13-甲基十四烷酸对氧反常诱导大鼠胚脑皮质神经元凋亡和形态学损伤的保护作用

目的探讨13-甲基十四烷酸(13-MTD)对氧反常诱导大鼠胚脑皮质神经元凋亡和形态学损伤的保护作用。方法原代培养大鼠胚脑皮质神经元,并以神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫荧光法鉴定。将神经细胞随机分为正常对照组、模型组和不同剂量13-MTD组,每组设6个复孔。氧糖剥夺3h/再复氧糖24h(OGD3h/R24h)方法制备神经元氧反常模型,于再复氧糖即刻分别给予13-MTD 5、10、20、40mg/L干预。倒置相差显微镜下观察神经细胞形态改变;磺酰罗丹明B(SRB)法测定神经细胞存活率;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色法观察神经细胞凋亡;透射电子显微镜下观察神经元超微结构的改变。结果与正常组比较,模型组神经元呈现病理改变,神经细胞存活率显著下降(P0.01),细胞凋亡显著增多(P0.01),神经元超微结构损伤明显,可见核内染色质边集或凝聚成块状,胞质内细胞器明显减少甚至消失,线粒体肿胀、嵴断裂甚至消失等;与模型组比较,不同剂量的13-MTD可有效改善上述变化(P0.05,P0.01),使神经元形态及其超微结构损伤明显恢复,且存在剂量依赖关系,以13-MTD 20mg/L改善更显著(P0.01)。结论 13-MTD对氧反常诱导的大鼠胚脑皮质神经元损伤具有明显保护作用,其可能通过改善神经细胞形态和线粒体超微结构损伤,减少神经元凋亡,提高细胞存活率。     

衰老大鼠模型骨髓基质细胞的生物学特点

目的探讨衰老大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)的生物学特点,为阐释机体衰老对造血诱导微环境的影响提供实验依据。方法雄性健康SD大鼠随机分为正常组和衰老模型组。衰老模型组:大鼠皮下注射D-半乳糖120mg/kg,qd×42;正常对照组:大鼠皮下注射等时与等量生理盐水。衰老动物复制完成后第2天,分离骨髓单个核细胞(BMNCs)进行髓系造血祖细胞混合集落生成单位(CFU-Mix)培养。采用全骨髓贴壁法培养和传代BMSCs,取第3代细胞进行检测,CCK-8法测定BMSCs增殖能力;流式细胞术分析细胞周期;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老BMSCs百分率;ELISA检测细胞培养上清液中白细胞介素(IL)-6、干细胞生长因子(SCF)含量;DCFH-DA荧光染色流式检测BMSC活性氧簇(ROS)水平;酶学法检测BMSCs内过氧化物丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blotting检测衰老相关蛋白P16、P21、P53表达。结果与对照组相比衰老模型组大鼠CFU-Mix集落形成数量明显降低;BMSCs增殖能力显著下降;处于G0/G1期的BMSCs比例增高、S期细胞比例降低,细胞阻滞于G1期;SA-β-Gal染色阳性的BMSCs百分率显著上升;BMSCs培养上清液中IL-6、SCF含量明显下降;BMSC内ROS、MDA氧化损伤指标上升,SOD抗氧化指标下降;衰老相关蛋白P16、P21、P53表达明显上调。结论衰老大鼠骨髓基质细胞表现衰老相关生物学改变,其机制可能与氧化损伤激活衰老信号通路有关。     

人参皂苷Rg1对大鼠胸腺结构与功能的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对大鼠胸腺组织结构与功能的影响及相关机制。 方法 SD大鼠随机分为2组,每组10只。Rg1注射组,腹腔注射Rg1 20mg/kg,qd×28d;对照组,等时注射等量生理盐水。药物注射完成后第2天,取胸腺称重测定胸腺指数,石蜡切片与HE染色观察胸腺组织结构;衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测胸腺细胞衰老,细胞计数试剂盒（CCK-8）检测胸腺细胞对刀豆蛋白A（ConA）刺激的增殖能力,ELISA检测胸腺细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白细胞介素（IL)-2与IL-6的能力,流式细胞术检测胸腺细胞周期、细胞凋亡率与活性氧（ROS）含量,酶学检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量与还原性谷胱甘肽（GSH）与氧化性谷胱甘肽（GSSH）的比值,Western blotting 检测细胞衰老相关蛋白P21、P53、Rb表达。 结果 与对照组相比,注射Rg1能提升大鼠胸腺指数,增加胸腺皮质面积比例,提高胸腺细胞增殖能力和S期比例,降低G₁期与G₂/M期细胞比例,减少胸腺细胞凋亡和SA-β-Gal阳性细胞百分率,促进胸腺细胞分泌GM-CSF,TNF-α、IL-2、IL-6,提升胸腺细胞SOD活性和GSH/GSSG比例,降低ROS、MDA含量,下调P53、P21、RB蛋白表达。 结论 人参皂苷Rg1对大鼠胸腺结构与功能有明确的保护作用,其机制可能与抑制氧化损伤和下调p53/p21/Rb信号通路有关。     

