阿魏酸对脂多糖损伤的PC12细胞和大鼠海马神经元细胞的保护作用

目的探讨阿魏酸(FA)对脂多糖(LPS)诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法体外实验:FA 2.5~40μmol·L-1与PC12细胞预处理12 h,加入LPS 0.15 g·L-1继续培养8 h,采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的释放;激光共聚焦显微镜检测细胞骨架蛋白F肌动蛋白的表达。体内实验:FA 25,50和100 mg·kg-1ip给予SD大鼠,每天1次,连续35 d。给药第29天时ip给予LPS 0.2 mg·kg-1,每天1次,连续7 d,运用免疫组织化学法观察大鼠海马神经元磷酸二酯酶4B(PDE4B)蛋白表达的变化;Western蛋白质印迹法检测c AMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达。结果体内实验:与LPS组细胞比较,FA 10,20和40μmol·L-1预处理组细胞活力明显升高(P<0.05),炎性因子TNF-α和IL-1β的释放显著减少(P<0.05),细胞骨架蛋白F肌动蛋白的分布和结构明显改善。体内实验:HE染色结果显示,预先给予FA 50和100 mg·kg-1可以减轻LPS诱导的大鼠海马神经元损伤;免疫组织化学实验结果显示,FA 50和100 mg·kg-1能够显著降低LPS诱导的大鼠海马神经元PDE4B蛋白表达水平的升高(P<0.05);Western蛋白印迹实验结果表明,FA 50和100 mg·kg-1可逆转LPS对CREB和p-CREB蛋白表达的抑制作用(P<0.05)。结论 FA对LPS诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元细胞损伤有保护作用,FA抗神经炎症的作用可能与抑制PDE4表达、激活c AMP/CREB信号通路相关。     

联合检测微循环、脂代谢及炎性相关因子对阿魏酸哌嗪治疗糖尿病肾病的临床评价

目的：探讨糖尿病肾病应用阿魏酸哌嗪联合厄贝沙坦治疗对患者微循环、血脂、炎性因子和特征性标志物的影响。方法136例糖尿病肾病患者随机分为对照组和联合组,每组68例。对照组采用饮食及生活方式干预、降糖药物控制血糖,厄贝沙坦片口服,初始剂量0.15 g/d,增量至0.3 g/d。联合组在对照组基础上加用阿魏酸哌嗪分散片,口服,100~200 mg/次,3次/d。2组均服药8周。观察2组治疗前后微循环指标[一氧化氮( NO)、内皮素-1(ET-1)、血栓素-2(TXB2)、6-酮-前列腺素F-1α(6-Keto-PGF-1α)、超氧化物歧化酶(SOD)]、血脂[胆固醇(TC)、三酰甘油( TG)、低密度脂蛋白( LDL)、高密度脂蛋白( HDL)]、炎性因子[ C反应蛋白( CRP)、肿瘤坏死因子-α( TNF-α)和白介素-6(IL-6)]和特征性标志物[同型半胱氨酸(Hcy)、胱抑素(CysC)、血管内皮生长因子(VEGF)]的水平。结果2组治疗后NO、6-Keto-PGF-1α和SOD水平均显著高于治疗前, ET-1、TXB2水平低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组治疗后NO、6-Keto-PGF-1α和SOD水平均显著高于对照组,ET-1、TXB2水平低于对照组,差异有统计学意义( P <0.05)。联合组治疗后TC、TG、LDL水平显著低于治疗前和对照组,HDL水平显著高于治疗前和对照组,差异有统计学意义( P <0.05),对照组治疗后TC水平低于治疗前,HDL水平高于治疗前,差异有统计学意义( P <0.05)。联合治疗组治疗后CRP、TNF-α和IL-6水平显著低于治疗前和对照组,差异有统计学意义( P <0.05),对照组上述指标治疗前后差异无统计学意义( P >0.05)。2组治疗后VEGF、CysC和Hcy水平均低于治疗前,差异有统计学意义( P <0.05),联合治疗组治疗后上述指标均低于对照组,差异有统计学意义( P <0.05)。结论应用阿魏酸哌嗪联合厄贝沙坦治疗糖尿病肾病可以有效改善患者肾脏微循环障碍,纠正脂质代谢紊乱,降低炎性反应程度,减轻肾脏损害,达到保护肾脏的作用。     

