用LAB-ELISA检测流行性出血热特异性IgM抗体的初步研究

应用标记抗生物素-生物索酶联免疫吸咐试验(LAB-ELISA)检测了66份流行性出血热病人血清中特异性IgM抗体,并与酶免疫染色法(EIA)比较。结果:LAB-ELISA与EIA的阳性血清检出率分别为95.45％和84.84％,其IgM抗体滴度范围分别为1:1000～1:12800和1:20～1:640,表明LAB-ELISA较EIA敏感。经2-巯基乙醇破坏法及抑制试验证明特异性好。适于基层单位应用。     

肾综合征出血热研究进展

1987年12月10～11日在比利时安特卫普市召开了国际汉坦病毒讨论会。会议就肾综合征出血热(HFRS)的病原学、流行病学及临床研究等方面进行了广泛交流。本文仅就参加该次会议的部分论文及近些年来发表的有关文献作一综述。     

人宫颈癌基因蛋白B细胞表位及其HLA限制性细胞毒性T细胞表位预测分析

目的:预测人宫颈癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)蛋白的二级结构,B细胞表位及其HLA-A,B限制性细胞毒性T细胞表位.方法:综合分析二级结构、亲水性、柔韧性、表面可及性与抗原性指数,预测HCCR蛋白的B细胞抗原表位;利用BIMAS,SYFPEITHI和NetCTL方法预测分析其HLA-A*0201限制性CTL表位,运用NetCTL方法对HLA-A的其他等位基因和HLA-B限制性CTL表位进行预测分析.结果:HCCR蛋白的二级结构主要由α-螺旋结构组成,B细胞优势表位位于N端第41～53,216～228,310～325和355～360区段;预测得到5个HLA-A*0201限制性CTL优势表位分别为YLVFLLMYL(152～160),YLFPRQLLI(159～167),LLLHNVVLL(343～351),CLFLGIISI(138～146)和SIPPFANYL(145～153),HCCR蛋白HLA-A,B限制CTL表位主要位于胞外区.结论:应用多参数预测HCCR蛋白B细胞表位及其HLA-A,B限制性细胞毒性T细胞表位,为进一步实验鉴定其表位进而制备单克隆抗体和基于HCCR抗原的肿瘤免疫学治疗奠定了基础.     

鸭乙型肝炎病毒全基因重组质粒构建及表达

目的构建鸭乙型肝炎病毒（DHBV）感染性克隆,通过体外细胞转染获得单一来源、基因序列清楚的体内实验的感染毒种。方法以湖北麻鸭DHBV分离株（DQ276978）为模板,用PCR法从该DHBV全基因组克隆质粒（pMD-DHBV）和DHBV阳性血清中获取3部分基因片段,总长4.4kb,克隆至载体PCR2.1的SacI和NotI酶切位点,构建含1.5倍鸭乙型肝炎病毒全基因的重组质粒,并酶切鉴定其插入方向。将构建的重组质粒经脂质体Lipo-fectineTM 2000导入鸡肝癌细胞系（LMH）细胞中转染表达,收集纯化后的转染细胞培养上清液作为体内实验感染的标准毒种。结果PCR鉴定、酶切鉴定及序列测定,证实成功获得正向插入的1.5倍鸭乙型肝炎病毒全基因重组质粒PCR2.1-DHBV1.5。Southernblot检测表明,该重组质粒在LMH细胞内存在各种病毒复制中间体;通过电镜观察,转染细胞上清液中存在DHBV完整病毒颗粒。结论经体外重组,构建出携带1.5倍加长DHBV基因组片段的重组质粒PCR2.1-DHBV1.5,并可在鸡肝癌细胞LMH中介导高水平病毒复制,从而获得含可自我复制病毒颗粒的转染细胞上清液作为动物体内感染接种物。     

外周血单核细胞IFN-α和IL-18表达与慢性丙肝患者干扰素应答的关系

目的检测慢性丙肝(CHC)患者外周血单核细胞(PBMC)α干扰素(IFN-α)及白细胞介素18(IL-18)mRNA的表达,探讨慢性丙肝患者细胞免疫功能与干扰素应答的关系。方法聚肌胞(PolyIC)体外刺激正常对照组和慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染组患者PBMC,取培养上清利用病毒保护试验测定IFN-α2b治疗前后病人PBMC表达的干扰素抗病毒生物学活性。同时用脂多糖(LPS)体外刺激不同组PBMC,RT-PCR检测PBMC IL-18 mRNA水平的变化。结果治疗前干扰素治疗应答组患者(n=12)和无应答组患者(n=26)PBMC分泌的干扰素抗病毒生物学活性显著低于正常对照组(n=20)(均P<0.01)。应答组患者PB-MC分泌的干扰素活性随治疗时间延长而增加,1个月已显著高于无应答组患者(P<0.01);无应答组患者PBMC分泌的干扰素活性始终处于低下水平。治疗前,应答组患者和无应答组患者PBMC IL-18 mRNA水平也显著低于正常对照组(均P<0.01);治疗后,应答组患者IL-18 mRNA水平随治疗时间延长而升高,1个月时显著高于无应答组患者(P<0.01),无应答组患者IL-18 mRNA水平始终较低。PBMC IFN-α活性和IL-18 mRNA水平有良好的正相关性(r=0.873,P<0.01)。结论慢性HCV感染无应答组的细胞免疫功能受损,不能正常表达IFN-α和IL-18,而应答组经干扰素治疗后表达能力逐渐恢复。慢性丙肝患者PBMC IFN-α活性和IL-18 mRNA水平检测可以作为干扰素治疗预后的判断指标。     

