乙型肝炎病毒preS 2蛋白在Hela细胞中的表达

[目的]构建乙型肝炎病毒含3’末端缺失的preS／S基因表达载体并转染细胞，观察所构建载体在体外培养的真核细胞中的表达．[方法]采用基因重组技术构建含有CMV启动子及preS／S基因（adr亚型）开放阅读框的preS／S基因表达载体pcDNA3．1-preS／St，并将其转染至Hela细胞，利用免疫细胞化学方法检测其表达情况．[结果]免疫细胞化学检测发现preS2蛋白可在Hela细胞中表达．     

糖皮质激素受体基因片段的克隆和目标载体的构建

构建针对糖皮质激素受体基因第２外显子的目标载体,为获糖皮质激素受体基因缺陷型胚胎干细胞准备条件。方法通过限制性酶切对ＤＮＡ片段进行了结构分析,克隆相应ＤＮＡ片段进行ＤＮＡ序列测定,利用ｐＴＫ－Ｎｅｏ质粒框架和同源片段构建载体。     

位点特异性重组系统及其应用

位点特异性重组系统可在重组酶参与下介导特异性位点间的 DNA发生切除、整合或易位 ,该系统可克服传统基因工程技术的一些局限性 ,对基因进行定时、定位的改造 ,并可进行大片段的染色体改造工程。应用较多的有 Cre/ lox P、FL P/FRT和 R/ RS系统 ,本文主要介绍了这三个系统的结构特点并以 Cre/ lox P系统为例介绍其在转基因小鼠、基因剔除小鼠、基因替换小鼠和染色体工程中的应用 ,最后提出了全面应用该系统有待解决的一些问题     

HBV病毒蛋白在C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU小鼠中的表达

目的:分析C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU"3号"品系转基因小鼠血清和组织中病毒蛋白的表达及其特征.方法:以138只F6～F17代C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU"3号"品系的转基因小鼠为研究对象,采用血清ELISA检测和免疫组织化学的方法分析病毒蛋白在转基因小鼠中的表达.结果:转基因小鼠血清中HBsAg和HBeAg的阳性率分别为55.18%和25.00%,血清中HBsAg的出现时间多在3个月龄之前(占93.33%),且持续时间在9个月以上(占95.56%),个体之间具有一定差异.转基因小鼠肝组织中至少可检测到一种病毒蛋白,HBsAg、HBcAg和X蛋白的检出率分别为85.82%、58.24%和49.61%.HBsAg分布于肝细胞质中,HBcAg和X蛋白既可分布于肝细胞核中,也可分布干肝细胞质中.HBsAg的表达具有细胞特异性(门管区周围的肝细胞)和组织特异性(肝和肾),X蛋白除在肝脏和肾脏中表达外,还可在脑组织中表达.结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU"3号"品系转基因小鼠血清和肝肾等组织中有病毒蛋白的表达,病毒蛋白的分布具有组织细胞特异性和个体差异.     

白蛋白/细胞角蛋白19启动子调控的红绿双色荧光蛋白报告载体的构建及其在肝干细胞分化研究中的应用

目的:利用报告基因监测肝干细胞的分化走向.方法:通过PCR从小鼠基因组中克隆了细胞角蛋白19启动子片段,构建了细胞角蛋白19启动子调控的绿色荧光蛋白(pCK19 EGFP)和白蛋白启动子调控的红色荧光蛋白报告载体(pAlbDsRed),并利用报告载体标记的肝干细胞(liver epithelial progenitor cells,LEPCs)观察了悬浮培养时LEPCs的分化去向.结果:白蛋白/细胞角蛋白19启动子调控的红绿双色荧光蛋白报告载体可以实时地显示肝原始细胞在不同的诱导环境下的分化走向.结论:双色荧光蛋白报告载体的成功构建为研究LEPCs的分化、筛选可诱导LEPCs定向分化的分子提供了便捷的工具.     

谈研究生细胞生物学课程的改革

为使医学研究生建立利用和改造细胞的现代细胞物理学知识体系和技术能力,我们将研究生的细胞生物学课程改为细胞生物学与细胞工程课程,从教学的主导思想、教学内容、教学方式等方面做了一系列的改革,使学生学完该课程后既能掌握该学科的基础知识和基本技能,又能了解学科发展的前沿知识和高新技术,并将所学的知识运用到自己的专业领域中去,进行一些创新性的工作.     

Ehlers-Danlos综合征(EDS)的一种特殊类型

Ehlers-Danlos综合征在临床上以皮肤和关节的异常为其特征。主要表现为关节过度伸屈,皮肤过度松弛,易形成皮下血肿及皮肤变脆。到1978年,根据其临床、遗传及生化特征已分为八型。本文报告两侧特殊的Ehlers—Danlos综合征,这两个患者均男性,一个15岁,另一个18岁,身高分别为145cm和149cm,他们都有如下体征:智能低下,皱纹脸,毛发卷细,眉毛和睫毛稀少,眼间距增宽,牙周炎,多发性骨髓炎,招风耳,鸡胸,翼状     

基于肝干细胞的肝癌生物学研究进展

肝干细胞是一类具有自我更新能力和分化为肝细胞与胆管细胞能力的肝原始细胞.而原发性肝癌是我国死亡率居第2位的恶性肿瘤.近年在中晚期肝癌中发现了具有干细胞特性的细胞(即肝癌干细胞)存在,并认为肝癌干细胞自我更新机制的失调可能是原发性肝癌发生的因素之一,这种细胞可能与肝癌细胞增殖的维持、转移、放疗和化疗抵抗等现象有关.本文就肝干细胞和肝癌干细胞在原发性肝癌的发生、转移和治疗抵抗中发挥的作用进行综述.     

小鼠遗传型多囊肾病1基因组片段的克隆

目的　克隆小鼠的遗传型多囊肾病1 基因(polycystic kidney disease 1,PKD1),为产生PKD1 基因缺陷小鼠品系准备条件。方法　以正常小鼠基因组DNA 为模板、扩增小鼠PKD1 基因部分序列为探针,应用噬斑原位杂交技术筛选129SvTer小鼠基因组DNA 文库,并用Southern 杂交、亚克隆及测序等方法鉴定所得克隆。结果　筛选得到1 个阳性克隆,并证实了所得序列与基因库收录的序列一致。结论　已克隆到含有PKD1 基因目的区域的基因组DNA 片段,其结构符合构建目标载体的要求,为建立小鼠PKD1 胚胎干细胞基因打靶动物模型奠定了基础