野生型和突变型nm23-H1基因原核表达载体的构建、表达及纯化

背景与目的 nm23-H1基因是一个肿瘤转移抑制基因,但关于nm23-H1基因抑制肿瘤转移的生化机理目前并不清楚.该实验目的就是构建nm23-H1野生型和P96S、H118F突变型原核表达载体,并在大肠杆菌中表达及纯化.方法 通过PCR方法扩增野生型和突变型nm23-H1目的片断,利用基因重组技术构建pET28a-nm23-H1野生型和突变型原核表达载体,并进行酶切和测序鉴定,鉴定正确克隆转化BL21(DE3)溶源菌,进行蛋白表达及可溶性分析,同时采用镍柱亲和层析法进行纯化,应用Western blot方法对纯化后蛋白进行鉴定检测.结果 通过酶切和测序鉴定,pET28a-nm23-H1野生型和突变型原核表达载体序列正确,编码框正确.转化溶源菌后能够表达目的蛋白,蛋白表达量高,且均为可溶性蛋白,Western blot检测结果提示野生型和突变型nm23-H1蛋白分子量为20 kDa,与预计值相符.结论 成功构建pET28a-nm23-H1野生型和P96S、H118F突变型原核表达载体,所表达蛋白可用于下一步实验研究.     

RNA干扰抑制HMGB1基因表达对肺癌细胞L9981增殖和侵袭的影响

背景与目的 研究小干扰RNA抑制高迁移族蛋白B1基因表达对肺癌细胞L9981增值和侵袭能力的影响.方法 设计合成靶向HMGB1基因的siRNA,采用阳离子脂质体试剂瞬时转染肺癌细胞株L9981,利用实时荧光定量PCR和Western blot检测RNA干扰后HMGB1基因的沉默效果,评价siRNA设计的合理性及RNA干扰抑制HMGB1表达的有效性;用细胞活力计数仪测定3组细胞活力;分别在RNA干扰后24、48、72和96小时应用MTF实验检测细胞生存状态,计算生长抑制率并绘制生长曲线;应用boyden chamber法检测侵袭能力的差异.结果 靶向HMGB1的stRNA成功抑制肺癌细胞株L9981中HMGB1基因及蛋白表达,细胞活力检测仪测定RNA干扰48小时后,细胞活力显著下降;MTT测定肺癌细胞生长受到明显抑制;boyden chamber小室细胞侵袭实验结果肺癌穿膜细胞数明显减少.结论 应用siRNA技术能有效的抑制HMGB1基因的表达,同时有效抑制L9981细胞的体外增值和侵袭,为肺癌的生物学治疗提供了新思路.     

实时荧光定量PCR和测序法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的比较

背景与目的 以厄洛替尼(Erlotinib)为代表的小分子表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂在治疗非小细胞肺癌已经取得很好的疗效.许多研究发现表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变与酪氨酸激酶抑制剂的疗效密切相关.本研究目的是通过比较荧光定量PCR(Real-time PCR)和DNA测序法检测EGFR基因突变的一致性,建立适用于临床的EGFR基因突变检测方法.方法 应用荧光定量PCR(Real-time PCR)及DNA测序法检测103例非小细胞肺癌标本的EGFR外显子19和21的基因突变,结果比较采用卡方检验.结果 两种方法对EGFR外显子19和21的基因突变的榆测结果无统计学差异,且荧光定量PCR法比测序法更快捷和灵敏.结论 与测序法相比,荧光定量PCR更适用于临床检测.     

187例非小细胞肺癌中EGFR基因突变和扩增的检测及其临床意义

背景与目的 现有的研究表明表皮生长因子受体(EGFR)相关信号通路在肺癌的发生和发展中起重要作用.EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)是目前针对EGFR治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的重要分子靶向药物.EGFR的不同存在状态(基因突变和基因扩增)与TKIs的疗效相关.本研究旨在探讨非小细胞肺癌患者中EGFR的存在状态及其临床意义,从而为肺癌病人"个体化分子治疗"提供依据.方法 研究对象为187例NSCLC病例.用Real-time PCR技术检测EGFR基因19、21外显子的突变状态;用荧光原位杂交(FISH)技术检测EGFR基因的扩增情况,并进一步分析EGFR基因的突变和扩增与患者临床病理生理特征的关系.结果 :FISH结果显示,47.6%(98/187)的肺癌患者存在EGFR基因的扩增,而EGFR基因的扩增与患者的年龄、性别、组织学类型、吸烟状态及是否存在转移无关(P>0.05);Real-time PCR结果显示:20.3%(38/187)的肺癌患者存在EGFR外显子19、21的突变.EGFR基因突变率在女性(32.3%vs14.4%男性)、腺癌(35.5%vs9.9%非腺癌)、不吸烟(38.2%vs10.1%吸烟)患者中明显高(P<0.05).EGFR基因扩增与基因突变之间具有一定的相关性,在早期肺癌、腺癌及非吸烟的女性患者中,EGFR基因外显子突变常同时伴有EGFR基因的扩增.有EGFR基因突变或/和基因扩增的患者生存期均高于无EGFR基因异常者,但是没有统计学差异(P>0.05).有EGFR基因突变的患者易对TKIs治疗有效.结论 EGFR基因突变率在不同的NSCLC患者中不同,其中,在女性、腺癌和不吸烟患者中突变率高;层GFR基因扩增与患者的性别、组织类型、吸烟状态等临床特征无明显关系,与患者预后的相关性有待进一步研究.     