Expression of CD40 and CD40L on Peripheral Blood Mononuclear Cells in Patients with Condyloma Acuminatum

The initiation,development and transforma-tion of condyloma acuminatum(CA)bear a closerelation to the cellular i mmune function ofhost[1-3].The CD40and CD40ligands,a couple ofi mportant costi mulatory molecules of the specifici mmune systemin vivo,play an i mportant role inthe activation of Tlymphocytes and the secretionof effective cytokines.To obtaintheinformation a-bout the expression level and explore the clinicalsignificance of CD40and CD40L on peripheralblood mononuclear cells(PMBC…     

心房颤动67例发病和防治分析

心房颤动是最常见的心律失常 ,据统计 60岁以上人群中 ,房颤发生率为 1% ,并随年龄和器质性心脏病基础而增加。是脑卒中的主要原因之一。尤其是老年人 ,现将我院 2 0 0 1年 1月～ 2 0 0 2年 12月收治的 67例房颤分析如下 :1　临床资料1 1　一般资料 :67例中男 43例 ,女 2 4例 ,年龄 5 2～ 83岁 ,平均年龄 61岁 ,>60岁有 44例 ,占 66 7% ,≤ 60岁 2 3例 ,占 3 3 3 % ,其中冠心病 19例 ,高心病 16例 ,风心病 11例 ,扩心病 8例 ,甲亢心 4例 ,先心病 4例 ,病因不明 5例。1 2　临床表现 :房颤的主要症状是心慌、胸闷、气短、乏力等。主要体征 :…     

带有6肽组氨酸的HBV S/S145真核表达载体的构建及应用

目的 构建稳定表达带有6肽组氨酸的HBV S/S145蛋白的真核载体.方法 应用PCR技术及体外基因重组技术,将S基因和nt587突变的S基因插入带有his-tag的pxF2RH载体中,扩增6个组氨酸和S/S145基因,最后与经Nhe I、Sal I双酶切的线性载体pCI-neo连接,构建成带有6肽组氨酸的稳定表达S/S145的真核表达载体(简称pCI-his-SY/S145).用脂质体转染的方法将质粒转至人宫颈癌细胞,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中抗原的分泌情况.用Western-blot方法检测细胞中外膜蛋白的表达情况.结果 真核表达载体pCI-his-SY/S145的测序结果与预期大小一致.ELISA方法可检测到细胞上清中的野生型表面抗原,但检测到145突变抗原表达水平低.应用Western-blot方法可以同时检测到野生型和G145R突变的外膜蛋白表达.结论 带有his-tag的重组质粒pCI-his-S/S145可以在Hela细胞中成功表达融合蛋白,且组氨酸可作为检测蛋白的标志.     

SARS病毒S2蛋白的原核表达与DNA疫苗的构建

目的 构建SARS冠状病毒(SARS-CoV)S2基因的原核和真核表达质粒,研究该真核表达重组质粒作为DNA疫苗的可行性.方法 采用RT-PCR技术从灭活的SARS冠状病毒RNA扩增得到SARS-CoV-S2基因片段,定向克隆入原核表达载体pET-28a和真核表达载体pCDNA3.1 中,构建pET-28a-SARS-CoV-S2和pCDNA3.1-SARS-CoV-S2质粒.用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导重组质粒pET-28a-SARS-CoV-S2在大肠埃希菌BL21(DE3)plysS中表达融合蛋白;并将重组pCDNA3.1-SARS-CoV-S2质粒免疫BALB/c小鼠,采用ELISA、Western blot的方法检测被免疫小鼠的抗体应答情况.结果 应用RT-PCR技术,从灭活的SARS冠状病毒扩增得到大小约为998 bp SARS-CoV-S2基因片段后,构建了含SARS-CoV-S2基因片段的原核表达质粒pET-28a-SARS-CoV-S2和真核表达质粒pCDNA3.1-SARS-CoV-S2;通过IPTG诱导,重组pET-28a-SARS-CoV-S2质粒在表达菌BL21(DE3)plysS内表达S2融合蛋白;用纯化的重组真核表达质粒经基因枪免疫BALB/c小鼠后,获得了高效价的特异性抗体.结论 成功构建了可表达SARS-CoV-S2融合蛋白的原核表达质粒pET-28a-SARS-CoV-S2.重组pCDNA3.1-SARS-CoV-S2质粒可作为DNA疫苗使被免疫小鼠产生明显的免疫应答.为建立SARS特异性血清学诊断方法和研制SARS DNA疫苗奠定了一定的基础.     

靶向X基因shRNA特异抑制HBV基因表达和复制

目的:研究针对HBV X基因小发夹RNA(shRNA)对HBV基因表达和复制的抑制作用。方法:利用分子克隆方法构建了4个HBV X基因特异性shRNA的表达质粒pshHBx1-4,与HBV复制性质粒共转染HepG2细胞,Northern和Southern印迹法检测HBV的mRNA和病毒复制中间体,化学发光微粒免疫分析方法检测细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg,免疫荧光染色分析细胞HBcAg的表达水平。结果:共转染pshHBx1-4显著抑制HBV mRNA表达、降低细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的水平和细胞内HBcAg的表达水平、并有效抑制HBV的病毒复制中间体的合成。结论:HBV X基因特异性的shRNA可以有效抑制HBV的基因表达和病毒复制,有可能发展成为新的抗HBV制剂。