和厚朴酚对人结肠癌细胞及Wnt信号通路的影响及调控作用

目的探讨和厚朴酚(HNK)对人结肠癌细胞及Wnt信号通路的影响和调控作用。方法采用结晶紫染色法和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达检测HNK对人结肠癌LoVo细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞仪和Caspase-3蛋白表达观察HNK对人结肠癌LoVo细胞凋亡的影响;利用荧光素酶报告质粒检测HNK对Wnt信号通路中β-catenin/Tcf4转录活性的影响;蛋白的表达采用Western blot检测。结果 HNK剂量依赖性地抑制细胞增殖(P0.05),并诱导细胞凋亡。荧光素酶报告质粒检测结果显示,HNK在10.0μmol/L时就能明显降低LoVo细胞中β-catenin/Tcf4转录活性(P0.05)。结论 HNK能抑制人结肠癌细胞增殖,诱导其凋亡,该作用可能与HNK抑制Wnt信号通路的转导有关。     

健脾益肺Ⅱ号减少香烟暴露联合脂多糖气道滴注诱导的肺组织凋亡的机制研究

目的:探讨健脾益肺Ⅱ号减少香烟暴露联合脂多糖气道滴注诱导的肺组织凋亡的机制。方法:SD大鼠经香烟烟雾暴露8 w联合脂多糖(LPS)重复滴注(d7,d21),建立COPD大鼠模型。实验分为正常组、模型组、健脾益肺Ⅱ号12. 15 g/kg、24. 3 g/kg组及氨茶碱60 mg/kg组。观察和记录各组大鼠一般状态,HE染色法观察各组大鼠肺部病理改变,Western blot法检测各组大鼠肺组织中Akt、p-Akt、Bax和Bcl-2的蛋白表达,并检测和记录大鼠血液中白细胞总数(WBC)计数和中性粒细胞(NEU),单核细胞(MONO),淋巴细胞(Lymph)的数量。结果:与正常组相比,模型组大鼠一般状态较差,表现为呼吸急促,口鼻分泌物增多,而健脾益肺Ⅱ号组大鼠及氨茶碱组大鼠一般状态相对较好。HE染色结果显示,健脾益肺Ⅱ号(12. 15 g/kg、24. 3 g/kg)可明显改善模型大鼠肺泡结构的破坏,而氨茶碱作用不明显。Western blot结果表明,健脾益肺Ⅱ号12. 15 g/kg明显增加了模型大鼠血液中WBC、NEU和MONO细胞数量,明显降低模型大鼠肺组织p-Akt/Akt比值,并下调模型大鼠肺组织Bax蛋白表达,健脾益肺Ⅱ号24. 3 g/kg明显增加了模型大鼠血液中NEU和MONO细胞数量;氨茶碱对凋亡信号通路无影响。结论:健脾益肺Ⅱ号可通过下调Bax表达,减少肺组织细胞的凋亡和破坏。而下调Bax表达的原因,可能与血液中白细胞数目增多有关。     

