单向火箭免疫电泳测定大鼠血清载脂蛋白AI浓度

单向火箭免疫电泳测定大鼠血清载脂蛋白AI(Apo AI)浓度,操作简单,定量准确。待测样品采用9M脲致变性使抗原决定簇暴露,减少了样品处理时间,得到较好的测定结果。用此法测得雄性和雌性SD大鼠血清Apo AI浓度分别为45.76±6.0mg/dl(n=10)、60.60±9.4mg/dl(n=10)。批内CV为4％,批间CV为7％。正常大鼠注射胰岛素,血清Apo AI浓度明显降低。     

p16／MTSI基因缺失在骨髓增生异常综合征发病中作用的研究

目的 探讨多肿瘤抑制基因(p16／MTSI)缺失与骨髓增生异常综合征(MDS)发病的关系。方法 采用PCR技术．对30例MDS的p16／MTSI基因缺失情况进行了分析。结果 30例MDS患者未见有p16基因缺失。结论 提示p16基因缺失和MDS的发病关系不大。     

多肽-主要组织相容性复合体技术及其在肿瘤和传染病研究中的诊断性应用

CD8+T细胞具有细胞杀伤功能,是体内抗肿瘤和抗病毒的主力军.抗T细胞亚群单克隆抗体常常被用于检测T细胞亚群在肿瘤和病毒性疾病发生、发展过程中的变化以及治疗前后的变化,这对于肿瘤和病毒性疾病的免疫学基础研究以及临床应用研究的深入起到了很大的推动作用[1].但是抗T细胞亚群单克隆抗体区分不出这些CD8+T细胞的抗原特异性,而识别抗原特异性CD8+T细胞对于认识肿瘤和传染病免疫反应的本质十分重要.自从T 细胞被发现以来,人们一直在尝试能够识别出T细胞的抗原特异性.有限稀释法(limiting dilution analysis, LDA)曾经被用于检测抗原特异性T细胞[2,3]. 但该技术为间接功能测定法,不仅敏感性低而且繁琐费时.近年来,一种全新的能够直接定量检测不同抗原特异性T细胞的方法被发明使用.这种方法为多肽-主要组织相容性复合体(peptide-major histocompatibility complex,MHC)技术.     

褪黑素通过 ERK/MAPK 通路调控 AS 兔动脉内皮细胞 MLCK 表达

 目的 探讨褪黑素（ melatonin ， MLT ）是否可通过信号调节激酶 / 丝裂原活化蛋白激酶（ ERK/MAPK ）通路调控动脉粥样硬化（ atherosclerosis ， AS ）模型兔动脉内皮细胞肌球蛋白轻链激酶（ myosin light chain kinase ， MLCK ）的表达。 方法 复制兔 AS 模型，分析血清中相关脂质成分的动态变化；γ -³²P-ATP 掺入法测定模型兔主动脉的 MLCK 活性；动脉经冰冻切片，免疫组化检测动脉内膜 MLCK 的表达，伊红（ HE ）染色观察动脉壁的形态结构； Western blot 检测 AS 兔动脉组织 MLCK 的表达和 ERK 磷酸化水平。 结果 AS 兔模型复制成功，实验兔在高胆固醇（ cholesterol ， Cho ）饮食 4 ， 8 ， 12 周后，与正常对照相比，血清中相关生化指标有逐渐增加趋势（ <> P <0.05 ）；γ -³²P-ATP 掺入法显示动脉组织中 MLCK 的活性呈逐渐增强趋势（ <> P <0.05 ）， Western blot 和免疫组化则显示动脉内皮细胞 MLCK 的表达、 ERK 磷酸化水平亦呈逐渐增强趋势， HE 染色显示主动脉内膜逐渐增厚，细胞间隙逐渐增大；而加喂 MLT 后，动脉组织 MLCK 的表达、 ERK 磷酸化水平及 MLCK 的活性和主动脉内膜通透性均有所下降，而泡沫细胞形成量逐渐增多，至高 Cho 饮食 12 周时则形成了明显的 AS 斑块，加喂 MLT 后，主动脉内膜病变则有一定程度减轻。 结论 MLT 可能通过 ERK/MAPK 通路下调模型兔动脉内皮细胞 MLCK 活性而减轻 AS 斑块的病变程度。     

多聚酶链反应-单链构象多态性分析基因点突变

单链构象多态性(single strand conformation polymorphism,SSCP)是一种简便、敏感有效的鉴定扩增DNA序列变化的技术.相同长度的单链DNA因其序列不同(甚至单个碱基不同),形成的构象相异,电泳时泳动速度不一.PCR产物经变性后进行单链DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳时,靶DNA中若有单个碱基替换等改变时,会出现泳动变位(mobility shift).PCR-SSCP的最主要优点是简单,在不同的系统中突变检出率达70%～95%以上,其主要不足可能是漏检一些突变.作者根据本实验室对多抑癌基因(tumor suppressor gene,TSG)p53突变的检测,介绍PCR-SSCP的实验过程.     

