盐酸罗哌卡因对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨盐酸罗哌卡因对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。方法:细胞计数试剂盒（CCK-8）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞增殖能力的影响，并确定盐酸罗哌卡因的用药浓度，流式细胞术检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞周期的影响，Annexin V-FITC/PI法检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞凋亡的影响，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达水平。结果:随着盐酸罗哌卡因用药浓度的升高，MGC-803细胞增殖能力逐渐降低，根据CCK-8实验结果分别筛选出浓度为10、50 μg/ml和100 μg/ml的盐酸罗哌卡因用于后续实验。盐酸罗哌卡因能够明显阻滞细胞周期于G2期，诱导细胞凋亡，抑制Bcl-2蛋白表达，促进Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达。结论:盐酸罗哌卡因能够抑制胃癌MGC-803细胞增殖，阻碍MGC-803细胞周期进程，诱导细胞凋亡，该过程可能与下调Bcl-2蛋白表达，上调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

沉默信息调节因子过表达或谷氨酰胺剥夺对肾透明细胞癌细胞凋亡、增殖的影响

背景与目的：肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma，ccRCC）是最常见的肾癌类型，它与代谢密切相关。探讨沉默信息调节因子4（silent information regulator 4，SIRT4）过表达或谷氨酰胺（glutamine，Gln）剥夺对ccRCC细胞增殖、凋亡的影响。方法：慢病毒构建SIRT4和突变体H161Y过表达的Caki-2细胞株，利用无Gln的培养基来构建Gln剥夺模型，并通过体外增殖活力实验［细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8，CCK-8）］和克隆形成实验来分析两者对Caki-2细胞增殖和生长能力的影响；利用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）水平进而评估Gln代谢对细胞ROS含量的影响；进一步通过线粒体膜电位检测、凋亡检测和蛋白质印迹法（Western blot）检测凋亡相关分子，分析SIRT4过表达以及Gln剥夺对Caki-2细胞凋亡的影响。结果：过表达SIRT4可抑制Gln代谢从而抑制Caki-2细胞增殖，另外还原性物质还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phostate，NADPH）的生成减少能够增加细胞内ROS含量，促进细胞凋亡。而Gln剥夺抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的效果均比过表达SIRT4明显，但长期缺乏Gln将导致细胞无法生长。结论：无论是过表达SIRT4还是Gln剥夺均能抑制ccRCC细胞增殖，促进凋亡。     

钙敏感受体在黄芪注射液防治心肌损伤中的作用

目的研究黄芪注射液对心肌损伤大鼠钙敏感受体表达的影响及黄芪注射液可能的心肌保护作用机制。方法 40只大鼠随机分为4组:空白组、心肌损伤组、黄芪注射液组(20 mL/kg)、黄芪注射液(20 mL/kg)+钙敏感受体激动剂Cinacalcet(3.0 mg/kg)组。腹腔内注射5 mg/kg异丙肾上腺素,制备大鼠心肌损伤模型。Western blot方法检测各组大鼠心肌组织中钙敏感受体的表达以及Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达;TUNEL染色法评价各组大鼠心肌细胞的凋亡;酶联免疫吸附法测定各组大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1β、NF-κB的水平。结果黄芪注射液显著抑制了心肌损伤组大鼠钙敏感受体的表达(P0.01),促进了Bcl-2的表达(P0.01),降低了Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达(P0.01),降低了血清TNF-α、IL-1β和NF-κB的水平(P0.01);钙敏感受体激动剂Cinacalcet可以部分消除黄芪注射液对心肌损伤组大鼠的心肌保护作用。结论黄芪注射液对心肌损伤组大鼠的心肌保护作用可能与抑制钙敏感受体的表达、减少炎症反应、降低心肌细胞凋亡有关。     

微小RNA-30a-5p调控喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的　探讨miR-30a-5p对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖凋亡的影响及其机制。方法 用实时荧光定量PCR检测喉癌及癌旁组织中miR-30a-5p的表达；将Hep-2细胞分为NC组（转染miR-30a-5p mimics阴性对照）、miR-30a-5p组（转染miR-30a-5p mimics）、anti-NC组（转染miR-30a-5p inhibitor阴性对照）和anti-30a-5p组（转染miR-30a-5p inhibitor），MTT实验、平板克隆形成实验和Annexin V-FITC/PI 双染实验分别检测细胞增殖、克隆形成和细胞凋亡情况。双荧光素酶报告基因实验检测miR-30a-5p和SOX9的靶向关系。结果　与癌旁组织表达量（1.00±0.10）相比，喉癌组织中miR-30a-5p的表达水平（0.37±0.03）显著降低（P <0.05）。与NC组相比，miR-30a-5p组细胞活性（48小时：0.42±0.03 vs 0.58±0.04）降低，细胞克隆数（75.36±6.85 vs 136.25±10.50）降低，细胞凋亡率[（23.86±2.21）% vs（9.95±1.16）%]升高（P <0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示，转染SOX9-WT质粒的Hep-2细胞荧光素酶活性明显降低（P <0.05），而转染SOX9-MUT质粒的Hep-2细胞荧光素酶活性无显著变化。anti-miR-30a-5p组对He p -2细胞的作用与miR-30 a -5p组相反。结论  miR-30a-5p可能通过靶向下调SOX9抑制喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖并促进细胞凋亡。     