黄芪水提物对慢性肾功能衰竭模型大鼠的改善作用及其对MAPK信号通路的影响

目的:考察黄芪水提物对慢性肾功能衰竭(CRF)模型大鼠的改善作用及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,探讨其可能机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为对照组(10只)和造模组(50只),后者灌胃25%腺嘌呤混悬液200 mg/kg(每天1次,连续28 d)以复制CRF模型。造模后,将造模组大鼠随机分为模型组、贝那普利组(阳性对照,2 mg/kg)和黄芪水提物低、中、高剂量组(1.5、3、6 g/kg,按生药量计),每组10只。对照组和模型组大鼠均灌胃等体积生理盐水,各给药组均灌胃相应药物;每天1次,连续28 d。末次给药12 h后,采用比色法检测各组大鼠血清肾功能指标(血肌酐、尿素氮、尿酸)含量,采用酶联免疫吸附测定法检测其血清炎症因子[白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α]水平,分别采用羟胺法、可见分光光度法和硫代巴比妥酸法检测各组大鼠肾组织中氧化应激相关指标[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)]的活性或含量,分别采用实时聚合酶链反应法、Western blotting法检测其肾组织中凋亡相关因子[Bax、Bcl-2、胱天蛋白酶3(Caspase-3)]mRNA以及MAPK信号通路相关调控蛋白[p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)]的表达情况。结果:与对照组比较,模型组大鼠血清肾功能指标含量、炎症因子水平以及肾组织MDA含量、Bax与Bcl-2 mRNA相对表达量的比值(Bax/Bcl-2)、Caspase-3 mRNA的相对表达量、MAPK信号通路相关调控蛋白磷酸化产物(p-p38 MAPK、p-JNK、p-ERK1/2)的相对表达量均显著升高,肾组织SOD、CAT活性均显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠血清肾功能指标含量、炎症因子水平以及肾组织Bax/Bcl-2、MAPK信号通路相关调控蛋白磷酸化产物的相对表达量,贝那普利组和黄芪水提物中、高剂量组大鼠肾组织MDA含量、Caspase-3 mRNA相对表达量均显著降低;贝那普利组和黄芪水提物中、高剂量组大鼠肾组织SOD、CAT活性均显著升高(P<0.05或P<0.01);且贝那普利组MDA含量、Bax/Bcl-2均显著低于黄芪水提物高剂量组(P<0.05)。结论:黄芪水提物对CRF模型大鼠具有一定的改善作用,可抑制其炎症反应、氧化应激和细胞凋亡,其作用机制可能与抑制MAPK信号通路相关调控蛋白的表达有关。     

心房肌细胞凋亡及凋亡相关基因在房颤心房重构中的意义

目的 分析风湿性心脏病患者房颤发生与发展的特点，探讨心房肌细胞凋亡以及凋亡相关基因表达变化在房颤心房重构中的意义。 方法 统计分析瓣膜置换手术25例患者临床资料。根据心电图资料分为窦性心律组（10例）和房颤心律组（15例）；术中取右心房组织，行Masson染色及天狼猩红染色，计算胶原容积分数（CVF）评价心房纤维化情况；运用TUNEL染色，荧光显微镜下观察两组细胞凋亡差异；用RT-qPCR检测两组样本凋亡相关基因的表达。 结果 与窦律组比较，房颤组患者LADd和RADd显著增大（均P < 0.01），LVEF显著降低（P < 0.01）、CVF显著增大（P<0.05）、细胞凋亡率显著增高（P < 0.05）、TP53，BAX，Slug-SNAI2基因表达率显著增高（P < 0.05），而BCL-2，BPM4的表达显著降低（P < 0.05）。Pearson相关分析显示LADd、RADd、心房细胞凋亡率和CVF之间存在相关性。 结论 心房细胞的凋亡在心房重构纤维化形成过程中发挥重要作用，其机制与心肌细胞死亡后纤维组织代替性修复有关，调控心房肌细胞凋亡有望改善心房纤维化的形成。     

TiO_2光动力疗法治疗鼻咽癌移植瘤模型的初步研究

目的:观察TiO_2光动力疗法对鼻咽癌移植瘤的治疗作用,研究其对肿瘤的抑制作用。方法:建立鼻咽癌移植瘤模型,随机分组,观察注入纳米TiO_2悬液的移植瘤组织在330～400 nm波长紫外光辐照下的组织病理学与超微结构的变化及肿瘤细胞凋亡情况。结果:光镜和透射电镜下观察,光动力治疗后治疗组移植瘤组织的局部炎性反应、坏死灶形成及瘤细胞凋亡情况均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),程度随TiO_2浓度递增而增强。结论:TiO_2光动力疗法通过介导炎性反应和诱导细胞凋亡发挥抑癌效果,这可能也是其治疗鼻咽癌的重要机制之一,移植瘤模型实验提示其是治疗鼻咽癌的可行手段。     

