16SrDNA结合显色法芯片技术鉴定分枝杆菌的方法学研究

目的建立16SrDNA结合显色法芯片技术(玻璃芯片转尼龙膜显色法)鉴定分枝杆菌的方法。方法利用GenBank中细菌16SrDNA保守区序列,设计两对分枝杆菌属特异性通用引物,采用双重PCR法同时扩增16SrDNA的2个不同片段;根据已知16种分枝杆菌的16SrDNA序列,设计合成对应的特异性寡核苷酸探针。先用通用引物PCR扩增所有标准菌株DNA,PCR产物分别与16种分枝杆菌探针的玻璃芯片杂交,通过尼龙膜显色进行分析。结果应用显色法芯片技术分析16种分枝杆菌标准菌株和5种非分枝杆菌菌株,对其双重PCR、杂交、洗涤条件进行优化。确定双重PCR最佳退火温度为52℃,在该温度下除5株非分枝杆菌外均产生2条DNA片段,大小分别为272～280bp和183～192bp;杂交温度32℃、2×SSC洗涤5min、0.2×SSC洗涤1min,16种分枝杆菌的杂交效果最好,特异性达100%。结论用显色芯片法检测16SrDNA,可准确鉴别16种分枝杆菌。     

反相高效液相色谱法测定维生素C咀嚼片的含量

目的:建立反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定维生素C咀嚼片的含量。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)-甲醇(95∶5);流速为0.6 ml/min;波长为244 nm;柱温为30℃。结果:维生素C在2.098~62.94μg/ml浓度范围内线性关系良好(Y=52 182X-6 092.4,r=1.000 0),辅料无干扰,回收率为97.5%,RSD为1.2%(n=9)。结论:本方法操作简便、快捷,可为该制剂提供严格可控的质量标准。     

血清神经元特异性烯醇化酶对癫痫发作和晕厥的鉴别诊断价值

目的 探讨血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)对癫痫发作和晕厥的鉴别诊断价值.方法 选择癫痫发作患者80例,晕厥患者80例,健康对照者80例,在患者发作性意识丧失后12小时内抽肘静脉血,应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定3组研究对象的血清NSE水平.结果 癫痫组患者血清NSE水平比晕厥组和对照组均明显升高(P＜0.05).晕厥组和对照组NSE值比较差异无统计学意义.癫痫组于癫痫发作后3小时血清NSE水平开始明显升高,6小时达高峰,之后逐渐下降,12小时仍高于正常.通过受试者工作特征(ROC)曲线分析,确定11.55μg/L的血清NSE浓度时曲线下面积最大,其敏感性是0.59,特异性是0.90.结论 癫痫发作后血清NSE水平显著升高,提示癫痫发作后存在脑损伤,测定血清NSE水平可能在癫痫发作与晕厥的鉴别诊断中具有临床指导意义.     

HPLC法测定抗心衰颗粒中黄芪甲苷的含量

目的：用高效液相色谱法测定抗心衰颗粒中黄芪甲苷的含量。方法：以吡啶-苯甲酰氯（2．5：1）为衍生化试剂,采用Supelco ODS C18柱（250mm×4．6mm,5μm）,流动相为甲醇-四氢呋喃-0．2％三乙胺水溶液（90：4：6）,流速为1．2ml·min^-1,检测波长为230nm。结果：黄芪甲苷衍生物进样量在0．03～0．93μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r=0．9999）,平均加样回收率为95．17％,RSD=2．31％（n=6）。结论：该方法简便易行,结果准确,重复性好,可用于测定抗心衰颗粒中黄芪甲苷的含量。     

腮腺改良切口切除腮腺浅叶良性肿瘤临床体会

传统术式的缺陷,降低了术后并发症发生率,值得临床推广.     

HPLC法测定白屑风酊中蛇床子素的含量

目的:建立高效液相色谱法测定白屑风酊中蛇床子素的含量.方法:采用Hedera ODS-3色谱柱(250×4,6 mm,5μm),流动相为甲醇·水(70:30),流速为1.0 mL/min,检测波长为322 nm.结果:蛇床子素的检测浓度在4.33μg·mL-1～138.76μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系y=866Mx+55517(r2=1.0000),平均加样回收率为99.00%,RSD=0.56%(n=6).结论:HPLC法简便易行,结果准确,重现性好,可用于测定白屑风酊中蛇床子素含量.     