乙酰紫草素通过PI3K/Akt信号通路诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的研究

目的：研究乙酰紫草素（ASK）对人前列腺癌PC-3细胞的诱导凋亡作用及相关的分子机制。方法：利用CCK-8实验检测ASK对体外培养PC-3细胞的杀伤作用；利用流式细胞术实验检测ASK处理后PC-3细胞凋亡情况；利用Western blotting检测凋亡蛋白和AKT信号通路蛋白的表达。结果：CCK-8实验证明ASK能够以时间和浓度依赖性抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖；流式细胞术实验证明ASK能够诱导人前列腺癌PC-3细胞线粒体依赖性凋亡；Western blotting证明ASK能够有效抑制前列腺癌PC-3细胞中的AKT信号通路。结论：ASK能够有效抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖，并能够有效诱导PC-3细胞发生线粒体依赖性凋亡，其机制可能是通过调控PI3K/Akt信号通路来实现，说明ASK具有一定的抗前列腺癌的潜力。     

N-乙酰半胱氨酸通过AMPK/SIRT1途径抑制缺氧诱导的大鼠脑血管内皮细胞损伤

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对缺氧诱导脑血管内皮细胞损伤的调节作用及分子机制。方法选择SD大鼠分离培养脑血管内皮细胞,分为常氧组、缺氧组、0. 5 NAC组(缺氧+0. 5 mol/L NAC)、1. 0 NAC组(缺氧+1. 0 mol/L NAC)、NAC+8-bAMP组(缺氧+1. 0 mol/L NAC+1. 0 mol/L 8-bAMP)。采用MTS法检测细胞增殖活力,采用TUNEL染色检测凋亡率,采用试剂盒检测氧化应激指标,采用Western blot检测凋亡基因、AMPK/SIRT1通路分子的表达量。结果缺氧组细胞OD490值、T-AOC含量及B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、p-AMP活化蛋白激酶(pAMPK)、去乙酰化酶Sirtuin1(SIRT1)表达量均明显低于常氧组;缺氧组细胞凋亡率、细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)含量及bcl-2相关X蛋白(bax)、细胞色素C(Cyt-C)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的表达量均明显高于常氧组。0. 5 NAC组、1. 0 NAC组细胞OD490值、T-AOC量及Bcl-2、pAMPK、SIRT1表达量均明显高于缺氧组; 0. 5 NAC组、1. 0 NAC组细胞凋亡率、ROS、MDA、8-OHDG含量及Caspase-3、Cyt-C、Bax的表达量均明显低于缺氧组。NAC+8-bAMP组细胞OD490值、T-AOC及Bcl-2、p-AMPK、SIRT1表达量均明显低于1. 0 NAC组; NAC+8-bAMP组凋亡率、ROS、MDA、8-OHDG含量及Caspase-3、Cyt-C、Bax的表达量均明显高于1. 0 NAC组。结论 NAC能够通过激活AMPK/SIRT1通路来减轻氧化应激及线粒体凋亡介导的脑血管内皮细胞损伤。     

生存素调控季节性变应性鼻炎患者鼻黏膜CD4+T细胞凋亡的机制

目的　探讨生存素（Survivin）调控季节性变应性鼻炎（seasonal allergic rhinitis，SAR）患者鼻黏膜CD4+T细胞凋亡的机制。方法　选择2018年5月～2019年5月西安市中医院收治的50例SAR患者为研究组，同期收治的50例单纯进行鼻中隔检查者为对照组，比较两组鼻黏膜组织中Survivin浓度。分离50例SAR患者鼻黏膜CD4+T细胞，将CD4+T细胞分为空白对照组、阴性对照组、Survivin过表达组，空白对照组不作任何处理，阴性对照组转染无关干扰序列，Survivin过表达组转染Survivin过表达质粒，采用流式细胞术检测各组CD4+T细胞凋亡率，采用Western blot检测各组CD4+T细胞中Survivin、磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphoinositide3-kinase，PI-3K）、磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶（phosphorylated ser ine threonine kinase，p-AKT）蛋白表达量。结果  研究组鼻黏膜组织中Survivin浓度较对照组明显升高（P＜0.05）；Survivin过表达组CD4+T细胞中Survivin蛋白表达量明显高于空白对照组、阴性对照组（P＜0.05）；阴性对照组与空白对照组CD4+T细胞中Survivin蛋白表达量比较差异无统计学意义（P＞0.05）；Survivin过表达组CD4+T细胞凋亡率明显低于空白对照组、阴性对照组（P＜0.05）；阴性对照组与空白对照组CD4+T细胞凋亡率比较差异无统计学意义（P＞0.05）；Survivin过表达组CD4+T细胞中PI3K、p-AKT蛋白表达量明显高于空白对照组、阴性对照组（P＜0.05）；阴性对照组与空白对照组CD4+T细胞中PI3K、p-AKT 蛋白表达量比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论　Survivin可能通过激活PI3K/AKT信号通路抑制SAR患者鼻黏膜CD4+T细胞凋亡。