四物汤配方颗粒的质量标准研究

目的：建立四物汤配方颗粒的质量控制方法。方法：采用薄层色谱（TLC）法鉴别四物汤配方颗粒中的熟地黄、当归、川芎、白芍,采用高效液相色谱（HPLC）法测定四物汤配方颗粒中的芍药苷、阿魏酸的含量。结果：TLC法分离较好,阴性无干扰;HPLC法芍药苷线性范围为0.1031～1.6496μg,r=1.000;阿魏酸线性范围为0.0209～0.3344μg,r=0.9997。平均回收率分别为100.46%、101.55%, RSD均小于2.0%。结论：该方法专属性强,重复性好,可用于控制四物汤配方颗粒的质量。     

芍药甙配伍阿魏酸对体外培养的大鼠海马和隔区神经元的影响

目的　研究芍药甙配伍阿魏酸对海马和隔区神经元的影响。方法　用新生SD大鼠的海马和隔区神经元进行体外培养 ,分别加入阿魏酸、芍药甙和阿魏酸与芍药甙的混合物 (配伍组 ) ,用MTT测量法测量培养神经元的光密度 (A值 )。结果　海马神经元A值在对照组、阿魏酸组、芍药甙组和配伍组分别为 0 .6 5± 0 .0 9、0 .73± 0 .11、0 .70± 0 .11和 0 .81± 0 .0 8,隔区神经元A值分别为 :0 .6 0± 0 .0 6、0 .6 7± 0 .0 7、0 .6 7± 0 .10和 0 .77± 0 .0 6。与对照组比较 ,阿魏酸组和芍药甙组的A值明显增高 (P <0 0 5 ) ;与对照组、阿魏酸组和芍药甙组比较 ,配伍组 A值明显增高 (P <0 0 1或 P <0 0 5 )。结论　芍药甙配伍阿魏酸可提高芍药甙对海马和隔区神经元的存活和生长的促进作用。     

单纯形网格法优化外用中药不同油水分配系数多成分微乳制剂处方

目的采用单纯形网格法优化中药不同油水分配系数(log P值)多成分微乳给药系统,并对其质量进行评价。方法通过饱和溶解度法筛选了表面活性剂、助表面活性剂及油相,并以蛇床子素、川芎嗪、阿魏酸、葛根素及京尼平苷为模型药代表中药复杂成分,在伪三元相图的基础上,应用单纯形网格法优化中药不同油水分配系数多成分微乳,以外观、粒径及多分散指数(PDI)为评价指标,通过Design Expert 8.06软件进行试验设计和模型构建,响应面数据分析优化和验证最佳处方组成。通过对微乳外观、稳定性及其粒径、Zeta电位等的测定对其进行质量评价。结果优化得到的最佳处方为油酸-Labrasol-丙二醇-水(5.303∶29.336∶7.334∶58.027),所形成的微乳外观澄清透明,流动性好,呈淡黄色,平均粒径为(118.77±3.37)nm,PDI为0.282±0.020,Zeta电位为(0.346±0.050)m V,稳定性良好。结论优化之后的中药不同油水分配系数多成分微乳性质稳定,载药量高;制备并优化了适宜于不同logP值(-1.01~3.85)成分的微乳载体,为此范围内的多成分中药提供可行的微乳载体,简化其前期微乳处方筛选工作。     

兜唇石斛的酚类化学成分研究

目的研究石斛属植物兜唇石斛Dendrobium aphyllum茎的化学成分。方法采用硅胶、凝胶、MCI、中压制备色谱(MPLC)和高效液相半制备色谱(semi-HPLC)等方法进行分离纯化,根据理化性质、核磁共振谱及质谱等方法鉴定化合物结构。结果从兜唇石斛的90%乙醇提取物中分离得到10个化合物,分别鉴定为4,7-二羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲(1)、2,4-二羟基-7-甲氧基-9,10-二氢菲(2)、2,5,7,9-四羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲(3)、4,7,9-三羟基-5-甲氧基-9,10-二氢菲(4)、松脂醇(5)、丁香酚-β-D-葡萄糖苷(6)、反式阿魏酸(7)、正十二烷醇(8)、β-谷甾醇(9)、β-胡萝卜苷(10)。结论化合物1~2、5~8为首次从该属植物中分离得到,化合物1~10均为首次在该植物中分离得到。     

