. Fracture of extremities (53.3%) occurred most often, craniocerebral trauma (19.4%) next, then followed in turn by thoraco-abdominal visceral injury (6.56%), spine fracture (5.37%), fracture of ribs (4.88%), and pelvic fracture (4.18 %). The percentage of multiple injuries (33.2%) was highest and the percentage of thoraco-abdominal injury (18.0%) was higher in motorcyclists. The percentages of craniocerebral trauma in pedestrians and bicyclists were 27.8% and 28.2%, respectively. The incidence of fracture of extremities in motorcyclists reached 73.8%, but with the lowest case-fatality ratio of 1.4%. The incidence of traffic accidents caused by motorcyclists themselves (32.8%) was highest. A total of 56 patients died, with the case-fatality ratio of 2.53%. Among the deaths, 47 died from craniocerebral injury, 6 from multiple fractures combined with hemorrhagic shock, 2 from combined injury in the thoraco-abdominal region, and 1 from cervical cord injury. Conclusions: Nowadays, the patients with traffic trauma are mainly pedestrians, bicyclists and motorcyclists, and they suffer generally from fracture of extremities and craniocerebral injury. The main cause of death is craniocerebral injury. Another characteristic of traffic trauma is that the ratio of multiple injuries is higher.     

土拨鼠白细胞介素15的克隆、表达和活性分析

目的对土拨鼠白细胞介素15（woodchuck interleukin 15，wIL-15）分子进行克隆、表达并鉴定其活性，为进一步研究IL-15在嗜肝病毒感染中的作用以及评价IL-15用于治疗慢性HBV感染奠定基础。方法用IL-15的保守引物将wIL-15基因克隆、测序并进行分析，构建wIL-15的原核表达质粒，在大肠杆菌中表达，分离纯化后用淋巴细胞增殖试验检测其生物学活性。结果wIL-15的完整编码序列为489nt（与其他哺乳动物IL-15编码序列的同源性高达78％～87％），编码162AA长度的前体蛋白（与其他哺乳动物IL-15蛋白的同源性高达70％～80％），其信号肽为N端的48AA，成熟蛋白由114AA组成。土拨鼠IL-15与灵长动物IL-15的同源性高于啮齿动物。带有His-tag的成熟蛋白，可以在大肠杆菌中表达，分离纯化后，可以刺激Con A活化的小鼠脾细胞和土拨鼠PBMC增殖（其SI值可高达10以上），并存在明显的剂量依赖性。结论（1）wIL-15与其他哺乳动物IL-15高度同源，并且与灵长类动物的IL-15更接近。（2）wIL-15可以在大肠杆菌中表达，并在纯化后能刺激小鼠和土拨鼠淋巴细胞增殖，表现出较好的生物学活性。     

EB病毒转化B淋巴细胞影响因素的研究

人外周血Ｂ淋巴细胞膜上有ＥＢ病毒 (ＥＢＶ)受体 ,在体外可被ＥＢＶ转化为Ｂ淋巴母细胞样细胞系 (ＬＣＬ) ,ＬＣＬ具有永生性 ,能在体外长期传代生长 ,且能保持较稳定的遗传学性状。因而ＬＣＬ可被广泛应用于医学生物学研究的许多领域 ,如进行基因组遗传物质结构的分析 ,某些细胞生物学性状的检测等。目前建立ＬＣＬ的方法主要有环孢霉素Ａ法、微量全血法及冻存全血法。但微量全血法和冻存全血法因具有操作简单 ,所需标本量少的优点 ,而被广泛采用。我们就影响微量全血法转化效果的因素作了初步探讨。实验中共收集血标本 78份 ,其中正常人 …     