虫草提取物CS-4对他克莫司所致大鼠胰腺和肾脏损伤的保护

目的探讨冬虫夏草(CS)-4提取物对他克莫司(TAC)所致胰腺和肾脏损伤的保护作用及分子机制。方法雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠皮下注射TAC(1.5 mg·kg~(-1)·d~(-1))建立TAC肾毒性模型16只,肾毒性模型中随机选8只大鼠给予CS治疗(5 g·kg~(-1)·d~(-1),灌胃)4 w。检测大鼠的血糖、胰岛素水平、肾功能、24 h尿蛋白排泄率、8-羟基脱氧鸟苷(8OHdG);采用免疫组化和免疫印迹法分别检测胰腺胰岛素、炎性介质、致纤因子、细胞凋亡相关基因的表达。结果CS明显减少胰腺细胞凋亡、保护胰岛数量,其结果是血糖下降和胰岛素水平上升;此外,CS改善肾功能和肾小管间质纤维化,减少尿蛋白排泄率和血尿8-OHdG水平。在分子水平上,CS下调炎性介质和致纤因子的表达,调节细胞凋亡调控基因的表达。结论 CS对TAC诱导的胰腺和肾脏损伤具有降糖、抗炎、抗纤维化等保护作用。     

熊果酸对糖尿病大鼠心脏缺血再灌注损伤的作用及机制

目的探讨熊果酸(UA)对糖尿病大鼠心脏缺血再灌注(I/R)损伤的作用及潜在机制。方法通过腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。2 w后糖尿病大鼠随机均分为假手术组(Sham组)、心脏I/R损伤组和UA低、中、高剂量组。通过结扎冠状动脉左前降支构建心脏I/R损伤模型。测定各组大鼠乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、心肌梗死面积、心脏收缩和舒张功能、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6,IL-1β和Bcl-2、Bax的表达和凋亡情况。结果与Sham组相比,I/R损伤组心肌梗死面积明显增加,CK、AST、LDH、p-AKT、PI3K、IL-6、IL-1β、TNF-α、Bax表达及凋亡明显上调,而心脏收缩和舒张功能明显降低,Bcl-2表达明显减少。与I/R损伤组相比,UA各剂量组心肌梗死面积明减少,CK、AST、LDH、p-AKT、PI3K、IL-6、IL-1β、TNF-α、Bax的表达及凋亡明显下调,而心脏收缩和舒张功能明显增强,Bcl-2表达明显增加;三组之间AKT表达无差异。结论 UA预处理可通过减轻炎症和下调凋亡减轻糖尿病大鼠心脏I/R损伤,其作用机制与抑制AKT/PI3K信号通路激活相关。     

地榆对子宫内膜癌细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的研究地榆对子宫内膜癌细胞凋亡及炎症因子表达的影响。方法体外培养人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,分别用浓度为0.25、1.00、4.00 mg/ml的地榆提取液作用于对数期生长的子宫内膜癌细胞,分别作为地榆低浓度、中浓度、高浓度组,正常培养的细胞为对照组,采用噻唑蓝(MTT)法检测地榆对子宫内膜癌细胞的生长抑制作用,采用流式细胞术测定子宫内膜癌细胞的凋亡情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测子宫内膜癌细胞分泌的白细胞介素(IL)-1β、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,采用Western印迹测定子宫内膜癌细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、促凋亡因子Bax蛋白的表达水平。结果经不同浓度的地榆作用于子宫内膜癌HEC-1-B细胞后,细胞生长明显受到抑制,流式细胞检测结果显示,低浓度、中浓度、高浓度组细胞凋亡率均明显高于对照组,且随着地榆浓度的增加,细胞生长抑制率和凋亡率也增加,差异有统计学意义(P0.05);地榆作用后的子宫内膜癌细胞中凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3和Bax表达水平上调,炎症因子IL-1β、IL-8、TNF-α的表达下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论地榆可以抑制子宫内膜癌细胞生长,诱导细胞凋亡,下调细胞中相关炎症因子的表达。