HPLC-DAD法同时测定参芪十一味颗粒的11种成分

目的建立HPLC-DAD法同时测定参芪十一味颗粒(SSG)中23-乙酰泽泻醇B、阿魏酸、毛蕊花糖苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、天麻素、大黄酚、橙黄决明素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和金丝桃苷的方法。方法采用RP-HPLC法,色谱柱为Waters XBridge-C18(250 mm×4.6 mm,5.0μm);流动相为甲醇-乙腈-水(15∶80∶5)和乙腈-0.1%磷酸水溶液(10∶90),梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min;柱温35℃,进样量10μL。结果 23-乙酰泽泻醇B、阿魏酸、毛蕊花糖苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、天麻素、大黄酚、橙黄决明素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和金丝桃苷11种成分能够达到很好分离;其线性范围分别为0.4~8.0μg/m L(r=0.999 2)、0.2~4.0μg/m L(r=0.999 5)、0.2~4.0μg/m L(r=0.999 5)、0.1~2.0μg/m L(r=0.999 6)、0.1~2.0μg/m L(r=0.999 7)、0.1~2.0μg/m L(r=0.999 4)、0.5~10μg/m L(r=0.999 2)、0.6~12μg/m L(r=0.999 2)、0.4~8.0μg/m L(r=0.999 4)、1.0~20μg/m L(r=0.999 6)、0.8~16μg/m L(r=0.999 3),平均加样回收率分别为98.1%、98.1%、99.1%、98.3%、99.5%、99.9%、98.5%、100.4%、101.6%、99.7%、101.2%,RSD分别为0.9%、1.6%、1.6%、1.8%、1.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.4%、0.9%、1.1%(n=6)。9批次供试品中23-乙酰泽泻醇B、阿魏酸、毛蕊花糖苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、天麻素、大黄酚、橙黄决明素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和金丝桃苷质量浓度分别为0.081~0.089、0.261~0.269、0.060~0.069、0.038~0.047、0.030~0.037、0.042~0.049、0.420~0.428、0.141~0.151、0.178~0.189、0.107~0.117、0.069~0.078 mg/g,结果表明本品各批次之间差异较小。结论本方法操作简便,测定结果准确可靠,可用于SSG的质量控制。     

鸡冠花止血有效部位化学成分研究

目的研究鸡冠花Celosia cristata止血有效部位的化学成分。方法采用正相硅胶柱色谱、ODS柱色谱和HPLC等方法对其化学成分进行分离、纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定化合物结构。结果从鸡冠花95%乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位分离得到9个化合物,分别鉴定为northalifoline(1)、韭子碱乙(2)、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(3)、1-feruloyl-β-D-glucopyranoside(4)、阿魏酸酯6-O-β-D-吡喃葡萄糖酯[5(α构型)、6(β构型)]、2-甲氧基-4-(2-丙烯基)-苯基-β-D-吡喃葡糖苷(7)、羽扇豆醇(8)、阿魏酸(9)。结论所有化合物均为首次从鸡冠花植物中分离得到,也均为首次从青葙属植物中分离得到。     