当归多糖对衰老模型大鼠脾脏结构与功能的影响

目的 探讨当归多糖（ASP）对衰老模型大鼠脾脏结构与功能影响及其机制。 方法 SD大鼠随机分为正常对照组,ASP对照组,衰老模型组,ASP衰老模型组,每组10只。衰老模型组皮下注射D-半乳糖（120mg/kg）qd×42d;ASP衰老模型组注射D-半乳糖的剂量与时间同衰老模型组,第15天起腹腔注射ASP (100 mg/kg) qd×28d;正常对照组皮下注射等量生理盐水qd×42d;ASP对照组注射等量生理盐水qd×14d,第15天起腹腔注射ASP（同ASP衰老模型组)。药物注射完成后第2天,取脾脏测定脾指数,石蜡切片观察脾脏显微形态学;衰老β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色观察脾细胞百分率,CCK8测定脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力;流式细胞术检测脾细胞周期与活性氧簇（ROS）含量; ELISA检测脾细胞分泌TNF-α、GM-CSF能力与丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶(SOD)含量;Western blotting 检测衰老相关蛋白P53、P21、RB蛋白表达。 结果 与正常对照组比较,D-半乳糖致衰老模型组大鼠脾指数,脾脏白髓面积比例,脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力,S期比例及TNF-α、GM-CSF的分泌能力,SOD活性明显降低;脾细胞的SA-β-Gal阳性率,G₁期与G₂/M期细胞比例,ROS、MDA含量,P53、P21、RB蛋白表达显著增高。与衰老模型组比较,ASP使D-半乳糖致衰老模型大鼠脾指数,脾脏白髓面积比例,脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力,S期比例与TNF-α、GM-CSF的分泌能力,SOD活性明显提高;脾细胞SA-β-Gal阳性率,G₁期及G₂/M期细胞比例,ROS、MDA含量,P53、P21、RB蛋白表达有显著抑制作用。
结论 D-半乳糖复制的衰老模型大鼠脾脏结构与功能损伤明显,当归多糖对其致衰损伤有明确的保护作用。     

吸入高浓度氢气增强四氯化碳损伤性大鼠生精细胞核糖体蛋白S6激酶的表达

目的探讨吸入3%氢气对四氯化碳(CCl4)损伤性大鼠生精细胞核糖体蛋白S6激酶(p70s6k)表达及其增殖功能的影响。方法将18只健康雄性SD大鼠随机分成对照组、CCl4组和氢气治疗组。对照组每周一、四背部皮下注射橄榄油(0.12ml/100g),CCl4组和氢气组每周一、周四皮下注射体积分数60%的CCl4-橄榄油(0.3ml/100g),连续4周。氢气组自实验的第22天吸入3%氢气,1h/d,连续7d。取右侧睾丸和附睾,行石蜡包埋切片,苏木素伊红染色和免疫组织化学染色。取左侧睾丸组织,行Western blotting检测。结果对照组睾丸生精小管内可见多层生精细胞,排列有续,结构完整。CCl4组睾丸生精小管细胞层数减少,结构紊乱,附睾管柱状上皮变薄;氢气组生精细胞数量和附睾管高柱状上皮细胞明显改善。CCl4组大鼠附睾精子密度较对照组降低,氢气组的精子密度明显高于CCl4组(t=4.91,P0.05)。免疫组织化学染色显示,氢气组生精细胞质中p70s6k(t=7.63,P0.05)和PCNA(t=20.08,P0.05)的表达明显强于CCl4组。Western blotting检测显示,氢气组睾丸组织中p70s6k的表达与CCl4组相比明显增强(t=3.64,P0.05)。结论吸入高浓度氢气能明显增强CCl4损伤性大鼠睾丸生精细胞p70s6k的表达,改善CCl4损伤引起的的生精细胞的增殖功能。     

何首乌饮减轻β-淀粉样蛋白诱导的海马神经元损伤的作用机制

目的 探讨何首乌饮对β 淀粉样蛋白（Aβ）诱导的大鼠原代培养海马神经元损伤保护作用及可能机制。方法 采用新生24h 内的SD大鼠进行原代培养海马神经元,将培养10d的海马神经元分为模型组、何首乌饮保护组、何首乌饮治疗组、何首乌饮对照组及空白对照组。Hoechst33258染色观察海马神经元的凋亡率;免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测各组海马神经元硫氧还蛋白1（Trx1）蛋白和mRNA的表达情况。 结果 模型组细胞凋亡率增高（P<0.05）,Trx1蛋白和mRNA的表达量明显减少（P<0.05）;与模型组相比,何首乌饮治疗组和预防组的凋亡率明显降低（P<0.05）,Trx1蛋白和mRNA的表达量明显增加（P<0.05）。 结论 何首乌饮可明显减轻Aβ诱导的海马神经元的损伤,其机制可能与增加抗氧化蛋白Trx1的表达有关。     

