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| 16SrDNA结合显色法芯片技术鉴定分枝杆菌的方法学研究 | |
| 引用本文： | 赵源,景奉香,刘志辉,王洁,郑瑞娟,陆俊梅,赵辉,尹俊,胡忠义.16SrDNA结合显色法芯片技术鉴定分枝杆菌的方法学研究[J].中国病原生物学杂志,2008,3(6):404-408. |
| 作者姓名： | 赵源 景奉香 刘志辉 王洁 郑瑞娟 陆俊梅 赵辉 尹俊 胡忠义 |
| 作者单位： | 1. 上海市肺科医院上海市结核重点实验室,上海,200433;内蒙古农业大学生物工程学院 2. 中国科学院微系统与信息技术研究所 3. 广州市胸科医院 4. 上海市肺科医院上海市结核重点实验室,上海,200433 5. 内蒙古农业大学生物工程学院 |
| 基金项目： | 上海市科委重点专项基金 |
| 摘 要： | 目的建立16SrDNA结合显色法芯片技术(玻璃芯片转尼龙膜显色法)鉴定分枝杆菌的方法。方法利用GenBank中细菌16SrDNA保守区序列,设计两对分枝杆菌属特异性通用引物,采用双重PCR法同时扩增16SrDNA的2个不同片段;根据已知16种分枝杆菌的16SrDNA序列,设计合成对应的特异性寡核苷酸探针。先用通用引物PCR扩增所有标准菌株DNA,PCR产物分别与16种分枝杆菌探针的玻璃芯片杂交,通过尼龙膜显色进行分析。结果应用显色法芯片技术分析16种分枝杆菌标准菌株和5种非分枝杆菌菌株,对其双重PCR、杂交、洗涤条件进行优化。确定双重PCR最佳退火温度为52℃,在该温度下除5株非分枝杆菌外均产生2条DNA片段,大小分别为272～280bp和183～192bp;杂交温度32℃、2×SSC洗涤5min、0.2×SSC洗涤1min,16种分枝杆菌的杂交效果最好,特异性达100%。结论用显色芯片法检测16SrDNA,可准确鉴别16种分枝杆菌。 |
| 关 键 词： | 16SrDNA 显色芯片法 分枝杆菌 |
| 文章编号： | 1673-5234(2008)06-0404-04 |
| 修稿时间： | 2007年10月8日 |
Methodology research on identification of Mycobacteria through 16SrDNA combining gene chips |
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| ZHAO Yuan,JING Feng-xiang,LIU Zhi-hui,WANG Jie,ZHENG Rui-juan,LU Jun-mei,ZHAO Hui,YIN Jun,HU Zhong-yi.Methodology research on identification of Mycobacteria through 16SrDNA combining gene chips[J].Journal of Pathogen Biology,2008,3(6):404-408. | |
| Authors: | ZHAO Yuan JING Feng-xiang LIU Zhi-hui WANG Jie ZHENG Rui-juan LU Jun-mei ZHAO Hui YIN Jun HU Zhong-yi |
| Abstract: | |
| Keywords: | 16SrDNA gene chips Mycobacteria |
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