B7-H4及Fas、FasL与宫颈癌免疫逃逸机制的关系

目的:检测免疫共刺激分子B7-H4及Fas、FasL在不同宫颈组织中的表达，研究三者的异常表达与宫颈癌免疫逃逸机制的关系。方法:选择陕西省肿瘤医院病理科2014-2018年的石蜡包埋标本162例，采用免疫组织化学方法检测20例正常宫颈、30例宫颈上皮内瘤变(CIN)和112例I期-IV期宫颈癌组织中B7-H4及Fas、FasL的表达水平。结果:B7-H4在正常宫颈组、CIN组、宫颈癌组的阳性表达率分别为0、20.0%、47.32%，两两相比，具有显著性差异（P<0.05）。在112例宫颈癌病例中FIGO临床分期I期至IV期各期别宫颈癌组织B7-H4的阳表达率分别为16.67%、43.18%、70.83%、85.71%，各组间相比差异具有统计学意义。正常对照组Fas的阳性表达率是85.00％，CIN组43.33％，宫颈癌组41.96％，正常组与CIN、正常组与宫颈癌组相比差异均具有统计学意义（P<0.05），CIN组与宫颈癌组相比，无明显差异（P>0.05）。FasL的阳性表达率在正常组为20.00%，CIN组为50.00%，宫颈癌组为56.25%，正常组与CIN、宫颈癌组比较，差异具有统计学意义(P<0.05)，CIN组与宫颈癌组比较无显著差异;B7-H4阳性宫颈癌组Fas阳性表达率28.30%明显较B7-H4阴性宫颈癌组Fas阳性表达率54.24%低，差异具有统计学意义（P<0.05）；而B7-H4阳性宫颈癌组FasL阳性表达率79.25%明显高于B7-H4阴性宫颈癌组FasL阳性表达率35.59%，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:负性免疫共刺激分子B7-H4和Fas、FasL凋亡蛋白在宫颈癌的发生、进展中起到了重要作用，其协同作用可能为宫颈癌细胞逃逸机体免疫的机制之一。     

急性乙型肝炎患者pDCs上CD86表达变化及意义

目的 探讨外周血浆细胞样树突状细胞(pDCs)在急性乙型肝炎(AHB）患者临床转归中的变化及作用。方法 纳入2015年6月至2017年5月收治的急性乙型肝炎(AHB组)患者40例， 给予退黄、降酶、保肝等药物，并加用恩替卡韦0．5 mg空腹口服，1次/d。另纳入健康体检者26例为健康对照组（ HC组）。HC组于体检当天、AHB组于治疗前及治疗后6周采集外周静脉全血，采用ELISA法检测2组血浆HBV DNA、HBsAg、HbeAg及肝功能指标水平，并应用流式细胞仪检测pDCs的频数及其功能分子CD86的表达水平。结果 治疗6周后，AHB组临床症状显著缓解，血清学指标和乙型肝炎标志物水平显著下降（P<0.01）。治疗6周后，AHB组HBV DNA转阴率为82.5%，HBsAg清除率为72.5%，HBeAg血清学转换率为75.0%，与治疗前比较差异均有统计学意义（P<0.01）, HC组pDCs频数显著高于AHB组治疗前。AHB组治疗后CD86+pDCs显著高于治疗前。HC组CD86ABC显著低于AHB组治疗前。结论 在急性乙型肝炎患者外周血pDCs的数量降低。急性乙型肝炎患者在治疗后CD86+pDCs增多。急性乙型肝炎患者pDCs上CD86表达上调。     

旋覆代赭汤对反流性食管炎大鼠模型TLR4/NF-κB的影响

目的观察旋覆代赭汤对反流性食管炎(RE)模型大鼠食管黏膜与脂多糖(LPS)、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)表达的影响。方法将60只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、旋覆代赭汤组(简称中药组,9.89 g/kg)、西药(奥美拉唑+莫沙比利,2.58 mg/kg)组,每组15只。除正常对照组外大鼠采用“4.2 mm幽门夹+2/3胃底结扎术”制备酸碱混合反流RE大鼠模型。术后第7天予相应药物干预,持续干预14天。利用光学显微镜观察大鼠食管下段黏膜组织形态学变化;应用ELISA法检测定外周血中LPS含量;采用Western Blot法与RT-PCR法检测食管黏膜组织中TLR4、NF-κB蛋白和基因表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠食管黏膜镜下损伤最为严重,食管黏膜呈炎性改变,可见急慢性炎细胞浸润,病理积分和外周血中LPS含量升高(P<0.05),食管组织中TLR4、NF-κB蛋白和基因表达升高(P<0.05)。与模型组比较,中药组、西药组病理积分和外周血中LPS含量降低(P<0.05),食管组织中TLR4、NF-κB蛋白和基因表达亦明显降低(P<0.05)。结论旋覆代赭汤能够减轻RE模型大鼠食管黏膜的损伤,抑制TLR4、NF-κB的表达,促进食管黏膜损伤的恢复。     