慢病毒介导核受体相关因子1基因修饰骨髓间充质干细胞移植治疗帕金森病模型大鼠

目的探讨慢病毒介导核受体相关因子1(Nurrl)基因修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植至帕金森病(PD)模型大鼠纹状体后对PD大鼠的治疗作用。方法采用神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)纹状体注射成功制备PD大鼠模型18只,将携带绿色荧光的慢病毒GV287-Nurr1感染大鼠BMSCs,然后随机移植入6只PD模型大鼠的纹状体内(实验组),设生理盐水组(假移植组)6只及感染空慢病毒GV287的BMSCs组(对照组)6只;术后第1、2、4周观察大鼠的行为改善情况;免疫组织化学染色法检测纹状体及黑质中Nurrl和酪氨酸羟化酶(TH)蛋白的表达变化;RT-PCR法检测黑质Nurrl mRNA和TH mRNA的表达变化。结果慢病毒感染后的BMSCs及上清中均检测到Nurr1蛋白;对照组与实验组大鼠在移植后第1、2、4周的旋转行为较假移植组均有所改善,且实验组比对照组改善更明显;实验组纹状体Nurr1阳性细胞有效存活并沿胼胝体向皮质及对侧脑组织迁移;实验组纹状体及黑质损毁侧Nurrl和TH蛋白及mRNA的表达较假移植组和对照组明显增高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论慢病毒介导Nurr1基因修饰大鼠BMSCs移植治疗PD大鼠,能有效地改善PD模型大鼠的行为学症状,增加大鼠脑内纹状体和黑质区Nurr1和TH的表达。     

ShcC proteins: Brain aging and beyond

To date, most studies of Shc family of signaling adaptor proteins have been focused on the near-ubiquitously expressed ShcA, indicating its relevance to age-related diseases and longevity. Although the role of the neuronal ShcC protein is much less investigated, accumulated evidence suggests its importance for neuroprotection against such aging-associated conditions as brain ischemia and oxidative stress. Here, we summarize more than decade of studies on the ShcC expression and function in normal brain, age-related brain pathologies and immune disorders with a focus on the interactions of ShcC with signaling proteins/pathways, and the possible implications of these interactions for changes associated with aging.     

氟中毒大鼠听觉脑干诱发反应的特点

目的通过尿、便等指标观察氟中毒大鼠听觉脑干诱发反应(ABR)变化情况,从而进一步探讨氟中毒对听力影响的作用机制。方法选择生后30 d(体重60~100 g)的Wistar大鼠,雌雄不分。实验组3O只,其中实验1组(F组)l5只,喂饮含氟50 mg/L的自来水;实验2组(f组)15只,喂饮含氟100 mg/L的自来水。喂养6个月,制成慢性氟中毒模型。对照组15只。6个月后观察尿、便氟含量等各项指标。在2%戊巴比妥钠轻麻下,首先测定3组鼠的听觉脑干电位,而后取其牙齿观察氟中毒情况。结果实验1组和实验2组有典型的氟斑牙出现,尿、便氟含量差异显著。实验1组和实验2组与对照组相比听觉脑干电位I、Ⅲ、和V波等各波潜伏期时间差异显著(P<0.05),而实验1组与实验2组无差异。结论慢性氟中毒对听力有明显影响,这种听力损失是高频听力损失,慢性氟中毒致听力损失的机制可能是氟致听神经的直接毒作用。     

顺铂建立大鼠卵巢早衰模型的实验研究

目的：探讨采用临床常用药物顺铂建立化疗性损伤卵巢早衰动物模型的方法。方法：通过观察阴道脱落细胞选取有正常动情周期的雌性SD大鼠60只随机分为正常组,低剂量组和高剂量组。按4 mg/kg和6 mg/kg分别给予低、高剂量组腹腔注射顺铂注射液,每周1次,连续2周。每天观察大鼠一般情况,体重,动情周期。取材后测定血清中E2、FSH、LH和Pro含量,光镜下观察卵巢病理组织形态变化。结果：体重下降,动情周期紊乱,动情间期延长。与正常比较,高、低剂量组E2水平不同程度降低,FSH、LH水平升高（P<0.05）。孕酮含量各组比较无统计学意义（P>0.05）。卵泡计数减少。结论：化疗药物顺铂可致大鼠卵巢功能明显衰退,卵泡发育障碍,生殖能力受损。为基础研究建立稳定的卵巢早衰动物模型提供一种操作简单,成功率高,结果可靠的实验方法。