电针委中穴对椎间盘Akt活化及凋亡因子表达的影响

目的观测电针委中穴干预后大鼠腰椎间盘中Akt活化及凋亡因子(Bcl-x L、Bax和Fas、Fas L)蛋白的表达,探讨电针委中穴抑制椎间盘退变的作用机制。方法将30只三月龄健康的SD大鼠随机分为假手术组(n=10)、模型组(n=10)和电针组(n=10)。模型组和电针组通过纤维环穿刺法建立大鼠腰椎间盘退变模型。造模成功4周后,电针组予电针委中穴,连续4周。HE染色观察组织形态,Western blotting检测Akt、P-Akt、Bcl-x L、Bax、Fas、Fas L蛋白表达。结果 HE染色显示,腰椎间盘组织退变程度由轻至重依次是假手术组、电针组、模型组。Akt蛋白表达量三组之间差异无统计学意义(P>0.05);模型组的P-Akt蛋白表达量明显低于假手术组(P<0.01),Bcl-x L蛋白表达量明显低于假手术组(P<0.01),Bax蛋白表达量明显高于假手术组(P<0.01),Fas蛋白及Fas L蛋白表达量均明显高于假手术组(P<0.01)。电针组的P-Akt蛋白表达量明显高于模型组(P<0.01),Bcl-x L蛋白表达量明显高于模型组(P<0.01),Bax蛋白表达量明显低于模型组(P<0.01),Fas蛋白及Fas L蛋白表达量均明显低于模型组(P<0.01)。结论电针委中穴治疗腰椎间盘退变,可能与上调P-Akt蛋白、Bcl-x L蛋白表达,并抑制Bax蛋白、Fas蛋白及Fas L蛋白的表达有关。     

土木香内酯对人骨肉瘤143B细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨土木香内酯（alantolactone，ALT）对人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。方法：用不同浓度（0、4、6、8、10 μmol/L）的ALT处理人骨肉瘤143B细胞后，用结晶紫染色法和MTT实验检测细胞的增殖能力，用划痕愈合实验、Transwell 小室法、Hoechst33258 染色法分别检测细胞的迁移、侵袭和凋亡水平，用qPCR及Western blotting（WB）分别检测细胞中E-cadherin 和N-cadherin、caspase-3、cleaved-caspase-3（c-caspase-3）、PARP和cleaved-PARP（c-PARP）mRNA和蛋白表达水平。用荧光素酶报告基因实验检测T细胞淋巴因子或淋巴增强因子（T cell lymphocyte factor/lymphoid enhancer factor,TCF/LEF）转录活性，qPCR及WB检测β-catenin 及MMP-7、c-Myc mRNA和蛋白表达水平。结果：ALT能够抑制骨肉瘤143B 细胞的增殖、迁移和侵袭，同时促进细胞凋亡（P<0.05 或P<0.01）。经8、10 μmol/L ALT处理后，143B细胞中PARP mRNA和蛋白水平显著上调，c-caspase-3 和c-PARP 蛋白水平表达增加（均P<0.05）；E-cadherin mRNA 和蛋白水平表达上调、N-cadherin mRNA 和蛋白表达水平下调，同时TCF/LEF 转录活性明显下降（P<0.05 或P<0.01），β-catenin、MMP-7 和c-Myc mRNA和蛋白表达水平显著下调（P<0.05 或P<0.01）。结论：ALT通过抑制Wnt/β-catenin 信号通路的活性从而抑制人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移和侵袭，并促进其凋亡。     

RG108 调控 TFPI-2 甲基化/TMPRSS4 表达对 NSCLC 细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨RG108对人非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）A549和H1299细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：体外培养A549和H1299细胞，经不同浓度RG108处理后，采用MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖率、细胞周期和凋亡水平；qPCR和Western blotting（WB）法检测细胞内TFPI-2 mRNA和蛋白的表达及TMPRSS4的表达量，以甲基化特异性PCR和比色法检测细胞中TFPI-2启动子区域甲基化的状态和程度；分别采用siRNA-TFPI-2和pcDNA3.0-TMPRSS4质粒敲减TFPI-2或过表达TMPRSS4，然后检测细胞增殖率及凋亡率的变化。结果：RG108处理后，A549和H1299细胞的增殖率显著降低（均P<0.05）、细胞周期阻滞于G1/S期（均P<0.05）而凋亡率显著增加（均P<0.01），细胞中TFPI-2 mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P<0.01和P<0.05），同时细胞中TFPI-2启动子区域甲基化程度显著降低（均P<0.05）、TMPRSS4的表达也明显减少（P<0.05）。沉默TFPI-2表达后，A549和H1299细胞的增殖水平显著增加（均P<0.05），而转染pcDNA3.0-TMPRSS4质粒则显著降低细胞的凋亡率（均P<0.05）。结论：RG108能够通过抑制TFPI-2甲基化负向调控TMPRSS4表达进而抑制A549和H1299细胞的增殖，并促进其凋亡。     