异硫氰酸酯通过调节氧化——还原平衡抑制非小细胞肺癌A549细胞生长

背景与目的异硫氰酸酯是广泛存在于十字花科蔬菜中的天然抗癌物质,具有抑制多种肿瘤细胞生长的特性。     

晚期非小细胞肺癌治疗策略的演变:从2009放眼2012

新近的临床试验资料,包括2009年美国临床肿瘤协会(ASCO)年会上报道的资料,有力地推动了对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的现代治疗策略的改革。此改革蕴含的主题包括:(1)基于组织学类型的治疗,(2)预     

E-钙粘蛋白复合体与肺癌的侵袭转移

肺癌是发病率和死亡率增长最快、对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤。肿瘤的侵袭转移是其恶性特征和标志,也是肺癌患者治疗失败和死亡的主要原因。肿瘤细胞从原发部位脱落、迁移是肿瘤转移的重要环节,这一过程与肿瘤细胞间粘附功能的降低密切相关。由     

应用SYBR green Ⅰ荧光PCR研究GSTM1基因多态性与肺癌遗传易感性之间的相关性

背景与目的谷胱甘肽S转移酶M1(glutathione S-transferase M1,GSTM1)基因是参与体内多种致癌物代谢的重要的II相代谢酶,其基因多态性被认为与人肺癌遗传易感性有关。本研究旨在探讨天津地区汉族人群GSTM1基因多态性与肺癌遗传易感性之间的关系。方法采用SYBR green I实时荧光PCR熔解曲线分析方法检测天津地区265例肺癌患者和307例对照者GSTM1基因多态性,应用病例对照研究分析其与肺癌易感性及不同病理类型之间的关系。结果①GSTM1(-)基因型在肺癌组和对照组的分布频率分别为56.6%和57.0%,两组之间无统计学差别(χ2=0.831,P=0.362)。经性别、年龄、吸烟状况调整后分析,携带GSTM1(-)基因型个体未增加患肺癌危险性(OR=0.840,95%CI:0.578-1.221,P=0.362)。②按病理分层分析GSTM1基因型与肺癌各病理类型之间的关系,其中鳞癌、腺癌、小细胞肺癌与其它病理类型肺癌患者GSTM1(-)基因型分布频率分别为65.8%、48.5%、47.8%和52.2%,与对照组相比,不同病理类型患者肺癌危险性均无明显统计学差异(P0.05)。结论在天津地区人群中GSTM1基因多态性与肺癌遗传易感性之间无相关性。     

高低转移大细胞肺癌细胞株L9981和NL9980间甲基化差异基因的初步研究

背景与目的 肺癌是人类肿瘤中最容易发生侵袭转移的恶性肿瘤之一.影响肺癌患者预后及生存的 最主要因素是远处转移.本文旨在分析具有相似遗传背景和不同转移潜能的人大细胞肺癌细胞株间基因甲基化的 差异,为深入研究肿瘤转移机制提供充分的目标基因选择和发现肿瘤相关的新基因的机会.方法 应用全基因组甲 基化芯片杂交技术分析具有相同遗传背景和不同转移潜能的人大细胞肺癌细胞株L9981和NL9980之间差异甲基化基 因,并运用生物信息学的方法分析这些差异基因.结果 与NL9980相比,在L9981细胞株中有1 552个高甲基化DNA 片断共涉及735个基因,其中656个已知基因及79个未知基因.低甲基化DNA片段1 787个,涉及809个基因,其中698 个已知基因及111个未知基因.这些基因涉及细胞生物进程及其调节、基因表达、信号传导、细胞通讯、细胞运 动、细胞粘附及血管生成等.结论 抑癌基因及信号通路负向调节基因的高甲基化及癌基因、细胞粘附因子的低甲 基化可能与L9981的侵袭性及克隆能力强有关.     

复方阿托品点眼后瞳孔的改变

<正> 阿托品用于防治青少年近视,是近年来防治学生近视工作的一个重要进展,各地均有报导,疗效肯定。但也存在某些副作用。如用药后瞳孔扩大的问题,是本药正常副反应。为了探讨复方阿托品点药后瞳孔反应,我校在应用复方阿托品点眼防治学生近视中,对50例假性近视学生进行了瞳孔的观察,现将结果情况报告如下。