一种新的土拨鼠α干扰素基因分型方法的建立及其意义

目的：建立新的土拨鼠α干扰素（IFN-α）基因分型方法，分析急性和慢性土拨鼠肝炎病毒（Woodchuck hepati-tis virus，WHV）感染的土拨鼠肝细胞中不同型别的IFN-α基因表达谱及其意义。方法：利用已知序列和基因型的土拨鼠IFN-α基因克隆质粒，建立基于土拨鼠IFN-α基因序列的限制性片段长度多态性的土拨鼠IFN-α基因分型方法。PolyIC体外刺激正常土拨鼠外周血单个核细胞（PBMC），调查正常土拨鼠PBMC受PolyIC刺激后IFN-α基因的表达谱。提取急性和慢性土拨鼠肝炎病毒感染的土拨鼠肝组织mRNA，RT-PCR扩增土拨鼠IFN-α基因，分子克隆后调查急性和慢性感染的土拨鼠肝细胞中IFN-α基因表达谱。结果：建立了土拨鼠IFN-α基因限制性片段长度多态性分型方法。急性和慢性感染的土拨鼠肝细胞中IFN-α基因的表达谱明显不同于正常动物的表达谱，假基因表达所占比例大。结论：新建立的土拨鼠IFN-α基因分型方法可用于分析土拨鼠不同组织中IFN-α的基因表达谱。     

IFN-α诱导HuH7细胞固有免疫分子APOBEC3G的表达

目的了解IFN-α对HuH7细胞固有免疫分子APOBEC3G表达的影响及其机制。方法HuH7细胞给予不同浓度的IFN-α(0 U/ml、100U/ml、400U/ml、800U/ml and 1200U/ml)刺激,10h后提取细胞总RNA,RT-PCR和实时定量RT-PCR检测HuH7细胞内APOBEC3G的mRNA水平变化,Western blot分析APOBEC3G蛋白水平的表达;分别构建不同长度的含有IRF-E(IFN regulatory factor element)位点的APOBEC3G起始密码上游序列报告质粒、不含IRF-E和IRF-E位点突变的虫荧光素酶报告质粒,报告基因分析IFN-α刺激后APOBEC3G起始密码上游IPF-E位点对APOBEC3G表达的影响。结果IFN-α上调HuH7细胞APOBEC3G mRNA和蛋白水平的表达,并具有剂量依赖的效应。序列分析发现APOBEC3G起始密码上游的-298～-283和-57～-47位碱基分别存在IRF-E和ISRE(IFN stimulated re- sponse element)序列。报告基因分析结果显示,干扰素使含有IRF-E序列的APOBEC3G启动子报告质粒的虫荧光素酶的活性增加6～8倍,而不含IRF-E序列和IRF-E位点突变的报告质粒的虫荧光素酶活性在干扰素刺激后几乎没有变化。结论IFN-α可通过IRF-E位点上调APOBEC3G mRNA和蛋白水平的表达,从而发挥抗病毒效应。     

利用微波处理血清标本进行乙型肝炎病毒DNA聚合酶链反应检测

利用微波处理血清标本进行乙型肝炎病毒ＤＮＡ聚合酶链反应检测唐振亚，赵西平，汪由坤，喻植群，胡峻，杨东亮，郝连杰（同济医科大学附属同济医院临床免疫研究室，武汉４３００３０）６４份随机选择的血清标本来自１９９３年５～７月我院传染科住院息者，其中急性肝炎３...     

鸟苷结合蛋白1对柯萨奇病毒B3及乙型肝炎病毒体外介导的不同作用

目的构建人鸟苷结合蛋白1（hGBP-1）真核表达质粒，观察hGBP-1体外对柯萨奇病毒B3（CVB3）和乙型肝炎病毒（HBV）的抑制作用。方法长链RT-PCR扩增全长hGBP-1编码区基因，克隆到pCR2．1TA克隆载体，再亚克隆到pcDNA3．1（-）真核表达载体。体外转染HepG2细胞和Hela细胞，Western blot检测hGBP-1的表达。然后分别观察转染细胞中hGBP-1对HBV体外复制子pHBV1．3和CVB3的抑制作用。ELISA检测共转染HepG2细胞培养L清HBsAg、HBeAg水平；Southern blot检测细胞HBVDNA复制中间体。TCID50试验检测Hela细胞培养物中CVB3感染量。结果成功构建hGBP-1真核表达质粒，能在HepG2细胞和HeLa细胞进行高效表达。该质粒与pHBV1．3共转染HepG2细胞，不能抑制HBV复制，HBsAg、HBeAg及HBV DNA复制中间体水平与对照相比都无明显变化。转染质粒在HeLa细胞上对CVB3复制有明显的抑制作用，CVB3感染量显著降低，尤其在低剂量病毒攻击时能完全抑制CVB3复制。结论hGBP-1可能在IFN介导的抗CVB3中起重要作用，但不能抑制HBV的复制。