X-性连锁隐性遗传视网膜色素变性致病基因的突变检测

目的 对X-性连锁隐性遗传视网膜色素变性(XLRP)家系进行视网膜GTP酶调节因子(RPGR)、RP2基因的突变检测.方法 抽取XLRP家系先证者、家族成员及正常对照者外周静脉血,提取基因组DNA,聚合酶链反应扩增(PCR),直接测序检测RP2基因和RPGR基因的所有外显子和内含子交界处序列,包括RPGR基因突变热区15号外显子开放阅读框(ORF15).结果 在ORF15开放阅读框区检测到c.3396C>T,c.3430G>A(p.V1144I),RPGR和RP2基因中没有检测到突变.结论 这2个XLRP家系患者的发病可能不是由RPGR和RP2基因突变所致,而由X染色体上的其他基因突变引起.     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对肝癌细胞株HepG2增殖凋亡分化的影响

目的 研究新合成的全反式维甲酸(ATRA)衍生物(4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯)对人肝癌细胞株HepG2体外增殖、凋亡及分化情况的影响.方法 3种浓度(1、5、10 μmol/L)的ATRA衍生物分别处理HepG2细胞,1、2、3、7d后用MTT法检测4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对HepG2细胞增殖的影响;酶动力学法检测γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)比活性和甲胎蛋白(AFP)分泌量变化;流式细胞术分析细胞周期及凋亡情况;Western blot检测HepG2细胞中凋亡相关蛋白的表达量.结果 10 μmol/L的4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯可明显诱导HepG2细胞凋亡,凋亡率达到49%,并且使代表肝细胞恶变的γ-GT比活性、AFP分泌量明显下降,Western blot显示4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯显著抑制Bcl-2、Bcl-xS/L和p-Erk表达.结论 4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯是肝癌细胞HepG2有效的分化诱导剂,并明显促进肝癌细胞凋亡.     

高脂饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠海马CA_3区形态学变化及mortalin蛋白表达的影响

目的 观察载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除(knock-out,KO)及高脂饮食后小鼠海马CA_3区形态学及mortalin蛋白表达的变化,以探讨这些因素与记忆损伤及阿尔茨海默病的关系.方法 10只野生型小鼠予普通饲料喂养作为对照(C)组,10只ApoE KO小鼠予普通饲料喂养作为KO组,10只ApoE KO小鼠予高脂饲料喂养作为KO-HF组.小鼠3个月龄成模后,称重;取血检测血脂;取小鼠脑组织分别进行HE染色、尼氏染色、神经原纤维银染、免疫组织化学染色和计算机图像分析.结果 KO组体质鼍、总胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白胆固醇含量与C组相比明显升高,KO-HF组升高更明显;KO组(0.301±0.031)及KO-HF组(0.261±0.020)尼氏体较C组(0.341±0.035)减少(F=18.068,P<0.05);KO组(0.322±0.060)及KO-HF组(0.391±0.041)mortalin表达较C组(0.256±0.061)升高(F=15.230,P<0.05);KO组及KO-HF组未见明显神经原纤维缠结.结论 ApoE KO及高脂饮食可致小鼠海马CA,区锥体细胞内尼氏体减少,mortalin表达升高,该蛋白的异常表达可能与阿尔茨海默病的发病相关.     

肺动脉粥样硬化兔肺动脉壁骨桥蛋白表达的变化

目的探讨肺动脉粥样硬化模型兔肺动脉壁骨桥蛋白(OPN)表达的变化。方法 24只新西兰兔,随机平均分为正常对照组和高脂模型组,分别给予基础饲料和高脂饲料(基础饲料+1%胆固醇+5%猪油)喂养12周后取血和肺动脉,分析血清中相关脂质成分的变化;HE染色观察肺动脉壁的形态结构;免疫组化法和Western blot检测肺动脉粥样硬化兔肺动脉壁OPN的表达。结果成功建立肺动脉粥样硬化兔模型,高脂模型组在高脂饮食12周后,与正常对照组比较,血清中甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)有明显增加(P<0.05),其中以LDL和LDL/HDL比值升高最明显;HE染色显示高脂模型组肺动脉内膜增厚,细胞间隙逐渐增大,泡沫细胞形成,可见明显的动脉粥样硬化斑块;免疫组化法和Western blot显示高脂模型组肺动脉壁OPN的表达较正常对照组显著增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高脂饮食可导致肺动脉粥样硬化形成,OPN在肺动脉粥样硬化斑块形成中起重要的作用。