PDGF-D对人肝癌细胞增殖及VEGF表达影响研究*

目的:研究血小板源性生长因子D（PDGF-D）对人肝癌细胞株BEL-7402增殖及其血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法:体外培养肝癌细胞株BEL-7402和肝癌旁非瘤性细胞株QSG-7701,采用RT-PCR 方法检测PDGF-D 与PDGFR βmRNA 在BEL-7402和QSG-7701的表达情况;将浓度分别为0（对照）、5、10、20、50、100、200 μ g/mL 的人重组PDGF-DD蛋白加入BEL-7402中,采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测肝癌细胞的生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期变化;半定量RT-PCR 检测VEGF及PDGFR β mRNA 表达情况,ELISA 检测PDGF-DD干预细胞后培养上清中VEGF蛋白的表达情况。结果:PDGF-D 及PDGFR βmRNA 在BEL-7402中高表达,与QSG-7701相比差异有统计学意义（P<0.05）。 PDGF-DD干预细胞后,可促进人BEL-7402增殖,浓度为100 μ g/mL 时达最高峰;细胞周期分布变化,G0/G1 期细胞数减少,S 期细胞数增加,与对照组相比差异有统计学意义;RT-PCR 结果显示,VEGF 及PDGFR β RI 值,实验组（除5 μ g/mL 组外）与对照组相比差异有统计学意义;ELISA 结果显示,加入PDGF-DD各浓度组VEGF蛋白浓度较对照组增高,差异有统计学意义,并呈量效依赖性关系。结论:PDGF-DD能促进BEL-7402的增殖,上调PDGFR β 及VEGF的表达。PDGF-D 及其信号传导系统在肝癌的发生、发展中可能发挥重要的作用,可作为肝癌预后预测指标和治疗靶点。      

人肝癌细胞BEL-7402非常规照射模式生物效应探讨

目的 探讨不同照射模式对人肝癌细胞株BEL-7402生物效应变化影响及其与人肝细胞株QSG-7701放射敏感度差异。方法 6MV X线两种模式照射BEL-7402细胞(包括0、1、2、3、5、7、9、10Gy共8个吸收剂量点,剂量率3Gy/min)：(1)急速照射组,照射完成时间0~4min;(2)模拟三维适形照射组：照射完成时间：12~15min。成克隆分析法计算存活分数,多靶单击数学模型拟合曲线,求出SF2、D0、Dq等参数值;6MV X线单次5Gy照射体外培养的BEL-7402、QSG-7701 细胞, 采用MTT 比色法、流式细胞术测定细胞受照后不同时间存活率、凋亡率、细胞周期。结果 BEL-7402细胞模拟急速照射组和三维适形照射组D0、Dq、SF2值分别为1.78和1.69、1.45和1.54、0.625和0.654;QSG-7701 细胞照后24 h 凋亡率最高(18 %),而BEL-7402细胞照后12h凋亡率最高(32 %),存活率最低(65%),两株细胞照后12 h 凋亡率和存活率差异最大（P<0.01）。结论 三维适形照射模式下分次照射时间延长,生物效应下降;BEL-7402及QSG-7701两株细胞在照后存在放射敏感度差异。     

TNRC9 基因 rs12443621多态与中国人乳腺癌的相关性

 目的 探讨TNRC9 基因 rs12443621多态与中国妇女乳腺癌易感性及临床病理特征的关系。 方法 抽取321例乳腺癌患者和330例健康对照外周血,分离淋巴细胞,抽提基因组DNA,采用聚合酶链反应 连接酶检测反应(PCR-LDR)检测TNRC9 rs12443621基因多态,比较基因型分布和发病风险及临床病理特征的关系。危险度比值比(OR)及95％可信区间(CI)应用非条件Logistic回归分析计算。结果 Rs12443621 GG、AG和 AA基因型在病例组和对照组分别为 35.6%、46.3%、18.1%和 33.1%、48.1%、18.8%。 TNRC9 rs12443621基因型与发病年龄、淋巴结转移情况及雌、孕激素状态均无相关性。结论 TNRC9基因rs12443621多态与中国妇女乳腺癌易感性及临床病理特征无相关性。