参附注射液对猪创伤性心脏骤停复苏后肾损伤的保护作用研究

目的探讨参附注射液对猪创伤性心脏骤停复苏后肾损伤的保护作用。方法国产健康雄性白猪21头,采用随机数字表法分为假手术组(Sham组,n=5)、创伤性心脏骤停复苏(TCA组,n=9)和参附组(SFI组,n=7)。Sham组只经历气管插管及动静脉置管,不经历放血、复苏等过程。TCA组匀速释放总血容量的40%,然后经电刺激法室颤5 min,心肺复苏5 min后常规液体复苏治疗。SFI组在TCA组基础上于复苏后5 min进行参附注射液的干预。于放血前10 min、复苏后1、3、6、24 h检测血清TNF-α、IL-6、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平。复苏后24 h经右侧耳缘静脉注射10%氯化钾液20 mL处死猪,迅速获取肾组织标本,应用原位末端标记法(TNUEL法)检测细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的蛋白表达水平。结果TCA组中有8头猪复苏成功,SFI组和Sham组中所有猪复苏成功。与Sham组比较,TCA组血清Cr水平在复苏后24 h、BUN水平在复苏后1、3、6、24 h均明显增高(均P<0.05),TNF-α、IL-6水平在复苏后3、6、24 h明显增高(均P<0.05),复苏后24 h后肾组织细胞凋亡指数及Caspase-3表达增加(均P<0.05)。与TCA组比较,SFI组BUN水平复苏后3、6 h明显降低(均P<0.05),TNF-α、IL-6水平在复苏后3、6、24 h明显降低(均P<0.05),肾组织细胞凋亡指数和Caspase-3蛋白表达有所降低,但差异无统计学意义(均P>0.05)。结论在猪TCA复苏模型中,早期应用参附注射液能够明显减轻复苏后肾损伤。其机制可能与抑制系统炎症反应、减轻细胞凋亡有关。     

双吲哚马来酰亚胺衍生物L6诱导白血病细胞凋亡机制的研究

目的探讨双吲哚马来酰亚胺衍生物L6诱导白血病细胞的凋亡作用及其分子机制。方法采用MTT比色法检测L6对白血病细胞HEL、K562、KG1a的杀伤作用。流式细胞术检测L6对HEL细胞凋亡、周期和分化的影响。Western blotting法检测细胞凋亡相关蛋白的表达。通过体内实验研究L6治疗小鼠白血病的作用效果。结果 MTT比色法结果显示L6对HEL、K562、KG1a细胞具有比阳性对照米哚妥林(PKC412)更显著的抑制活性,半数抑制浓度(IC50)分别为(0.05±0.03)、(0.32±0.01)、(0.19±0.10)μmol/L。L6可以诱导HEL细胞发生凋亡和G2/M期阻滞,诱导HEL细胞向巨核细胞方向分化,且呈剂量效应。Western blotting检测结果表明L6主要通过激活Caspase-3执行细胞凋亡。小鼠肝组织苏木精-伊红(HE)染色显示肝组织内HEL细胞浸润有所减轻,但L6组减轻的效果更明显,表明其可延缓白血病细胞的转移,且效果优于米哚妥林。结论双吲哚马来酰亚胺衍生物L6有较强的抗白血病活性,为新型白血病药物的研发提供参考。     

黄芩苷对肝星状细胞iNOS/PUMA信号通路的影响

目的研究黄芩苷通过iNOS/PUMA信号通路促进肝星状细胞凋亡的作用。方法MTT检测细胞增殖抑制率,Western Blot检测iNOS、PUMA蛋白表达,real-time PCR检测PUMA mRNA表达,一氧化氮检测试剂盒检测NO含量,iNOS抑制剂L-NAME预处理后检测细胞增殖抑制率和PUMA表达,Hoechst 33342核染色检测细胞凋亡。结果50 mM黄芩苷引起肝星状细胞活化诱导性死亡;黄芩苷促进肝星状细胞PUMA mRNA、蛋白表达;iNOS抑制剂L-NAME预处理后PUMA表达降低、细胞凋亡减少。结论黄芩苷能通过iNOS/PUMA信号通路促进肝星状细胞凋亡。