Rociletinib (CO-1686) enhanced the efficacy of chemotherapeutic agents in ABCG2-overexpressing cancer cells in vitro and in vivo

Overexpression of adenosine triphosphate (ATP)-binding cassette subfamily G member 2 (ABCG2) in cancer cells is known to cause multidrug resistance (MDR), which severely limits the clinical efficacy of chemotherapy. Currently, there is no FDA-approved MDR modulator for clinical use. In this study, rociletinib (CO-1686), a mutant-selective epidermal growth factor receptor (EGFR) tyrosine kinase inhibitor (TKI), was found to significantly improve the efficacy of ABCG2 substrate chemotherapeutic agents in the transporter-overexpressing cancer cells in vitro and in MDR tumor xenografts in nude mice, without incurring additional toxicity. Mechanistic studies revealed that in ABCG2-overexpressing cancer cells, rociletinib inhibited ABCG2-mediated drug efflux and increased intracellular accumulation of ABCG2 probe substrates. Moreover, rociletinib, inhibited the ATPase activity, and competed with [¹²⁵I] iodoarylazidoprazosin (IAAP) photolabeling of ABCG2. However, ABCG2 expression at mRNA and protein levels was not altered in the ABCG2-overexpressing cells after treatment with rociletinib. In addition, rociletinib did not inhibit EGFR downstream signaling and phosphorylation of protein kinase B (AKT) and extracellular signal-regulated kinase (ERK). Our results collectively showed that rociletinib reversed ABCG2-mediated MDR by inhibiting ABCG2 efflux function, thus increasing the cellular accumulation of the transporter substrate anticancer drugs. The findings advocated the combination use of rociletinib and other chemotherapeutic drugs in cancer patients with ABCG2-overexpressing MDR tumors.     

The key role of macrophage depolarization in the treatment of COPD with ergosterol both in vitro and in vivo

Macrophages are the most abundant immune cells in the lung, which play an important role in COPD. The anti-inflammatory and anti-oxidation of ergosterol are well documented. However, the effect of ergosterol on macrophage polarization has not been studied. The objective of this work was to investigate the effect of ergosterol on macrophage polarization in CSE-induced RAW264.7 cells and Sprague-Dawley (SD) rats COPD model. Our results demonstrate that CSE-induced macrophages tend to the M1 polarization via increasing ROS, IL-6 and TNF-α, as well as increasing MMP-9 to destroy the lung construction in both RAW264.7 cells and SD rats. However, treatment of RAW264.7 cells and SD rats with ergosterol inhibited CSE-induced inflammatory by decreasing ROS, IL-6 and TNF-α, and increasing IL-10 and TGF-β, shuffling the dynamic polarization of macrophages from M1 to M2 both in vitro and in vivo. Ergosterol also decreased the expression of M1 marker CD40, while increased that of M2 marker CD163. Moreover, ergosterol improved the lung characters in rats by decreasing MMP-9. Furthermore, ergosterol elevated HDAC3 activation and suppressed P300/CBP and PCAF activation as well as acetyl NF-κB/p65 and IKKβ, demonstrating that HDAC3 deacetylation was involved in the effect of ergosterol on macrophage polarization. These results also provide a proof in immunoregulation of ergosterol for therapeutic effects of cultured C. sinensis on COPD patients.     

程序性细胞死亡蛋白配体1在结直肠癌免疫治疗中的研究进展

近年来,抗程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)药物在转移性结直肠癌患者错配修复缺陷治疗中的成功使得该疾病的免疫治疗得以重视。然而,失配修复缺陷的结直肠癌患者仅占结肠癌患者的一部分。目前的研究重点是将免疫治疗应用到疾病的早期阶段,包括辅助一线治疗,以及检测免疫检查点抑制剂治疗的敏感性。然而,哪些患者能够从该免疫治疗中获益仍是值得商榷的问题,因为这类药物具有自身免疫毒性。PD-1的配体之一程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-L1)作为一种检测生物标记物,其检测可以通过免疫组化来实现。但其免疫组化的检测存在一些混杂因素,包括应用不同的检测抗体、不同的免疫组化临界值、肿瘤组织的采集准备方式不同、处理过程的不同、原发与继发的活检标本、肿瘤源性或诱导的PD-L1表达,以及肿瘤与免疫细胞的染色等。目前的结果表明,免疫组化检测肿瘤过表达PD-L1的患者在接受抗PD-L1治疗时临床效果更理想,而有些低表达的肿瘤也对该治疗有所缓解,这使PD-L1的分析中存在复杂性。阐明宿主免疫系统与肿瘤微环境的机制则能够更好地解释针对PD-L1药物是否让患者受益。     