血栓心脉宁片UPLC-PDA指纹图谱研究

目的建立血栓心脉宁片(XXT)的UPLC-PDA指纹图谱,考察不同批次XXT质量的一致性,为XXT质量稳定性提供可靠的科学依据。方法样品经甲醇提取,采用Waters Acquity UPLC HSS T3(50 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,190~400 nm波长扫描,体积流量0.5 m L/min,进样量3μL,柱温40℃;对30批XXT样品进行方法学考察、相似度计算和聚类分析;单味药材进行共有峰归属,并通过对照品对共有峰的化学成分进行指认。结果建立了XXT UPLC-PDA指纹图谱,280 nm波长下标定28个共有峰,其中1、10、12~16、18、21~28号峰来自丹参,2~4、6、8、9、17号峰来自川芎,3、7、9、11、16号峰来自毛冬青、5号峰来自槐花,19、20号峰来自蟾酥,经对照品比对指认出4号峰为阿魏酸、5号峰为芦丁、13号峰为丹酚酸B、19号峰为酯蟾毒配基、20号峰为华蟾酥毒基、28号峰为丹参酮IIA;通过聚类分析30批XXT可分为2类,经中药色谱指纹图谱评价软件(2012版)计算得30批XXT相似度均大于0.960。结论建立的XXT UPLC-PDA指纹图谱具有良好的精密度、稳定性和重复性,方法简便可靠,可为进一步完善XXT的质量评价提供参考依据。     

当归活性成分阿魏酸钠干预老年冠状动脉粥样硬化性心脏病心绞痛患者血液抗氧化能力和保护血内皮细胞功能

目的：观察中药当归提取的主要活性成分阿魏酸钠对老年冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病）心绞痛患者血浆及红细胞中过氧化脂质含量和超氧化物歧化酶活力、全血谷胱甘肽过氧化物酶活性、红细胞过氧化氢酶活性、血浆内皮素和一氧化氮水平的影响。 方法：①选择2004—06／2005—06吉林大学第一医院老年病科住院老年冠心病心绞痛患者42例（男35例，女7例）为治疗组。年龄61～77岁。均按国际心脏病学会和及世界卫生组织制定的缺血性心脏病的命名和诊断标准诊断为冠心病心绞痛。选择同期本院年度进行健康体检人员40名男性为对照组，年龄58～76岁。纳入对象均对检测指标知情同意。治疗组给予阿魏酸钠注射液[巴里莫尔制药（通化）有限公司，生产批号20060501]300mg加入50g／L葡萄糖注射液250mL，静脉滴注，1次／d，疗程2周。②治疗组患者于治疗前和治疗2周末，对照组于约定日，采用硫代巴比妥酸显色法测定血浆及红细胞中过氧化脂质，采用连苯三酚自氧化法测定血浆及红细胞超氧化物歧化酶活性，采用酶动力学法测定红细胞过氧化氢酶活性。采用酶偶联分光光度法测定全血谷胱甘肽过氧化物酶活性。采用硝酸还原法测定血浆一氧化氮水平，采用放射免疫测定血浆内皮素水平。 结果：老年冠心病心绞痛患者42例和体检者40名均进入结果分析。①阿魏酸钠的清除氧自由基能力：治疗组治疗前血浆和红细胞过氧化脂质含量明显高于对照组（P＜0.01），血浆和红细胞超氧化物歧化酶活性、红细胞过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性明显低于对照组（P＜0．01）。治疗组治疗后血浆和红细胞过氧化脂质含量明显低于治疗前（P＜0,05），血浆和红细胞超氧化物歧化酶活性、红细胞过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性明显高于治疗前（P＜0．05～0．01）。说明阿魏酸钠有清除自由基、减轻膜脂质过氧化、提高抗氧化酶活性的作用。②阿魏酸钠对血管内皮功能的影响：治疗组治疗前血浆一氧化氮水平为（21.1&;#177;11．7）μmol／L，低于对照组[（36、4&;#177;10．2）μmol／L，P＜0.01]，血浆内皮素水平为（94．4&;#177;16．9）ng／L，高于对照组[（51．8&;#177;17．7）．g／L，P＜0．01]。治疗组治疗后血浆一氧化氮水平为（34．7&;#177;10．9）μmol／L，高于治疗前（P＜0．01），血浆内皮素水平为（65．4&;#177;17．4）ng／L，低于治疗前（P＜0．01）。 结论：阿魏酸钠干预老年冠心病心绞痛患者具有清除自由基、减轻膜脂质过氧化、提高抗氧化酶活性的作用；同时可降低血浆内皮素水平，升高一氧化氮水平，从而改善血管内皮功能。