银杏内酯B对肌萎缩侧索硬化细胞模型的保护作用及其机制

目的:探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对肌萎缩侧索硬化细胞模型c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及细胞凋亡的影响。方法:通过含过表达人突变超氧化物歧化酶1(SOD1)~(G93A)基因(hSOD1~(G93A))和过表达人野生SODWT基因(hSOD1WT)与空质粒的慢病毒感染NSC34细胞,经一定浓度的嘌呤霉素筛选,倒置荧光显微镜下观察慢病毒的转染效率和细胞形态的变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检验感染细胞是否过表达SOD1蛋白,建立hSOD1~(G93A)-NSC34细胞系后给予GB,细胞培养分组为正常组、模型组、不同浓度GB组(25,50,75,100 mg·L-1)组,48 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,筛选出最佳药物浓度,后续实验分组为以正常组,模型组,75 mg?L~(-1) GB组,SP600125组,75 mg?L-1GB+SP600125组,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化(p-)JNK,c-Jun,p-c-Jun,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达。结果:与正常的NSC34细胞比较,hSOD1~(G93A)NSC34组细胞胞体变圆,突触减少、变短,而hSOD1WT NSC34组细胞和空质粒组细胞形态学未发生明显变化,与正常组比较,hSOD1~(G93A)NSC34组,hSOD1WTNSC3组细胞内SOD1蛋白水平显著升高(P0. 01),肌萎缩侧索硬化(ALS)细胞模型成功建立。与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低(P0. 01);与模型组比较,给予不同浓度GB后,细胞存活率均显著升高(P0. 01),药物质量浓度为75 mg?L-1时细胞存活率显著升高(P0. 01)。后续实验,与正常组比较,模型组凋亡率,p-JNK,p-c-Jun,cleaved Caspase-3蛋白表达量显著升高(P0. 01);与模型组比较,75 mg?L-1GB组,SP600125组,75 mg?L-1GB+SP600125组凋亡率,p-JNK,p-c-Jun,cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P0. 05,P0. 01)。结论:GB对肌萎缩侧索硬化细胞模型具有抑制细胞凋亡的保护作用,这种保护作用可能是通过JNK信号通路实现的。     

活性多酚化合物LM49对RAW264.7巨噬细胞极化的影响

目的初步探讨LM49(2,4'三羟基-5,2'-二溴二苯甲酮)对脂多糖(LPS)联合干扰素γ(IFN-γ)诱导的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)M1/M2极化的影响及其调控机制。方法四曱基偶氮唑蓝(MTT)法测定LM49对细胞活力的影响;流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Westem-blot法测定LM49(5,10,20μmol·L^-1)与LPS/INF-γ共同作用于RAW264.7细胞后,巨噬细胞亚型标志物的表达情况及对核因子(NF)-κB和JAK/STAT信号通路的影响。结果与LPS/INF-γ造模组相比,LM49显著抑制CD16/32^+细胞数及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素(IL)4和肿瘤坏死因子(TNF)-αmRNA的表达,升高CD206^+细胞数及Arg-1和IL-10 mRNA的表达,且降低巨噬细胞M1/M2的比值;Westem-blot法验证LM49可显著降低TLR4、Myd88、NF-κB和STAT1蛋白的表达量,同时抑制p-JAK2和p-STATl蛋白磷酸化水平。结论LM49通过抑制TLR4-Myd88-NF-κB和JAK2-STAT1信号通路,抑制巨噬细胞Ml型极化及促进巨噬细胞M2型极化,调节巨噬细胞M1/M2的平衡。     

双黄连对动脉粥样硬化大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达的影响实验研究

目的探究双黄连对动脉粥样硬化大鼠体内TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达的影响。方法建立动脉粥样硬化大鼠模型,进行双黄连不同剂量的处理后,对大鼠进行相关检测。结果双黄连处理组大鼠血清中的总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白均明显低于模型组,高剂量组效果更明显;将胸主动脉进行HE染色后发现,相比模型组,双黄连处理组均有管腔狭窄的减轻,脂质斑块的减少,泡沫细胞沉积的减少,蓝色颗粒钙化病灶的缩小;免疫组化实验和Western Blot实验检测发现,双黄连处理组大鼠的动脉组织中TLR4、MyD88、NF-κB表达相比模型组发生了明显降低,且高剂量组降低更明显。结论双黄连有利于减轻大鼠动脉粥样硬化的病症,其机理在于降低TLR4、MyD88、NF-κB蛋白的表达水平,且疗效显著。     

延续护理干预对慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗依从性的影响观察

目的:分析延续护理干预对慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗依从性的影响。方法:研究选取2017年1月~2017年12月某院肝二病区收治的112例乙型肝炎患者和2018年1月~2018年12月收治的98例乙型肝炎病毒患者作为研究对象,所有患者均进行抗病毒治疗,回顾性分析患者的病历资料。将2017年收治的112例患者作为常规组实施常规护理,将2018年收治的98例患者的作为研究组实施延续性护理,比较两组的护理效果。结果:研究组的治疗依从率为93.88%(92例),远高于常规组的77.68%(87例),两组数据比较存在统计学意义(P<0.05)。结论:延续性护理措施可以有效提高慢性乙型肝炎抗病毒治疗的依从性,可以在临床中推广使用。